Transcript Ek Dosyayı İndir

ALETLİ ANALİZ YÖNTEMLERİ
HPLC ‘nin İLAÇ ENDÜSTRİSİNDE
KULLANIMI
ALİ BULUT
METEHAN EMİN YILMAZ
ÜMÜS ZORLU
İÇİNDEKİLER
• HPLC’nin TANIMI
• HPLC’nin TERCİH AMACI
• HPLC’nin UYGULAMALARI
• HPLC’nin ÇALIŞMA PRENSİBİ
• HPLC’nin KULLANIM ALANLARI
• HPLC’nin İLAÇ ENDÜSTRİSİNDEKİ KULLANIMI
• ÖRNEKLER
HPLC’nin TANIMI
* Kimyasal ayırma, saflaştırma, tayin etme
amacıyla en yaygın kullanılan nitel ve nicel analiz
cihazıdır.
Numunedeki maddelerin, tayin
edilecek moleküllerin çözeltilerinin özel dolgulu
kolonlardan geçirilerek, yüksek basınç altında
birbirlerinden
ayrılmalarını
ve
bunların
dedektörde miktarlarının ölçülmesini sağlayan
cihazdır.
HPLC’yi NEDEN TERCİH EDERİZ
• HPLC kolonu, rejenerasyon olmaksızın pek çok kez
kullanılabilir.
• Böyle kolonlarda gerçekleştirilen ayırma, eski
yöntemlerle elde edilenden çok daha çeşitlidir.
• Bu teknik kullanıcının becerisine daha az
bağımlıdır ve tekrarlanabilirlik daha yüksektir.
• Nicel analiz amaçları için de kullanılabilir.
• Analiz süresi çok kısadır.
• Duyarlık çok yüksektir, 10 µg lık bir örnek bile,
floresans veya elektron yakalama dedektörleri
kullanılarak tayin edilebilir.
HPLC UYGULAMALARI
• PREPARATİF
HPLC; bileşiklerin izolasyonu ve
saflaştırılması için kullanılır.
• KİMYASAL AYIRMALAR; bir kolon ve hareketli fazda
bileşiklerin farklı güç hızlarına göre ayrılması temeline
dayanır.
• SAFLAŞTIRMA; hedef bileşiğin diğer bileşikler veya
kontaminantlardan ayrılması ve ekstraksiyonudur. Her
bir bileşik belirli kromatografik koşullar altında
karakteristik bir pike sahiptir. Ayrılması istenen
bileşenin ihtiyaçlarına göre araştırıcının koşulları
optimize etmesi gerekmektedir.
• HPLC günümüzde kimya, biyokimya,
biyoteknoloji, farmakoloji, tıp kimyası, bitki
kimyası, tarım ve kimya mühendisliğini içeren
alanlarda ayırma ve analiz için vazgeçilmez bir
araç olarak kabul edilmektedir. Bilhassa diğer
kromatografik tekniklere uygun olmayan
bileşiklerin ayrılması ve analizi için uygundur.
Kısaca HPLC Uygulama Analizi İlerleyişi:
HAL
Cihaza verilecek numunenin sıvı şeklinde verilmesi
gerekir. Katı örnekler, hem sabit faza hem de hareketli
faza uygun bir sıvı içerisinde çözülerek cihaza verilir.
MİKTAR
1 ile 100 μL arası enjeksiyon yapılır (genelde 5-10 μL);
Miktar, algılayıcının (dedektör) analite olan
hassasiyetine ve dinamik aralığa bağlı olarak
değiştirilebilir.
HAZIRLANMASI
Örnek hazırlama şu evreleri içerebilir: Seyreltme, ön
deriştirme, filtrasyon, ekstraksiyon, ultrafiltrasyon, ya
da türevlendirme.
HPLC nin ÇALIŞMA PRENSİBİ
ANALİZ SÜRESİ
Analiz süresi 5 dakika ile 2 saat arası
değişmektedir (genellikle 10-25 dk). Örnek
hazırlama süresi ise örnekten örneğe
değişkenlik gösterir. Bazı örneklerin
hazırlaması analizinden daha fazla zaman
sürer.
HPLC’nin KULLANIM ALANLARI
• İLAÇ
• GIDA
• OTOMOTİV
• PETROKİMYA
• KİMYA
• ÇEVRE
UYGULAMA ALANI
KARIŞIMLAR
İlaçlar
Antibiyotikler, sedafitler, steroitler,
analjezikler
Biyokimyasallar
Aminoasitler,k.hidratlar,proteinler,lipitler
Gıda Maddeleri
Suni tatlandırıcılar, antioksidanlar,
alfatoksinler
Endüstriyel
Kimyasallar
Çok halkalı aromatikler, boyalar, yüzey aktif
maddeler
Kirleticiler
Pestisitler, herbisitler, fenoller
Uyuşturucular
Uyuşturucu ilaçlar, zehirler, narkotikler
Klinik Tıp
Safra asitleri, ilaç metabolitleri, üre
ekstrakları
• İLAÇ
İlaç uygulamaları AR-GE ve kalite
kontrol aşamalarında yapılan safsızlık
analizleri, ağır metal, etken madde,
organik solvent ve kalıntı solvent
miktar tayini, temizlik validasyonu,
çözünürlük çalışmaları, stabilite
testleri, stereoizomer gibi testleri
kapsamaktadır.
BALDA ANTİBİYOTİK KALINTISI
SORUNU
• Ülkemizde üretilen ballarda antibiyotik kalıntısı
durumunun incelenmesi hedeflenmiştir. 2006 yılının
ilk altı ayı içerisinde 22 farklı yöreden direkt
arıcılardan toplanan numuneler üzerinde tetrasiklin,
streptomisin ve sulfa grubu antibiyotiklerin kalıntıları
araştırılmıştır.Analizler, ELISA ve yüksek performanslı
sıvı kromatografi (HPLC) yöntemleri ile
gerçekleştirilmiştir. Sonuç olarak arıcıların %1015’inin yasal olmamasına karşın halen, yavru
çürüklüğü hastalığına karşı bu antibiyotikleri içeren
ilaçlar kullandığı tespit edilmiştir.
YUMURTALARDAKİ KLORAMFENİKOL
ve FURAZOLİDON İLAÇ KALINTILARININ
ARAŞTIRILMASI
• Hplc yöntemiyle kloramfenikol ve furazolidon
ilaç kalıntıları araştırıldı.Analiz edilen yumurta
numunelerinin hiçbirisinde kloramfenikol
bulunmazken %34’ün de furazolidon kalıntısı
tespit edildi.Belirlenen furazolidon
kalıntılarının insan sağlığını olumsuz yönde
etkileyebileceğinin kanısına varıldı.