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生物学 第6回 転写と翻訳 和田 勝 1 DNAからタンパク質へ セントラルドグマ DNAは核から外 に出ないので、 DNAとタンパク合 成の間を取り持つ のがメッセンジャ ーRNA(mRNA) です。 2 サイトゾール DNA リボソーム 核 mRNA 細胞膜 粗面小胞体 ゴルジ装置 3 原料のアミノ酸 DNAからタンパク質へ 1)DNAからmRNAへ この過程は、図書室で必要な本(染 色体)を広げ、必要な箇所(遺伝子) の塩基配列をmRNAへ書き写す(コ ピーする)過程です。 この過程を転写(transcription)と呼 びます。 4 DNAからタンパク質へ 2)mRNAからタンパク質へ この過程は、コピーしたテープ( mRNA)を、プレーヤー(リボソーム) にかける過程です。もとの塩基配列 に従ったタンパク質が生まれます。 この過程を翻訳(translation)と呼び ます。 5 ここでDNAとRNAの違い DNA 1)糖はデオキシ リボース RNA 1)糖はリボース 2)塩基はATCG 3)二本鎖 2)塩基はAUCG 3)一本鎖 細胞は3種類のRNAを使っています。1つ目は すでに出てきたmRNA、2つ目はリボソームの建 築材料であるrRNA、3つ目がアミノ酸の運び屋 6 tRNA 転写の過程 それでは、転写の過程をお話しまし ょう。 我々は、情報を書き写すためはコピ ー機を使ったり、鉛筆で筆写したりし ますが、核の中では、酵素タンパク 質がこの役目を果たします。 酵素の名前は、RNAポリメラーゼで す。 7 ここでもう一度DNAの構造 DNAは、デオキシリボースという 糖(Sugar)とリン酸(Phosphate)の 骨格から、塩基(Base)が突き出た 構造でしたね。それが2本、向かい あっています。 8 DNA分子を簡単に書くと 5’ PSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPS 3’ A T C G A T C G A T C G A T T A G C T A G C T A G C T A 3’ SPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSP 5’ この間が水素結合 (この図では省略し てある) 9 DNAの構造 ヌクレオシドを思い出してください。 + = 5’ このようにデオキシ リボースのC原子に 1’から5’までの番 号が割り当てられ ます。 10 4’ 3’ 1’ 2’ デオキシアデノシン (ヌクレオシドの一 つ) DNAの構造 3’と5’にOHが あることに注目 してください。こ の3’の水酸基 と次のヌクレオ シドの5’の水酸 基をリン酸がつ なぎます。 5’ 4’ 3’ 1’ 2’ 11 DNAの構造 リン酸と デオキシ リボース の水酸基 の間のエ ステル結 合(脱水 縮合) 5’ 4’ 3’ 1’ 2’ 5’ 12 DNAの構造 ホスホジ エステル 結合と呼 ぶ。 13 ポリメラーゼは 5’ PSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPSPS 3’ A T C G A T C G A T C G A T ポリメラーゼは空いている3’に次 のデオキシリボースの5’のOHを つないでいく反応しか触媒できな いのです。また合成するためには 参照する鋳型が必要です。したが って、鋳型は3’→ 5’になります。 14 転写の過程 (5') ATGGAATTCTCGCTC(3')(コード鎖、sense strand) (3') TACCTTAAGAGCGAG(5')(鋳型鎖、antisense strand) (5‘) AUGGAAUUCUCGCUC(3’)(転写された一本鎖RNA) RNAの鎖の伸長は必ず5’→3’の方 向(酵素の性質による) 15 RNAポリメラーゼ 転写は酵素であるRNAポリメラーゼ によって触媒 16 RNAポリメラーゼ RNAポリメラーゼは、DNAの二重ラ センをほどきながら、二本鎖のうち鋳 型となる鎖の塩基の配列を読んで、こ れと相補的な塩基をもったヌクレオチ ドを取り込み結合していきます。 RNAの鎖の伸長は必ず5’→3’の方 向 17 転写(頭だし)の過程 DNAの塩基配列にはアミノ酸配列を コードしている領域と、転写の調節に 関与する領域があります。 開始コドン(ATG)のすぐ上流には、プ ロモーターという領域があります。 真核生物では、プロモーター領域に TATAAAという配列が共通して存在し ます(開始コドン上流30塩基を中心)。 18 転写(頭だし)の過程 この領域をTATA boxとか ホグネス配列とか呼ぶ。 TATA boxに転写因子(タ ンパク質)が結合。 これを目印にRNAポリメ ラーゼ(やその他の転写 因子)が結合。 19 転写の方向 プロモーターはRNAポリメラーゼの着 地点であるとともに、この酵素がDNA 上を滑っていく方向も規定します。 したがって、二本鎖のうちのどちらが 鋳型鎖になるかは、プロモーターの配 置によって決まることになります。 20 転写の過程 転写の過程を示す動画を見てみましょ う。 21 翻訳の過程 それでは、翻訳の過程をお話しまし ょう。 すでにお話したように、翻訳とは mRNAをリボソームという塩基語→ アミノ酸語変換機にかけて、タンパク 質をつくる過程です。 材料であるアミノ酸はどのように調 達するのでしょうか。 22 材料の調達 アミノ酸をリボソームに運ぶ、運び屋 が必要です。 それがRNAの一つであるtRNA( transfer RNA、転移RNAとか運搬 RNA)です。 23 tRNAの構造 tRNAが塩基語とアミノ酸語のアダプタ ーとして機能するためには、コドン認 識部位とアミノ酸連結部位が必要。 クローバ型モデル 24 tRNAの構造 特定のアミノ酸を3’に結合 一本鎖内に水素結合 アミノ酸に対応したアンチコドン 25 tRNAの構造 実際の形は、下の図のようなL字型 をしていて、右端にアミノ酸を結合、 下端にアンチコドンがあります。 26 tRNAの構造 3‘末端は CCAで、A にアミノ 酸が結合 アンチコド ン部は規 則的な3 段構造。 27 tRNAにアミノ酸を付加 28 アミノアシ ルtRNA 合成酵素 が、特定 のアミノ 酸を対応 するtRNA に付加し て、サイト ゾール中 に用意し ておく リボソームの構造 29 翻訳の場であるリボソーム リボソームはRNAの一つである rRNA(ribosomal RNA、リボソーム RNA)とタンパク質の複合体です。 細胞のなかで働いている、マイクロ マシーンの一つといえるでしょう。 30 リボソームの構造 31 リボソーム形成には、、、 1)核小体 で転写さ れた rRNA 2)サイト ゾールで 合成され たタンパ ク質が核 へ 3)タンパ ク質とr RNAが一 緒になっ て 32 リボソームの模式図 33 翻訳の過程 翻訳の過程を示す動画を見てみましょ う。 34 翻訳の開始 mRNA + リボソーム小顆粒 メチオニンtRNA (P部位に座る) リボソーム大顆粒 隣席のA部位に対応するアミノアシル tRNAが座り、翻訳開始 35 翻訳の開始 36 ペプチド鎖の伸長 37 翻訳の終了 38 翻訳の終了 mRNA・リボソーム複合体 リボソーム大顆粒 リボソーム小顆粒 大小顆粒はリサイクルされる 完成したタンパク質 39 サイトゾール DNA リボソーム 核 mRNA 細胞膜 粗面小胞体 ゴルジ装置 40 原料のアミノ酸 二つの合成経路 41 サイトゾールでは リボソーム がmRNAで つながって いる。左の 方のリボ ソームから はペプチド 鎖が延びて いるのが見 える。 42 粗面小胞体では バーは 50μm 43 分泌性タンパク質の合成 先頭にシグナルペプチドが付加している。 膜タンパク質の場合も同じ。 44 細胞内のソーティング リボソーム →サイトゾール →粗面小胞体 →顆粒 →細胞膜 核 ミトコンドリア 葉緑体 ペルオキシゾーム 次のスライドに模式図 45 46 細胞内のソーティング リボソーム →サイトゾール →粗面小胞体 →顆粒 →細胞膜 核 ミトコンドリア 葉緑体 ペルオキシゾーム 次のスライドに模式図 47 分泌タンパク質の一次構造 翻訳直後の、卵白リゾチームの一次 構造は次のとおり 1 16 31 46 61 76 91 106 121 136 1 Met Ala Lys Trp Thr Ile Arg Ile Asn Thr 2 Arg Leu Arg Val Asn Asn Asn Thr Gly Asp 3 Ser Gly His Cys Arg Ser Leu Ala Met Val 4 Leu Lys Gly Ala Asn Arg Cys Ser Asn Gln 5 Leu Val Leu Ala Thr Trp Asn Val Ala Ala 6 Ile Phe Asp Lys Asp Trp Ile Asn Trp Trp 7 Leu Gly Asn Phe Gly Cys Pro Cys Val Ile 8 9 10 11 12 13 14 15 Val Leu Cys Phe Leu Pro Leu Ala 15 Arg Cys Glu Leu Ala Ala Ala Met 30 Tyr Arg Gly Tyr Ser Leu Gly Asn 45 Glu Ser Asn Phe Asn Thr Gln Ala 60 Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Leu Gln 75 Asn Asp Gly Arg Thr Pro Gly Ser 90 Cys Ser Ala Leu Leu Ser Ser Asp 105 Ala Lys Lys Ile Val Ser Asp Gly 120 Ala Trp Arg Asn Arg Cys Lys Gly 135 Arg Gly Cys Arg Leu マゼンダ色がシグナルペプチド 48 卵白リゾチーム 1 16 31 46 61 76 91 106 121 1 Lys Gly Ala Asn Arg Cys Ser Asn Gln 2 Val Leu Ala Thr Trp Asn Val Ala Ala 3 Phe Asp Lys Asp Trp Ile Asn Trp Trp 4 Gly Asn Phe Gly Cys Pro Cys Val Ile 5 Arg Tyr Glu Ser Asn Cys Ala Ala Arg 6 Cys Arg Ser Thr Asp Ser Lys Trp Gly 7 Glu Gly Asn Asp Gly Ala Lys Arg Cys 8 Leu Tyr Phe Tyr Arg Leu Ile Asn Arg 9 Ala Ser Asn Gly Thr Leu Val Arg Leu 10 11 12 Ala Ala Met Leu Gly Asn Thr Gln Ala Ile Leu Gln Pro Gly Ser Ser Ser Asp Ser Asp Gly Cys Lys Gly 13 Lys Trp Thr Ile Arg Ile Asn Thr 14 15 Arg His 15 Val Cys 30 Asn Arg 45 Asn Ser 60 Asn Leu 75 Thr Ala 90 Gly Met 105 Asp Val 120 リゾチーム(lysozyme)は、細菌の細胞 壁を構成するN-アセチルムラミン酸と N-アセチルグルコサミン間の結合を切 断する。 49 リゾチームの比較 eggwhite human 1 11 21 31 41 MRSLLILVLC FLPLAALGKV FGRCELAAAM KRHGLDNYRG YSLGNWVCAA MKALIVLGLV LLSVTVQGKV FERCELARTL KRLGMDGYRG ISLANWMCLA eggwhite Human 51 61 71 81 91 KFESNFNTQA TNRN-TDGST DYGILQINSR WWCNDGRTPG SRNLCNIPCS KWESGYNTRA TNYNAGDRST DYGIFQINSR YWCNDGKTPG AVNACHLSCS eggwhite human 101 111 121 131 141 ALLSSDITAS VNCAKKIVSD GNGMNAWVAW RNRCKGTDVQ AWIRGCRL ALLQDNIADA VACAKRVVRD PQGIRAWVAW RNRCQNRDVR QYVQGCGV □部分はシグナル、赤字のアミノ酸が異なる 活性部位:E:グルタミン酸、D:アスパラギン酸 SS結合:24-145(146), 48-133(134), 82(83)-98(99), 94(95)-112(113) 50 ヒトリゾチーム 1 1 Lys 16 Gly 31 Leu 46 Asn 61 Ser 76 Ala 91 Asp 106 Ile 121 Val 2 Val Met Ala Ala Arg Cys Ala Arg Arg 3 Phe Asp Lys Gly Tyr His Val Ala Gln 4 Glu Gly Trp Asp Trp Leu Ala Trp Tyr 5 Arg Tyr Glu Arg Cys Ser Cys Val Val 6 Cys Arg Ser Ser Asn Cys Ala Ala Gln 7 Glu Gly Gly Thr Asp Ser Lys Trp Gly 8 Leu Ile Tyr Asp Gly Ala Arg Arg Cys 9 Ala Ser Asn Tyr Lys Leu Val Asn Gly 10 11 12 Arg Thr Leu Leu Ala Asn Thr Arg Ala Gly Ile Phe Thr Pro Gly Leu Gln Asp Val Arg Asp Arg Cys Gln Val 13 Lys Trp Thr Gln Ala Asn Pro Asn 14 15 Arg Leu 15 Met Cys 30 Asn Tyr 45 Ile Asn 60 Val Asn 75 Ile Ala 90 Gln Gly 105 Arg Asp 120 ヒトでは、涙のなかに含まれていて殺 菌に寄与する。他に免疫にも関与する 51 ヒトリゾチーム 黄色い棒 がSS結合 52 ヒトリゾチーム 活性部位: E:グルタミ ン酸とD:ア スパラギン 酸が向かい 合う位置関 係になりま す。鋏の上 の刃と下の 刃になるの です。 53 ヒトリゾチーム 1 1 Lys 16 Gly 31 Leu 46 Asn 61 Ser 76 Ala 91 Asp 106 Ile 121 Val 2 Val Met Ala Ala Arg Cys Ala Arg Arg 3 Phe Asp Lys Gly Tyr His Val Ala Gln 4 Glu Gly Trp Asp Trp Leu Ala Trp Tyr 5 Arg Tyr Glu Arg Cys Ser Cys Val Val 6 Cys Arg Ser Ser Asn Cys Ala Ala Gln 7 Glu Gly Gly Thr Asp Ser Lys Trp Gly 8 Leu Ile Tyr Asp Gly Ala Arg Arg Cys 9 Ala Ser Asn Tyr Lys Leu Val Asn Gly 10 11 12 Arg Thr Leu Leu Ala Asn Thr Arg Ala Gly Ile Phe Thr Pro Gly Leu Gln Asp Val Arg Asp Arg Cys Gln Val 13 Lys Trp Thr Gln Ala Asn Pro Asn 14 15 Arg Leu Met Cys Asn Tyr Ile Asn Val Asn Ile Ala Gln Gly Arg Asp 15 30 45 60 75 90 105 120 SS結合が4本あって、三次構造に寄与 している。SS結合というのは、2つのシ ステインの側鎖-CH2SHのSHが、 ーS-S-という形になること。 54 膜タンパク質 糖鎖 タンパク質 脂質の二重膜(lipid bilayer)である。 55 細胞内のソーティング リボソーム →サイトゾール →粗面小胞体 →顆粒 →細胞膜 核 ミトコンドリア 葉緑体 ペルオキシゾーム 次のスライドに模式図 56 膜タンパク質の場合 57 膜タンパク質の場合 58 タンパク質の形が重要 タンパク質の立体構造がいかに大切か ということが、よくわかりますよね。 熱を加えたり、pHが偏ったりすると、こ の形が崩れて、酵素としての働きが失 われてしまいます。 酵素に活性を表すための、最適温度や 最適pHが存在するのはこのためです。 59 きょうはちょっと難しかった? かもしれませんが、これは生物学の基 礎の基礎なので、避けて通れないとこ ろです。正確に覚えてください。 次回は、エネルギー代謝について話し ましょう。お楽しみに。 60