Transcript 疑难血型鉴定（徐晶）

疑难血型鉴定
南昌市血站输血研究室
徐
晶
一、ABO正反定型不符问题及措施
（一）ABO定型问题经常发生情况：
1.明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：
(1) 新生儿血样
(2) 免疫缺陷、免疫紊乱
(3) 前带现象
(4) 血型物质过多
(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体
(6) 亚型，反应是混合视野
2.由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体
3.明显多出抗原(或多出抗体)
(1) 亚型如A2型可能血清中有抗-A1
(2) 自身凝集
(3) 获得性B
（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析
1.技术因素：
2.存在IgM性质的自身冷抗体
在低于37℃时血细胞自身凝集，影响正反定型。可用DTT或2-Me
来处理细胞及血清来解除此种IgM抗体引起的干扰。血清的反定型
可在37℃进行，用O型红细胞作为对照。
3.抗原表达弱或缺失：
(1) A、B抗原的表达可在下述情况下被抑制：
a.白血病;b.双胞胎;c.H基因变异
(2) A、B抗原表达太弱：由于A、B抗原表达太弱，与抗-A或抗-B不反
应，但确实存在A或B抗原，因此血清中无相应的抗体。
4.高水平可溶性血型物质的病人：
极少数有卵巢囊肿的妇女，由于含高浓度可溶性血型物质，使抗原减弱
或消失，此血型物质可中和抗-A或抗-B。当使用未洗涤的RBC用于ABO 定型
时，血型物质就会中和抗-A或抗-B，引起假阴性反应。
5.混合视野：
(1) 来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样
(2) 骨髓移植后不久
(3) Tn或A3型红细胞
6.缺失或弱抗-A、抗-B
(1) 新生儿血清
(2) 免疫缺陷、紊乱病人
(3) 老年人
7.前带现象
当抗-A或抗-B的效价IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。
解决方法：
(1) EDTA抗凝血浆结合钙
(2) 使用EDTA保存液悬浮细胞
(3) 将血浆于56℃灭活补体
(4) 血浆或血清用盐水1:10稀释
8.多凝集：
多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。起
因是微生物酶引起膜的改变，以及膜上糖基合成不完善。
9.不正常血清蛋白：
白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。
10.血样血清中存在抗试剂成分的抗体：
如抗防腐剂的抗体、抗EDTA的抗体等，此种抗体可以通过将红细
胞洗涤而解除。
二、解决ABO定型不一致的指导原则
（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方案
1. 洗涤RBC且延长孵育时间，反应加强，则考虑是型物质抑制
2. 酶处理红细胞再次试验
3. 吸收放散确定是否是亚型
4. 了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野
5. 了解病情诊断（尤其是白血病）
6. 了解是否是骨髓移植受者
7. 了解是否是双胞胎
8. 是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定
9. 分泌型型物质检查
10. 进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离
11. 如果是弱A或弱B遗传，则检查红细胞上H抗原的表达
（二）出现弱反应或缺失抗体的解决措施
1. 延长反应时间
2. 于室温及4℃检查血清中的抗体。用A、B、
O及自身红细胞进行检查
3. 于室温及4℃检查血清中抗体。用酶处理的
A、B、O及自身细胞进行检查。可能需要
在试验前进行冷抗体的自身吸收
4. 确定病人年龄及临床诊断（如新生儿、免疫
病）
5. 确定输血史（非ABO同型的血浆输注）
（三）出现多余抗原（额外抗原）的解决方案
1. 将红细胞洗涤再进行试验，确定是否病人或献血员血清存
在针对ABO定型试剂成分抗体
2. 用O型及自家红细胞于室温检查病人血清，确定血清中否
有冷自身抗体，如有则用2Me或DTT处理。
3. 用不同厂家的试剂检查洗涤的红细胞
4. 了解病人的临床诊断
5. 如果怀疑是获得性B，则用酸化的抗-B检查
6. 进行ABH分泌型型物质检查
7. 如果用多克隆抗-A检查结果是混合视野，则用蛋白酶处
理RBC试验，考虑是否是多凝集
（四）出现额外抗体：
1.于室温及4℃检查，确定是否存在
自身抗体或冷同种抗体
2.洗涤红细胞再次进行试验，防止
血清中有针对试剂红细胞保存液
成分的抗体
（五）混合视野凝集的解决方案
1. 确定是否近期怀孕或输血
2. 确定临床诊断（尤其是白血病）
3. 是否是骨髓移植受者
4. 是否是双胞胎
5. 用细胞分离术将两群细胞分开，分别定型
6. ABH型物质检查
7. 了解输血史
三、ABO正反定型不符合处理办法
ABO正反定型不符时（不规则抗体或ABO亚型
血所致）排除方法：
1.置室温5分钟～1小时，使弱反应增强。
2.作抗体筛检。
3.吸收放散试验。
4. ABO亚型检测
各种A型
红细胞抗原
血
型
血清中抗体
anti ant
-A
i-B
antiA,B
anti-H
A
4+
0
4+
1+
A2
3+
0
3+
3+
A3
2+mf
0
2+mf
3+
AX
±/0 0
2+
4+
Am
0
0
0
4+
Ael
0
0
0
4+
常见
antiB
antiB
antiB
antiB
antiB
罕见
无
唾 液 中 血清中B转化
抗原
酶
A ,H
阳性pH = 6
A ,H
阳性pH = 7
少见anti-A1
A ,H
弱阳性
定见anti-A1
H
极弱阳性
无
A ,H
阳性
anti-A11~8%
anti常有anti-A1 有 H
B
时也有anti-A
mf =混合反应；±= 弱反应；0 = 无反应；* = 以吸收放散试验才能证明有
阴性
各种型B型
血
型
红细胞上抗原
血清中抗体
antiA
antiB
antiA,B
anti-H
常见
罕见
0
4+
4+
2+
anti-A
无
B3
0
2+mf
3+mf
4+
anti-A
BX
0
1+
2+
4+
anti-A
Bm
0
+/-
1+
4+
Bel
0
0
0
4+
B
唾 液 中 血清中B
抗原
转化酶
B ,H
阳性
B ,H
弱阳性
常见弱anti-B
H(B)
阴性
anti-A
无
B ,H
弱阳性
anti-A
有时弱anti-B
H
阴性
少见弱anti-B
mf = mixed field混合反应；0 = 无反应；( )量减少
孟买血型及类孟买血型
红细胞抗原反应
血型名称
血清抗体反应
唾液抗原反应
antiA
antiB
antiA,B
anti-H
A
cell
B
cell
O
cell
A
B
H
孟
买
型
Oh OhA OhB OhAB
Ah
Bh
ABh
w+/w+/-
w+/w+/-
w+/w+/w+/-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
-
-
亚
孟
买
型
OHm
AHm
BHm
ABHm
w+/w+/-
w+/w+/-
w+/w+/w+/-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
O型血正反定型不附及解决办法
正定型
反定型
antiA
antiB
antiA,B
A
cell
B
cell
O
cell
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
血
矛盾原因
型
解决办法
O
O
O
O
O
O
重测血清分型(18℃)
重测血清分型(18℃)
重测血清分型(18℃)
重测血球及血清分型
不能解决
不能解决
丙型球蛋白过低
丙型球蛋白过低
丙型球蛋白过低
血癌,A抗原可能消失
有特异或非特异性抗体
缗钱,细菌污染,多凝集性
A型血矛盾的原因及解决的办法
正定型
反定型
antiA
antiB
anti-A,B
A
cell
B
cell
O
cell
+
+
+
+
-
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
血
型
A
A
A2
A/A2
A/O
O
O
O
矛盾原因
解决办法
丙型球蛋白过低
后天性获得B抗原
含有抗A1的A亚型
有特异或非特异抗体
含有抗A1的A亚型
A亚型
A亚型有特异性抗体
A亚型有非特异抗体
重测血清分型(18℃)
可能为肠道疾病
重测血球与Lectin- A1
抗体鉴定试验
测A1,A2血清分型
唾液试验
抗体鉴定试验
抗体鉴定试验
B型及AB型血矛盾的原因及解决的办法
正定型
反定型
anti
-A
anti
-B
antiA,B
A
cell
B
cell
O
cell
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
-
血
型
矛盾原因
解决办法
B
B
B
AB
A2B
丙型球蛋白过低
特异或非特异抗体
特异或非特异抗体
血清有特异性抗体
含有抗A1的A2B型
血清有特异性抗A1
重测血清分型(18℃)
抗体鉴定试验
抗体鉴定试验
抗体鉴定试验
重测RBC与Lectin A1
抗体鉴定试验
AB/A2B
四、ABO 血型分型不合处理步骤流程
ABO血球分型有某抗原反应较弱，但结果与血清分型吻合
(1).可能原因为：
a.A或B亚型
b.H血型物质缺乏（如Ahm或 Ah等）
c.疾病造成血型抗原表现减弱
d.有两种血球族群存在（chimeras或病人输入大量
其它血型之血球，如O型血球等）。
(2).处理方法为：
a.排除两种血球族群存在方法是测定病患血球各种血型
抗原之表现型，视其结果是否同ABO血球分型，有较弱
抗原反应
b.使用单株抗体，视其反应是否增强
c.对照亚型分型表，找出是否符合某种亚型分型
d.以吸附及冲出试验确定A及B抗原之存在
e.注意mixed-field反应
ABO血球分型有某抗原反应较正常弱，但结果
与血清分型不合
(1)可能原因为：
a.A或B的亚型血清中有allo anti-A1或anti-B
b.血球有多重凝集(polyagglutinability)
c.自体抗体覆盖于测试之血球上
d.抗血清试剂中具有对抗血球上低频率抗原之抗体
e.单株之anti-A(anti-B)抗体检测出B(A)表现型
ABO血球分型正常，但血清分型有异常阳性反应时，
(1).可能原因为：
a.病人血清中有自体或异体抗体(allo- or autoantibody)
b.因输血或器官移植被动性获得之抗体(passive acquired
antibody)
c.有对抗试剂红血球稀释液之抗体
(2).处理方法为：以另外的A或B红血球测试，同时与抗体普检
及交叉试验一起判读，应该不难找出原因。
ABO血球分型正常，但血清分型反应较弱或呈阴性
反应时，可能原因为：
a.因年纪、疾病或遗传造成血清中anti-A或-B浓度较
低
b.某些情况下抗体浓度太高(prozoning)或Ael、Bel血
球分型呈O型，但相对的anti-A或B消失。
五、不规则抗体筛检
目的：
测试病人、献血员、怀孕妇人产前的血
清，是否含有不规则抗体，以预防输血时或
输血后，进而发生输血反应。
国际先进做法
国内目前做法
病人
献血者
病人
献血者
血型
血型
血型
血型
抗体筛选
抗体筛选
阳性
阴性
交叉配血
阳性
阴性
电脑核对
抗体鉴定
抗体筛选
交叉配血
选择特殊献血者
发血
（一） 提前一步：
• 不需要供血来进行实验，有利于早期发现
和确认具有临床意义的不完全抗体，并可
以在配血前鉴定此不完全抗体，获得充足
的时间来选择缺少相应抗原的相配合的血，
避免由于寻找不到相合的血液而造成患者
病情的延误
(二) 节省资源：
• 节省人力资源，抗筛阴性的病人可以直接用计
算机核对血型后发血，而不需要交叉配血，减
少交叉配血的劳动量，极大降低了输血科的人
力劳动量，输血科医师有更多的时间开展其它
工作保证输血的安全；
• 抗筛方法使用标准红细胞，相对交叉配血减少
了由于无临床意义抗体和抗原导致的红细胞凝
集，减少了无意义的输血不合，降低了输血科
的工作量。
（三）节约血源：
• 病人抗筛结果阴性时，只要用计算机
核对血型即可发血。不用为特定病人指
定专门用血，可实现病人间共享血源；
• 由于病人的血源可以共享，减少了血液
的库存。
（四）经济省钱：
•
很多需要输血的病人都不止输一袋血。
如交叉配血须每单位收费一次，而抗
筛只需进行一次；
•
若病人反复输血，进行抗筛不必每天
抽取血样。每72小时检测一次病人是
否有不规则抗体生成，被认为是实用
而且安全的。
（ DAT：阳性）
何时做该试验？
P1 P2 P3 P4 P5 P6
LISS/Coombs卡
取 DAT阳性血液做如下试验：
P4
抗体种类鉴定卡I
（1）结果：含IgG类抗体
（3）意义：有助于确定不同的抗体种类
• WAIHA患者，通常有IgG类抗体包被
温抗体型自身免疫性
其红细胞；
溶血性贫血
•
约24%的WAIHA患者， 也可能同时检
测出C3补体；
•
•
更少见的情况是，约7%的WAIHA患
者仅显示红细胞上有补体；
也可能存在抗- M 和/或抗-A抗体。
冷凝集素病（Cold
Agglutinin Disease）
•
CAD患者，通常只检测到补体包被其
红细胞，但也可能同时检测到抗- M
和/或抗-A抗体；
六、手工凝聚胺法(manual polybrene method)之判读
判读一
判读二
I
I
I
Auto
I
II
Auto
MP
-
-
-
+
+
+
AHG
-
-
-
-
-
-
2
+
2
+
2+
2+
2+
2+
Coomb's
cell
表示不规则
抗体筛检为
阴性反应。
应怀疑有冷凝集素的干扰或是缗钱状反应的干扰
判读三
判读四
I
II
Auto
I
II
Auto
MP
+/-
+/-
+
+/-
+/-
-
AHG
+/-
+/-
+
+/-
+/-
-
Coomb's
cell
-/2+
-/2+
-
-/2+
-/2+
2+
应怀疑有自体抗体的干扰。
AC(-)，而I、II其中有一管或均
为(+)时，表示有不规则抗体的
存在。
七、问题排除
当3管在MP方法下为(+)反应，而在37℃或AHGphase为(-)：
1. 如怀疑是冷凝集素的干扰 ， 可加作于4℃的反应 ，将
screen I、II及AC管各滴入血球悬浮液后，加入病人血
清2滴，混合均匀，放于4℃冰箱中5~10分钟，离心
3400rpm，15秒，如有凝集反应则可确定是冷凝集素。
2. 若怀疑是缗钱状反应的干扰时，可把病人血球1滴，加病
人血清2滴，加入生理食盐水离心15秒，凝集应该会散开。
或是将病人血球1滴加血清1滴，于载玻片上混合均匀，
加入1滴生理食盐水于显微镜下观察，凝集也会慢慢散开。
1. 当Auto control为阳性反应时，应怀疑是自体抗体的
干扰，重新采取病人检体，做冲出及吸附试验。
2. 当Auto control为阴性反应，而screen I、II其中有一管
或均为阳性反应时，可在抗体筛检表格当中对照出几
种可能的抗体，重新采取病人检体做不规则抗体鉴定
试验。
八、不规则抗体鉴定
分析原理：
利用8~11种不同的细胞组(Panel cell)，当作
血型之抗原，再加入病人本身红血球作为自体对
照(Auto-control)，与病人的血清反应，结果将与
鉴定表格以排除法(rule out)鉴定出相对应的不规
则抗体。可采用手工凝聚胺法或微柱凝胶法。
利用删除法来找出正确的不规则抗体种类
先从0的反应开始删除，阴性反应之抗
体先删除，最后未被删除的及可能是我们
要找的结果；有时候结果并不一定只有1个
相对应的抗体。
D
C
E
c
e
K
k
M
N
S
s
JKa
JKb
IS
370C
AHG
1
+
+
0
0
+
0
+
+
0
+
0
0
+
0
0
0
2
+
+
0
0
+
+
+
0
+
0
+
+
+
0
0
0
3
+
0
+
+
0
0
+
+
+
+
0
0
+
0
2+
2+
4
+
0
0
+
+
0
+
0
+
0
+
+
+
0
0
0
5
0
+
0
+
+
0
+
+
+
+
+
+
0
0
0
0
6
0
0
+
+
+
+
+
0
+
0
+
+
0
0
2+
2+
7
0
0
0
+
+
+
+
+
+
0
+
+
+
0
0
0
8
0
0
0
+
+
0
+
+
0
+
0
+
+
0
0
0
9
0
0
0
+
+
0
+
0
+
0
+
+
0
0
0
0
10
0
0
0
+
+
0
+
+
0
0
+
0
+
0
0
0
11
+
+
0
0
+
0
+
+
0
+
0
+
+
0
0
0
0
0
0
AC
九、抗体筛选方法
1、原则：排除原则，即阴性排阳性而不
能阳性排阴性
被检血清+某一标准RBC（含X，Y抗原）
如凝集（+）：不能肯定是含抗X，抗Y，抗X+Y还是
抗X，Y以外的抗体
如不凝集（-）：肯定不含针对X，Y抗原的抗体
使用一组标准细胞鉴定未知抗体特异性，基于
此原则
2、筛选细胞
• （1） 标准细胞配组（谱细胞）
标准细胞配组的选择原则是使用最少量细胞，但
能鉴定出最多的特异性
细胞配组鉴定抗体的能力取决于：
a.该配组包括的抗原有多少
b.这些抗原分布情况，是否提供足够信息
c.抗原“合理搭配”
(2)简易方法
随机取3-5个O型（无ABO抗原）RBC混合
“假设”所有血型抗原都互补
注意：太少——可能某抗原均阴性
太多——某抗原呈阳性，但被“稀
释”
洗涤，配成3-5%悬液筛选细胞
受检血清+筛选细胞：盐水、聚凝胺、抗人
球、 酶……
凝集
抗体特异性鉴
定
表1 一份未知抗体的鉴定结果
标准细胞
与标准抗血清反应
受检血清与
D E e M N S s P1
标准细胞反应
No.ABO型
C c
1
O
+ -- + -- + -- + + + +
--
2
O
-- + + + -- -- + -- + +
--
3
O
+ -- + -- + + +
--
+
4
O
-- + + -- + -- + + + --
--
5
O
+ + -- -- + + -- -- + +
+
6
O
--
+ -- + + + -- + -- --
+
7
O
+
+ --
+ + -- +
+ +
+
--
8
O
--
+ --
-- + --
-- + +
--
+
+ +
结果：
受检血清与1，2号细胞反应，
排 除 针 对 C，c，D，E，e，N，S，
s， P1 抗原的抗体，与3，5，6细
胞为阳性反应，证明含有抗M抗体
十、抗体鉴定（谱细胞搭配合理）可靠性分析
被检血清反应
谱细胞某抗原
合计
+
--
+
A
B
--
C
D
C+D
合计
A+C
B+D
N=A+B+C+D
A+B
(A+B)!(C+D)!(A+C)!(B+D)!
P=
A!B!C!D!N!
P<1/20，可靠性>95%
P>1/20，可靠性<95%
例1
血清反应
合计
E抗原
+
--
+
9
0
9
--
0
1
1
合计
9
1
10
9!1!9!1!
P=
=1/10>1/20，可靠性<95%
9!0!0!1!10!
不可靠，不能排除针对E抗原抗体
例2
见表1结果
血清反应
M抗原
合计
+
--
+
3
0
3
--
0
5
5
合计
3
5
N=8
3！5！3！5！
P=
=1/50<1/20，可靠性
9！0！0！1！10！
>95%
结论：血清中含抗M抗体
十二、交叉配合试验
交叉试验不能保证红血球能正常生存于受血
者体内，亦不能避免所有输血的不良反应。交叉
试验无法检出所有未知的抗体，但能检测ABO分
型法的主要错误，及受血者血清与给血者红血球
上抗原发生反应的抗体。
最近数年中传统的交叉试验有三种改变
删除室温期的检查。
以低张离子（L.I.S.S.）取代白蛋白。
推广Type & Screen以取代交叉试验。
•若受血者血清抗体初筛阴性，则交叉试验做到室
温期即可。此时做交叉试验的目的，只是进一步确
保ABO血型的正确性。
•未做不规则抗体筛检者，以Polybrene做交叉试验，
结果为阴性即可先发血，但事后补做抗体筛检。
抗体普检为阳性时：
（1）冷凝集素：
若病人最近三个月内没有输过血，用自体吸收过的血清做交叉试验。
若病人近三个月之内输过血，则采预温法作交叉试验。方法如下：
a.病人血清、给血者2-5﹪血球悬浮液及生理食盐水置37℃15分钟。
b.以温的病人的血清6滴加温的给血者细胞一滴于试管中，置37
℃20~60分钟。
c.以温的生理盐水洗涤3-4次，并将最后一次上清液完全倒干。
d.加入2滴抗球蛋白试剂，混合，离心，用目测及显微镜检视，无凝集
者可发血。
e.通知病房血液输注前须预温。并于发血后做抗体鉴定。
（2）特异性的冷型抗体：
包括Anti-M，-N，-P1，-Lea，-Leb，-H；交
叉试验时，以Manual Polybrene法多筛检几袋血液，
结果为阴性者即可发血，同时做抗体鉴定。
（3）对Rh系统的抗体：
以Manual Polybrene做交叉试验，阴性者才
可发血。同时要做抗体鉴定。
（4）温型的自体抗体（Warm-Reacting
Autoantiboby）：
以温热自体吸收法处理过的血清作交叉试验为阴
性者（Polybrene or AHG）即可发血，但必须由
血库医师决定，并通知血库医师查明病人临床诊
断及用药情形。
（5）温型的不规则抗体（Warm-Reacting
Irregular Antiboby）：
以Polybrene 做交叉试验，适合者才发血，并做
抗体鉴定。
注意事项 :
受血者必需输相同血型的全血或红血球浓厚液。Rh阴性的
病人除非在不可避免状况下，必需输Rh 阴性血，而Rh阳性
病人，可输Rh阳性及Rh阴性全血或红血球浓厚液。
除紧急输血外，全血或红血球浓厚液输血需事先做配合试
验
配合试验方法必需能测出ABO血型是否相合及找出于37℃
反应，且于临床上有意义的不规则抗体，包括抗球蛋白试验。
受血者在先前三个月内有过输血或怀孕，或不能确定有无
输过血者，做交叉试验检体必需为输血前48小时内采集之检
体。
紧急输血的配血问题探讨
方案1、直接发O型血（相容性输血）。时间<1分钟
方案2、盐水法正反定型＋同型血。时间<3分钟
方案3、盐水法正反定型＋盐水法交叉。时间<5分钟
方案4、盐水法正反定型＋主侧聚凝胺法。 时间<5分钟
方案5、卡式ABO正反定型＋主侧聚凝胺法。 时间<12分钟
方案6、卡式ABO正反定型＋卡式主侧。 时间<30分钟
方案7、卡式ABO正反定型＋抗体筛查＋卡式主侧。时间
<35分钟
Thank you!