Transcript Milieu Clark et Lubs

Milieu Clark et Lubs
Type de milieu
C’est un milieu liquide qui permet l’identification des entérobactéries
par l’étude du métabolisme glucidique.
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On réalise deux tests :
Test Vosges-Proskauer (test VP)
Test du Rouge de Méthyle (test RM)
Test de Vosges-Ptroskauer (VP)
Il permet de détecter la production d’acétoïne, de dyacétyl et de butane-diol
à partir de la fermentation du glucose. Le réactif ajouté (l’alpha
naphtol) permet dans le cas d’un milieu basique et en présence
de dioxygène, d’obtenir une coloration rosé ou rouge
acétoïne
dyacétyl
rouge
butane-diol
+ KOH + alpha naphtol + 0²
coloration
rosé
ou
Test du Rouge de Méthyle (RM)
Il permet de détecter la production d’acides plus ou moins forts et plus ou moins
volatiles au cours de la fermentation.
Sont ajoutées au milieu quelques gouttes d’un indicateur coloré de pH : le rouge de
méthyle (rouge en milieu acide et jaune en milieu basique).
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si les bactéries produisent des acides forts au cours de la fermentation. Le
milieu reste acide et donc en rouge.

si les bactéries produisent des acides faibles le milieu s’est acidifié, puis réalcalinisé. Le milieu est donc jaune.
Composition
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Clark et Lubs :
peptone
k2PO4
glucose
pH
5,0 g
5,0 g
5,0 g
7,5
Réactif :
VP :
alpha naphtol
éthanol à 60%
60 g
1L
Rouge de méthyle
éthanol à 60%
5,0 g
1L
RM :
KOH ou NaOH :
4 mol/L en solution aqueuse
Ensemencement et lecture
2-3 gouttes
de RM
Agitation
et
lecture
immédiate
3 gouttes
de KOH
ou NaOH
+
5 gouttes
de VP
Et lecture
au bout de
10 minutes
Interprétation
Milieu rouge
=>présence d’acide fort
=>acidification
=>test du RM positif
Milieu jaune
=>absence d’acide fort
=>pas d’acidification
=>test du RM négatif
Milieu rouge
=>présence d’acétoïne
et/ou de dyacétyl
et/ou de butane-diol
=>test du VP positif
Milieu jaune
=>absence d’acétoïne
et de dyacétyl
et de butane-diol
=>test du VP négatif