Transcript PRUEBAS DE DETECCION DE HIV.ppt


DIAGÓSTICO DE HIV
LIC. RICARDO SALDAÑA

PRUEBAS DE LABORATORIO
• Métodos Directos:
Evidencian/cuantifican
la presencia de
antígenos en la
muestra.
– PCR cualitativa,
– PCR cuantificada
– cultivo y aislamiento
viral,
– antigenemia P-24)
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
PRUEBAS DE LABORATORIO
• Métodos Indirectos:
– Evidencian la
presencia o ausencia
de anticuerpos totales
en la muestra.
– Son los más
utilizados.
• Pruebas rápidas
• ELISA
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Diagnóstico de VIH
 Se usan dos niveles de prueba
serológicas:
 Pruebas de Tamizaje:
 Ensayos inmunoenzimáticos
 Test de aglutinación
 Test de detección rápida
 Tienen alta sensibilidad.
 La posibilidad de tener falsos negativos es bajo.
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Pruebas rápidas disponibles en el mercado
Multispot
HIV-1/HIV-2
Uni-Gold
Recombigen
OraQuick
Advance
Reveal
G2
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
PRUEBAS DE ELISA:
• Primera Generación: Los antígenos
utilizados provienen del lisado viral de
un cultivo
• Segunda Generación: Los antígenos
corresponden a proteínas
recombinantes o Péptidos sintéticos.
• Tercera Generación: Péptidos
recombinantes sintéticos de VIH-1, 2,
0.
• Cuarta Generación: Se adicionó el
p24.
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Continuación…
– Pruebas de confirmación: Tienen alta
especificidad
• Western Blot
• Inmunofluorescencia Indirecta.
• Radioinmunoprecipitación
• PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA
POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS
FALSO POSITIVO.
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
Western Blot
• Prueba de confirmación
• Principio: Ensayo
inmunoenzimático
• Detecta anticuerpos
contra proteínas
específicas del VIH 1
• Interpretación: visual
• Muestras: suero y plasma
• Volumen: 20 µl
• Tiempo: 3.5 hrs
• Sensibilidad: 100%
• Especificidad: 100%
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Nomenclatura de las bandas en Western Blot
Gen Proteína
env Precursora de la
envoltura
Glucoproteína externa
Glucoproteíina
transmembrana
Denominación CDC
gp160
gp160
gag Precursora del core
Precursora del core
Proteína principal
Proteína de la matriz
p55
p40
p24
p17
pol Transcriptasa inversa
Transcriptasa inversa
Endonucleasa
p66
p51
p32
gp120
gp41
OMS
Al menos 2
bandas
gp120
p24
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Ventajas de las pruebas
rápidas de VIH
• Versatilidad y existencia de diferentes principios
inmunológicos así como en las muestras biológicas que
se pueden utilizar.
• No necesitan un laboratorio muy sofisticado para
utilizarlas.
• La realización y la interpretación de los resultados
obtenidos es fácil.
• Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo,
y cuando se combinan los resultados definitivos los
podemos obtener en menos de una hora
• Personal a nivel técnico las puede realizar con la debida
capacitación y supervisión de un profesional con
experiencia.
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Fortalezas de las pruebas
rápidas de VIH
• Algunas se pueden almacenar a
temperatura ambiente.
• Se optimiza el uso de los recursos y el
tiempo comparado con el ELISA.
• Los resultados obtenidos son igual de
confiables que los resultados del ELISA y
con menos limitaciones técnicas.
• Algunas requieren poca inversión
económica.
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
Debilidades de las pruebas
rápidas de VIH
• El costo comparado de estas pruebas con
el ELISA puede a veces ser mayor.
• Presencia de falsos positivos por lo que
necesitan confirmación de los resultados
obtenidos.
• El periodo de ventana es mas largo por lo
que podemos tener resultados falso
negativo comparado con el ELISA de
cuarta generación.
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Causas de resultado falsopositivo:
• Relativas al suero:
 Relativo a la calidad y manipulación de la muestra:
 Calidad, extracción, almacenamiento y contaminación de la
misma, estabilidad y calidad de los reactivos.
• Relativas a la presencia de auto anticuerpos:
– Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).
• Relativas a otras condiciones:
– Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis,
Enfermedades hemato -oncológicas, alcoholismo,
embarazo, etc.
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•
•
•
•
•
•
•
•
•
Causas de resultado falsonegativo:
Periodo de ventana
Tratamiento con inmunosupresores
Procesos malignos
Trasplante de médula ósea
Disfunciones de las Células B
Factores reumatoides
Pérdida de estabilidad de los reactivos
Reactivos que detectan principalmente p24
Pobre respuesta inmune
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Selección de pruebas rápidas
de VIH apropiadas
• Es necesario tomar en cuenta tres
factores:
– El objetivo de hacer la prueba.
– Sensibilidad y especificidad de la prueba.
– Prevalencia de la infección de VIH en la
población que será tamizada con las pruebas.
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Elección de Pruebas rápidas
de VIH
• Los tres objetivos para hacer un tamizaje
de anticuerpos contra VIH son:
– Tamizaje de donadores de sangre u órganos.
– Para fines epidemiológicos
– Diagnóstico de personas infectadas.
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
Sensibilidad y especificidad de la
prueba
• Estos dos factores son críticos para diferenciar entre
una persona infectada y una que no está infectada.
• Pruebas alta mente sensibles disminuyen la posibilidad
de obtener resultados falsos negativo.
• Las pruebas altamente específicas disminuyen la
posibilidad de tener resultados falsos positivo.
• La mejor elección dependerá del objetivo de hacer la
pruebas.
• Los estándares mínimos son: Sensibilidad >99%
y especificidad >95% preferiblemente validadas en nuestra
población.
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Resultados
De la prueba

Sensibilidad y especificidad de
las pruebas
a
Verdaderos
Positivos
b
Falsos
positivos
a+b
c
Falsos negativos
d
Verdaderos
negativos
c+d
a+c
b+d
Sensibilidad = a / (a + c)
VPP = a / (a + b)
Especificidad = d / (b + d)
VPN = d/ (c + d)
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
Detección de anticuerpos
contra el VIH
Pruebas de
Tamizaje
Pruebas de
Confirmación
Sensibilidad
Especificidad
Falsos negativos es bajo
Falsos positivos es bajo
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
Prevalencia de la infección de VIH
• Definición: Casos positivos * 100%
población total
• La prevalencia puede variar de población
a población o en un hospital de servicio a
servicio.
• A > prevalencia > VPP y < VPN
• A > prevalencia > VPN y > VPP
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
Estrategia I
• Utilizada en:
– Donadores de sangre,
órganos, emergencias
– Estudios de
prevalencia
• Donde la P > 10%
– Diagnostico:
• Signos o síntomas
clínicos de infección por
VIH y la P > 30%
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
Estrategia II
• Utilizada en:
– Estudios de prevalencia
• Donde la P < 10%
– Diagnostico:
• Signos o síntomas clínicos
de infección por VIH y la P <
30%
• Pacientes asintomático con
P >10%
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
Estrategia III
• Diagnóstico de
Pacientes
asintomático
donde la P < 10%
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Tamizaje en labor y partos
• Fase preanalitica: Antes de realizar la
prueba
• Se ha hecho pruebas de VIH
anteriormente
• Tenemos los insumos y el personal
necesarios
• Que tan cerca est’a del momento del parto
• Que muestra usar’e para hacer la prueba
• Sistema de identificaci’on de muestras
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Tamizaje en labor y partos
• Fase analitica: proceso de realizaci`on
de la prueba:
– Es suficientemente sensible
– Que tan rapido tendremos el resultado
– Necesitamos equipo muy complejo para
hacer la prueba
– Que nivel de especializaci’on tiene que
tener la persona que realiza las pruebas
– Ayudar’a nuestro trabajo a disminuir el
riesgo de trasmisi’on materno fetal
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Tamizaje en labor y partos
• Fase Post analitica: Despues de realizar
la prureba<
– Registro adecuado de resultados en libro de
trabajo.
– A quien le doy el resultado, al medico, a la
paciente.
– Tengo otras pruebas para confirmar
resultados positivos.
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
Bioline VIH ½ 3.0
Estándar Diagnostic
• Principio: Análisis
Inmunocromatográfico
• Prueba de 3ra. generación
• Interpretación:Visual
• Muestras: Suero, plasma y
sangre (EDTA)
• Volumen de muestra:10µl
• Tiempo:20 minutos
• Sensibilidad: 100.0%
• Especificidad: 99.4%
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Experiencias
Performance of a Rapid Immunochromatographic Screening Test for
Detection of Antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) and
HIV-2: Experience at a Tertiary Care Hospital in South India
Theophilus-Sunder Vijayakumar, Shoba David, Kavitha Selvaraj, Thiruppavai Viswanathan, Rajesh
Kannangai, and Gopalan Sridharan*
Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore, Tamil Nadu PIN 632004, India
*Corresponding author. Mailing address: Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore 632 004, Tamil
Nadu, India. Phone: 91-416-2282312. Fax: 91 (416) 2232035. E-mail: g_sridharan/at/yahoo.com .
Received March 16, 2005; Revised May 9, 2005; Accepted May 16, 2005.
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Pruebas de laboratorio
validadas en Guatemala
Instanscreen
Oraquick
Determine
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
DETERMINE: Prueba rápida
Características:
• Principio: Análisis
Inmunocromatográfico
• Interpretación:Visual
• Muestras: Suero, plasma
y sangre (EDTA)
• Volumen de muestra:50µl
• Tiempo:30-35 minutos
• Sensibilidad: 99.6%
• Especificidad: 99.4%
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
Immunocomb II
Características:
• Principio: Ensayo
inmunoenzimático
Indirecto.
• Interpretación:Visual
• Muestras: suero y plasma
• Volumen:50µl
• Tiempo: 60 minutos
• Sensibilidad: 100%
• Especificidad: 99.4%
• No necesita equipo
automatizado
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ORAQUICK
Características
• Principio: Análisis
Inmunocromatográfico
• Interpretación:Visual
• Muestras: Suero, plasma
y sangre completa y
fluído oral.
• Tiempo:30-35 minutos
• Sensibilidad: 99.6%
• Especificidad: 99.4%
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
PROCESAMIENTO DE LAS
MUESTRAS
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
Recomendaciones de
bioseguridad
•
•
•
•
Uso de bata
Uso de guantes
Orden en la mesa de trabajo
Recipiente especial para transporte de
muestras de sangre. NO TRANSPORTAR
MUESTRAS EN GUANTES.
• Descarte adecuado de desechos (agujas,
jeringas y tubos)
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
Diagnostico de casos de
VIH positivos
• 2 pruebas de tamizaje: diferente principio
inmunológico con resultados iguales.
– Prueba Rápida + ELISA
– ELISA + Prueba Rápida
– ELISA + ELISA
– Prueba Rápida + Prueba Rápida
Recomendación en: Protocolo Nacional para el Tratamiento Antirretroviral del
VIH-SIDA. Capítulo 3, página 38. Comisión de acceso a tratamiento,
Programa Nacional de SIDA, Ministerio de Salud Pública y Asistencia
Social, Guatemala, Junio 2002.
Recomendación: OMS
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
Consideraciones Especiales del
Diagnóstico de VIH
• Niños < de 18 meses hijos de madre VIH
positiva:
– Todas las pruebas de anticuerpos dan resultados
Positivos.
– Un resultado positivo con pruebas de anticuerpos no
siempre indica infección por VIH.
– El diagnostico se establece con métodos directos de
diagnóstico y sospecha clínica.
– Se debe dar seguimiento con pruebas de anticuerpos
hasta los 18 meses
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
Consideraciones Especiales del
Diagnóstico de VIH
• Primoinfección por VIH
– Las pruebas que detectan anticuerpos darán
resultados negativo.
– Un resultado negativo con pruebas de
anticuerpos no descarta infección por VIH
– El diagnostico se establece con métodos
directos de diagnóstico.
– La especificidad de los métodos directos de
diagnóstico dependerá del tiempo de inicio de
la infección.
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
Carga Viral y apoyo al
diagnostico de VIH
• La sensibilidad es alta
• La especificidad:
– Primoinfección 97(%2-4 sem)
– Neonato: < 97%: (4 sem)
• Tomar en consideración cargas virales >
30,000
• Y no se deben tomar decisiones medicas
con una sola determinación de CV
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ALGORITMO PARA
DIAGNOSTICO DE VIH
PRUEBA RAPIDA
POSITIVA
NEGATIVA
ELISA
POSITIIVO
NEGATIVO
RESULTADO POSITIVO
RESULTADO NEGATIVO
ZONA GRIS
WESTERN BLOT
NEGATIVO
RESULTADO NEGATIVO
POSITIVO
RESULTADO POSITIVO
INDETERMINADO
REPETIR EN 6 SEMANAS
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Tamizaje de VIH en la
Emergencia de la Maternidad
Prueba rápida
DETERMINE
POSITIVO
Informe: POSITIVO
NEGATIVO
Informe: NEGATIVO
Seguimiento de la paciente como VIH POSITIVO
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Hospital Roosevelt
Ciudad de Guatemala 2008

Muchas Gracias
por su atención.
Julio 2008