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PCR
: polymerase chain reaction
201421026 이소영
201421025 김병철
201421027 박소연
IND
EX
1. PCR의 정의
2. PCR의 원리
3. PCR의
응용/실제사례
1. PCR의 정의
첫 번째
PCR이란?
• 중합효소 연쇄반응이라고도 하며 DNA 또는 RNA의 특정 구역을
시험관
내에서 대량으로 증폭하는 획기적인 기술이다.
• 캐리 멀리스에 의하여 1985년에 개발된 중합효소 연쇄반응은 현
재
유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는
검사법이다.
• 현대 생물학의 모든 분야에서 가장 중요한 기반 기술로 이용 되고
있으며,
현대 생물학에서 없어서는 안될 가장 중요한 기술에 속한다.
두 번째
2. PCR의 원리
첫번째
• PCR 기법은 크게 3가지로 나뉜다.
• 첫 번째 열변성 과정은 1~9분간
94~97℃ 사이의 열을 가하여 두 가닥의
DNA사슬을 한 가닥으로 분리한다.
이 때 DNA 두 가닥 사슬 사이의 상보적
인 염기대를 유지시키고 있는 수소결합이
제거된다.
2. PCR의 원리
두 번째
두 번째
시발체의 결합과정은 55~65℃로 온
도를 낮추어 ssDNA 주형에 시발체가
상보적 염기순서에 결합하는 과정인
데 적정온도는 주형 DNA와 시발체
의 염기배열에 따라 달라진다.
2. PCR의 원리
두 번째
세 번째
중합반응은 약간 열을 올려서 DNA 중합효
소와
3’DNTP를 이용하여 DNA를 합성하는 과정
이다.
시발체가 붙은 직후의 주형 DNA로부터 5’에
서 3’방향으로 주형 DNA의 염기순서에 상
보적인 새로운 염기순서를 합성하여 DNA
사슬을 연장시킨다.
그 후 다시 3단계의 과정을 반복하여 DNA를
증폭시킨다.
중합효소 연쇄반응을 1회를 시행하면 유전
물질은 2배로 증폭된다.
3. PCR의 응용/실제사례
세 번째
PCR의 응용
Double PCR법: PCR을 2회 연속해서 하는 방법
Nested PCR법: 2쌍의 Primer을 사용
Multiplex PCR법: 1회의 반응으로 복수의 DNA 영역을 증폭
하는 방법
PCR 산물의 subcloning, PCR 산물의 염기서열분석, 단일쇄
형태구조 다형성(SSCP), RNA 대상의 유전자분석(RT-PCR)
3. PCR의 응용/실제사례
세 번째
PCR의 실제사례
순수 분자생물학분야, 의학, 이학, 농학, 수의학,
식품과학, 환경과학 뿐만 아니라 고고학이나 인류
학에 이르는 분야까지 광범위하게 이용되고 있다.
에이즈, 결핵, 간염 등의 질병을 진단
<출처>
임상분자생물학/ 고려의학/ 2010.3.20발행/ 공저:
김은중, 김지용, 박기호, 엄용빈, 이재식, 정석률, 조
규봉, 조윤경
임상바이러스학/ 고려의학/ 2009.8.31발행/ 공저:
김승곤, 김충환, 류제기, 박기호, 엄용빈, 이규식, 정
경석, 홍성노
진단임상미생물학/ 현문사/ 2008.3.10발행/ 저자:
김양호
임상병리학기초실험
Thank U
Ppt출처. 박수현