Transcript 6주차 효소의 활성 측정

6. 효소의 활성 측정
효소
정의 : 생체내에 여러가지 화학반응을 촉매하는 물질
작용원리 : 기질에 작용해서 활성화 에너지를 낮춘다.
효소 반응 모델 : E + S
ES
E+P
효소의 반응속도에 영향을 미치는 요인
① 기질의 농도
그외 ④ 단백질의 기능과 변성
② 온도
③ pH
Michaelis-Menten equation - 효소반응에 의한 물질대사속도를 추정하는 방식
V0 = Vmax [S]/(Km + [S])
①
②
③
④
Vo : 효소의 촉매반응속도
Vmax : 최대반응속도
[S] : 기질의 농도
Km : Michaelis-Menten constant
실험 방법
•감자를 강판에 갈아서 거즈로 걸러 효소액을 마련한다.
A. pH 변화에 따른 효소의 활성도 점검
1. 효소액500ul를 pH 4,5,6,7,8,9완충용액 500ul와 섞는다.
2. 실온에서 500ul 의 20%H2O2 solution과 섞는다.
3. timer로 거품이 15ml tube 끝까지 올라오는 시간을 재고 기록한다.
B. 온도 변화에 따른 효소의 활성도 점검
1. 효소액 500ul 을 실험1에서 가장 높은 활성도를 나타낸 pH완충용액 500ul 과 섞는다.
2. ice, 실온, 37℃, 50℃, boiling water를 준비한다.
3. 500ul 의 20%H2O2 solution과 1번 효소액과 pH완충용액을 지정된 온도에서 5분간 온도를
맞추기 위해 기다린다.
4. 기질용액(20%H2O2 solution )과 효소액(1번 효소액과 pH완충용액)을 섞고 지정된 온도에서 반응시킨다.
5. timer로 거품이 15ml tube 끝까지 올라오는 시간을 재고 기록한다.
C. Enzyme kinetics analysis
1. 효소액 500ul 을 실험1에서 가장 높은 활성도를 나타낸 pH완충용액 500ul 과 섞는다.
( 6가지 기질 용액과 섞을 것이므로 3ml이상을 준비한다.)
2. 5%,10%,15%,20%,25%,30% H2O2 solution 500ul 를 준비한다.
3. 두가지 용액을 섞은후 timer로 거품이 15ml tube 끝까지 올라오는 시간을 재고 기록한다