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CORSO DI LAUREA IN SCIENZE BIOLOGICHE
ESERCITAZIONI DI BIOLOGIA CELLULARE MOLECOLARE
BC3: SORTING
Explain synthesis and sorting of the following proteins:
•
glucocorticoid receptor: cytoplasmic protein
•
EGF receptor: single pass transmembrane receptor
•
Metabotropic glutamate receptor: seven pass transmembrane receptor
__________________________
Dovete studiare l’effetto dell’EGF sulla proliferazione delle cellule PC12 e come primo
esperimento il vostro supervisore vi suggerisce di trattare le cellule per 48 ore con EGF a due
diverse concentrazioni (100 e 20 nM). Concordate di allestire l’esperimento in triplicato
preparando 9 piastre contenenti ciascuna 5x105 cellule in 10 ml di mezzo che dopo 24 ore di
colture verranno trattate per 24 ore con EGF.
Avete a disposizione una piastra contenente 7x106 cellule PC12, 10 ml di PBS, 5 ml di
tripsina, 500 ml di 10% FCS-DMEM (mezzo di coltura) e un aliquota di 100 µl di EGF alla
concentrazione di 100µM.
Fare lo schema dell’esperimento, i rispettivi calcoli verificare se i reagenti a disposizione
sono sufficienti e il calendario di prenotazione della cappa per colture cellulare sapendo che
oggi è lunedì.
7x106 cellule risospese in ? ml: ? cellule/? µl
EGF alla concentrazione di 100µM.
Concentrazione 100nM finale in 10 ml mezzo di coltura:
diluizione?1/………?= .......? µl in 10 ml
treatment
control
EGF, 20nM
EGF, 100nM
N°
Diluizione ? =100nM
Diluizione ? =20nM
EGF …..?µ M
mezzo
1
? ml
2
? ml
3
? ml
4
? ml
5
? ml
6
? ml
7
? ml
8
? ml
9
? ml
day?: seeding
cellule
? µl
? µl
? µl
? µl
? µl
? µl
? µl
? µl
? µl
24 hr culture
EGF 100µ M
Diluizione ?
(….?µ l + ……?µl mezzo)
? µl (aggiunti ai 10 ml di colture)
? µl della diluizione 1/5 (aggiunti
ai 10 ml di colture)
Soluzioni
iniziali
Culture medium
? µl
Culture medium
? µl
Culture medium
? µl
EGF ?µ M
? µl
EGF ?µ M
? µl
EGF ?µ M
? µl
EGF ?µ M
? µl
EGF ?µ M
? µl
EGF ?µ M
? µl
day?: EGF treatment
48 hr
culture
counting
counting
counting
counting
counting
counting
counting
counting
counting
Day?: cell counting