Transcript EURO-DIAGNOSTICA Centar za dijagnostiku “EUROTEST” EIA TEHNOLOGIJA ZA DETEKCIJU ANTIBIOTIKA HLORAMFENIKOL GENERALNI ZASTUPNIK I DISTRIBUTER FIRME "EURO-DIAGNOSTICA"/"EUROPROXIMA" NIZOZEMSKA - i drugih firmi iz oblasti veterinarska.

EURO-DIAGNOSTICA
Centar za dijagnostiku
“EUROTEST”
EIA TEHNOLOGIJA ZA DETEKCIJU ANTIBIOTIKA HLORAMFENIKOL
GENERALNI ZASTUPNIK I DISTRIBUTER FIRME "EURO-DIAGNOSTICA"/"EUROPROXIMA" NIZOZEMSKA
- i drugih firmi iz oblasti veterinarska dijagnostika, sigurnost hrane i zdravlje životinja (Bosna i Hercegovina, Slovenija, Hrvatska, Srbija, Crna Gora, Makedonija)
Društvo za zastupanje stranih firmi, uvoz-izvoz, trgovinu i analizu živežnih namirnica i predmeta opće upotrebe
Sarajevo, Bosna i Hercegovina
Tel/fax: +387-33-555-801, mobitel: +387-61-201-711, e-mail: [email protected] www.eurotest.co.ba
Rješenje Federalnog ministarstva zdravstva br. 04-37-6717/02, Rješenje Općinskog suda u Sarajevu br. 065-0-Reg-08-003669
Broj računa: 140-101-00034083-22, "Volksbank BH" d.d. Sarajevo BiH
Identifikacijski broj: 4200787740000, PDV identifikacijski broj: 200787740000
EIA TEHNOLOGIJA ZA
DETEKCIJU ANTIBIOTIKA
HLORAMFENIKOL
(CHLORAMPHENICOL -CAP)
U ŠKAMPIMA
OH
H
N
CH2
O2N
OH
C
O
CH2Cl2
EIA:
ENZYME IMMUNOASSAY
EIA je brzi test koji se koristi za detekciju
i kvantificiranje velikog broja varijacija
bio-komponenti, kao što su npr.
virusi, bakterije, hormoni,
antibiotici, alargeni itd.
EIA FORMATI:
EIA je podijeljena u tri glavna formata:
• Direktni EIA
• Indirektni EIA
• Blokiranje konkurentnog EIA
CAP-EIA je – competitivna analiza!
“EURO-DIAGNOSTICA” CAP-EIA KIT
OH
H
N
CH2
O2N
OH
C
O
CH2Cl2
REAGENSI U CAP-EIA
• 96-čelijska polistirenska mikrotitarska
pločica obložena sa ovčijim anti-zečijim
antitijelima
• Zečija anti-CAP antitijela
• Konjugat označen CAP (CAP-PO)
• CAP-standardi, negativne kontrole
• Uzorci (ne nalaze se u sastavu kita!)
MIKROTITARSKA PLOČICA U CAP-EIA
Čelije mikrotitarske pločice su obložene
sa ovčijim anti-zečijim (SAR) antitijelima.
Funkcija ovih antitijela je da
“zarobe” zečija anti-CAP antitijela.
ANTI-CAP ANTITIJELA U EIA
SU FORMIRANA U ZEČEVIMA
CAP
VEZIVANJE CAP
NA NOSAČE PROTEINA
ANTITIJELA SU
PROČIŠĆENA I
ISKORIŠTENA
U CAP-EIA
IMUNIZACIJA
ZECA
ZEC PROIZVODI
ANTI-CAP ANTITIJELA
KONJUGAT U CAP-EIA
KONJUGAT U CAP-EIA SE SASTOJI OD
CAP KOJI JE OZNAČEN SA
“ENZYME HORSE-RADISH PEROXIDASE (PO)”
+
CAP
PO
CAP-PO
(KONJUGAT)
PRIPREMA UZORKA CAP-EIA
ŠKAMPI KOJI SADRŽE CAP
HOMOGENIZACIJA
ŠKAMPI U BLENDERU (MIKSER)
EKSTRAKCIJA CAP
SA ETHYL ACETATOM
REKONSTITUCIUJA
U RAZBLAŽIVAČU
UZORAK U CAP-EIA
KORACI (CAP-EIA)
1. DODAJE SE NEKOLIKO REAGENSA, REDOM A, B, C
C
ZEČIJA ANTI CAP ANTITIJELA
B
KONJUGAT
A
STANDARDI, UZORCI,
NEG. KONTROLE
OVČIJA ANTI-ZEČIJA ANTITIJELA
ČELIJE ZA REAKCIJU
KORACI (CAP-EIA)
2. PLOČICA SE INKUBIRA 60 MIN NA 4˚C
3. PLOČICE SE ZATIM PERU SA SREDSTVOM ZA ISPIRANJE
( WASHING BUFFER)
SADA MOŽEMO UOČITI DVIJE SITUACIJE:
 UZORAK SADRŽI ODREĐEN IZNOS CAP-a
 UZORAK NE SADRŽI CAP
KORACI (CAP-EIA)
UZORAK SA CAP-om:
UZORAK BEZ CAP-a:
KONJUGAT, A TAKOĐER
I SLOBODNI CAP SE
MOŽE VEZATI ZA
ANTI-CAP ANTITIJELA
JEDINO JE KONJUGAT
NA RASPOLAGANJU
ZA VEZIVANJE NA
ANTI-CAP ANTITIJELA
KORACI (CAP-EIA)
4. ENZIMSKI SUBSTRAT/CHROMOGEN (H2O2/TMB) JE DODAN
5. PLOČICA SE INKUBIRA NA 30 MIN PRI 25˚C
ZA VRIJEME INKUBACIJE, BEZBOJNI HROMOGEN JE
PRETVOREN OD STRANE ENZIMA U PRODUKT PLAVE REAKCIJE.
TMB/H2O2
KORACI (CAP-EIA)
PLAVA BOJA JE OBRNUTO PROPORCIONALNA KOLIČINI
GRANICE CAP-a. ŠTO JE VIŠE CAP-a PRISUTNO U
UZORKU, TO SE JE MANJE BOJE RAZVILO.
H2O2/TMB
KORACI (CAP-EIA)
6. RAZVOJ BOJE SE ZAUSTAVLJA DODAVANJEM
0.5 M SUMPORNE KISELINE (H2SO4)
U UVJETIMA KISELINE, PLAVA BOJA SE MIJENJA U ŽUTU
OČITAVANJE REZULTATA
7. ABSORPCIJA SVAKE ČELIJICE SE MJERI NA 450 nm
8. KOLIČINA CAP-a U UZORKU SE KALKULIRA
% max.
Chloramphenicol
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0,01
0,1
y = -11,295Ln(x) + 44,093
R2 = 0,9717
1 conc. (ng/ml) 10
100
Greetings from Holland
Thanks
for your attention!
KONTAKTIRAJTE “EUROTEST”
GENERALNI ZASTUPNIK I DISTRIBUTER FIRME "EURO-DIAGNOSTICA"/"EUROPROXIMA" NIZOZEMSKA
- i drugih firmi iz oblasti veterinarska dijagnostika, sigurnost hrane i zdravlje životinja (Bosna i Hercegovina, Slovenija, Hrvatska, Srbija, Crna Gora, Makedonija)
Društvo za zastupanje stranih firmi, uvoz-izvoz, trgovinu i analizu živežnih namirnica i predmeta opće upotrebe
71000 Sarajevo, Bosna i Hercegovina
Tel/fax: +387-33-555-801, mobitel: +387-61-201-711, e-mail: [email protected] www.eurotest.co.ba
Rješenje Federalnog ministarstva zdravstva br. 04-37-6717/02, Rješenje Općinskog suda u Sarajevu br. 065-0-Reg-08-003669
Broj računa: 140-101-00034083-22, "Volksbank BH" d.d. Sarajevo BiH
Identifikacijski broj: 4200787740000, PDV identifikacijski broj: 200787740000