Transcript CONTRIBUTION A L’ETUDE DES PROPRIETES TENSIOACTIVES ET MEMBRANAIRES D’ESTERS DERIVES DE LA GLYCINE BETAINE Par NSIMBA ZAKANDA Francis Promoteurs: Dr.

CONTRIBUTION A L’ETUDE DES
PROPRIETES TENSIOACTIVES ET
MEMBRANAIRES D’ESTERS DERIVES
DE LA GLYCINE BETAINE
Par NSIMBA ZAKANDA Francis
Promoteurs: Dr. DELEU Magali et Prof. MVUMBI LELO Georges
1
Plan
1. Introduction
2. Objectifs
3. Synthèse de chlorures d’alkylbétaïnates
4. Etude de leurs propriétés interfaciales
5. Etude de leurs propriétés membranaires
6. Conclusion générale et perspectives
2
1. Introduction
• Industrie de la betterave à sucre
~ 20% de la
production mondiale du sucre
- Mélasse (7% de Glycine bétaïne, GB)
Problèmes
environnementaux
• Industrie de l’éthanol
bioéthanol (UE: 3,7 109 L en
2009)
- Vinasse (4% de GB)
Problèmes à l’écosystème
• Valoriser: mélasse et vinasse
Récupérer la GB
3
• GB
- Produits cosmétiques, pharmaceutiques et
alimentaires; en médecine
- Tête hydrophile d’agents tensioactifs
• ~ 80% de tensioactifs
origine pétrochimique,
toxiques et non biodégradables
• Besoin important de nouveaux TA
non toxiques et biodégradables
origine végétale,
• Ce travail
Valorisation de GB: propriétés physicochimiques et biologiques
Fig. 1. Glycine bétaïne
4
Tabl. 1.Quelques dérivés amphiphiles de la GB
Noms
Alkylbétaïnes
Alkylbétaïnates (esters)
Structures
CH 3
I+
CnH 2n+1-N-CH 2-COO I
CH 3
(n= 8, 10,12,14,16)
CH3
I+
CH3-N-CH2-COOCnH2n+1
I
(n= 2,10,12,14)
CH3
Auteurs
Iwasaki et al., 1991 ; Li et al.,
2005
Lundberg et al., 2004 ; TehraniBagha et al., 2007a
2: non TA
N-bétaïnate de chitosan1
Holappa et al., 2004 ; Holapa et
al., 2006 ; Mourya et al., 2008
1: non TA
Tehrani-Bagha et al., 2007a
Dodécyl bétaïnate dimère
Amphiphiles
bipolaires
(bolaamphiphiles)
avec
une tête de bétaïne
Berchel et al., 2008
5
 Alkylbétaïnes et alkylbétaïnates (TA):
- Stabilité (pH), biodégradation
- Activités de surface (tension de surface, cmc, pouvoirs
moussant et dispersant)
- Activités sur les membranes modèles (PC, stratum
corneum…) et réels (bactéries, érythrocytes)
 Bétaïnate d’amidon: - Activité sur l’humidification et la
résistance du papier
 N-bétaïnate de chitosan: - Activité antimicrobienne
 Esters dimères TA de la GB: - Activités de surface
(tension de surface, cmc)
 Amphiphiles bipolaires avec une tête de GB: - Etude
d’auto-assemblage
Choix porté sur les Alkylbétaïnates (esters TA de la GB):
- origine végétale, biodégradables, moins toxiques, moins étudiés
- Charge positive permanente: Intérêt médical
6
2. Objectifs
• Synthétiser les alkylbétaïnates (réactifs plus
écologiques que ceux utilisés précédemment)
• Etudier leurs propriétés interfaciales (films
monomoléculaires à l’interface air-eau)
• Etudier leurs propriétés membranaires
(interactions avec des modèles de membranes
biologiques dans des environnements différents)
7
3. Synthèse de chlorures
d’alkylbétaïnates
(CnBC)
8
3.1. Activation de la GB et acylation des alcools
gras par le chlorure de bétaïnyle
O
CH3
O
I+
II
CH3-N-CH2-C
+ S
I
O_ Cl
Cl
CH3
CH2Cl2
60°C 1h
GB
CH3 _ O
I+ Cl
CH3-N-CH2-C
I
O-R
CH3
O
_
II
S + Cl
II
O
CH3
O
I+
CH3-N-CH2-C
+
I
Cl
CH3
Chlorure de bétaïnyle
+
2M2B
H-O-R
+ HCl
45°C 6h
R = C10 - C16
Alcool
CnBC
Schéma 2
9
3.2. Optimisation des conditions de synthèse du chlorure
d’hexadecylbétaïnate (C16BC)
Cl +
(CH3)3N-CH2-COCl + C16H33-OH
Cl +
(CH3)3N-CH2-COOC16H33 + HCl
• Effet du catalyseur/base: Pyridine, DMAP,
(CH3)3N et sans catalyseur/base
• Effet du rapport molaire Cl- de bétaïnyle/1hexadecanol (5:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2 et 1:3)
• Effet de la T° (25, 35, 45, 55 et 65°C)
• Effet de la concentration des réactifs (16.5;
33; 66; 132 et 264 mmol/L)
10
(a) Basic catalyst
Catalyseur / base
40
Pyridine
30
Triethylamine
DMAP
20
80
No base
Temperature
Yield (%)
Yield (%)
50
(b) Molar ratio
100
60
60
40
20
10
0
0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
5 I1
3 I1
2 I1
1 I1
1 I2
1 I3
Tim e (h)
Betainyl chloride/1-hexadecanol m olar ratio
100
(c)Temperature
100
90
60
Yield (%)
Yield (%)
80
40
20
80
(d) Concentration
70
60
Rdt: 94± 3 %
50
0
25
35
45
Tem perature (°C)
55
65
Rapport molaire
40
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
Re actant conce ntration (m ol/L)
Fig. 2. Optimisation de la synthèse de C16BC
- CnBC peuvent être synthétisés à partir de la GB via son dérivé d’acyle
et les alcools gras en mileu organique avec un meilleur rendement en
absence de catalyseur/base.
11
4. Etude des propriétés interfaciales
de CnBC
12
4.1. Propriétés des films monomoléculaires
50
Surface pressure (mN/m)
Surface pressure (mN/m)
60
C10BC
50
C12BC
(a)
40
C14BC
C16BC
30
A0, Ac,
πc(a)
,
20
10
C16BC
Compression 1
40
Expansion 1
Compression 2
30
Expansion 2
(b)
20
10
0
0
0
5
10
15
20
25
Area (A²/molecule)
30
35
40
0
5
10
15
20
25
30
35
40
Area A²/molecule)
Fig. 3. (a) Isotherme de compression de pressure de surface (π)- aire moléculaire (A) de
CnBC, (b) Cycles de compression-expansion de C16BC (Sous-phase aqueuse, pH= 5.7, 1.5
mM, 30 µL et 20°C)
- CnBC avec n ≥14 peuvent former des films monomoléculaires
insolubles à l’interface air-eau à 20°C
13
4.2. Influence des conditions expérimentales (pH,
T°, anions et force ionique) sur le comportement
interfacial du film de C16BC
Surface pressure (mN/m)
(a)
50
pH 3
pH 5
40
Water (pH 5.7)
A0, Ac
30
pH 7
pH 9
Πc
20
pH 12
10
0
0
5
10
15
20
25
Area (A²/molecule)
30
35
40
Compressibility modulus (mN/m)
pH, T = 20°C
60
(b)
500
pH 3
pH 5
400
Water (pH 5,7)
pH 7
300
pH 9
pH 12
200
100
Cs-1
0
0
10
20
30
40
50
60
Surface pressure (mN/m)
Fig. 4. Isotherme de compression de π–A (a) et Module de compressibilité (b) du film de
C16BC déposé sur la sous-phase aqueuse de différentes pH à 20°C
14
Tabl. 2. Occupation de l’interface, pression de collapse et module de
compressibilité
Temp (°C)
pH
Acide Basique
3 et 5 9 et 12
Anions
Force ionique
Na2SO4
15,20,25,30 Cl-, Br-,OH- SO42-, 0.5; 1; 2; 5; 10
, NO3-,ClO4- HPO42-
A0
+
+
+
+
++
++
Πc
0
0
-
-
+
-
Cs-1
-
+
-
+
-
-
A0: Occupation de l’interface; Πc: Stabilité du film, Cs-1 : Module de compressibilité
++: augmente fortement, +: augmente faiblement; 0: ne change pas; - : diminue
- pH
et anions monovalents ont faiblement influencé l’occupation des
molécules de C16BC à l’interfacial par rapport aux anions divalents et à
la force ionique de Na2SO4 mais la stabilité des films est faiblement
15
influencée dans tous les cas.
4.3. Propriétés d’adsorption
(a)
4
5
4
1.15 µM << CMC
3
C10BC
C12BC
C14BC
C16BC
2
1
Surface pressure (mN/m)
Surface pressure (mN/m)
6
(b)
3,5
C10BC
C12BC
C14BC
C16BC
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
0
0
50
100
150
Time (sec)
200
250
300
0
5
10
15
20
25
Time (sec)
Fig. 5. (a) Kinetics, (b) Enlargement of the early stage of the adsorption of CnBC at
the air-water interface (water, pH 5.7, 1.15 µM, 25°C).
- CnBC injectés dans la sous-phase aqueuse sont capables de s’adsorber
et former des films monomoléculaires à l’interface air-eau à 25°C
16
4.4. Conclusion
- CnBC
s’adsorber et former des films à l’interface air-eau à 25°C
- CnBC avec n ≥ 14
films insolubles à l’interface air-eau à 20°C
- Organisation interfaciale du film de C16BC
faiblement influencée
par le pH et les anions monovalents;
fortement influencée par la
température et les anions divalents, en ce qui concerne l’occupation des
molécules à l’interface
- Stabilité du film
faiblement influencée par des conditions
différentes de la sous-phase aqueuse.
17
5. Etude des propriétés membranaires
de CnBC
18
5.1. Pénétration des CnBC dans les
monocouches lipidiques formées à
l’interface air-eau
• Objectif
- Etudier de manière globale la possibilité d’interaction et de
pénétration des CnBC dans les membranes biologiques
(Monocouches lipidiques)
19
5.1.1. Effet de la longueur de la chaîne alkyle de CnBC
Surface pressure increase (mN/m)
(Films lipidiques: Πi = 30 mN/m)
30
DPPS
25
DPPA
DPPE
20
POPC
15
CHOL
10
5
0
C10BC
C12BC
C14BC
C16BC
Fig. 6. Surface pressure increase induced by the penetration of CnBC into lipid monolayers with
different polar heads at initial surface pressure of 30 mN/m. (water, pH 5.7, 1.15 µM, 25°C).
- CnBC sont capables de pénétrer dans des films lipidiques à 30 mN/m
- Pénétration est indépendante de la chaîne alkyle de CnBC dans les films
formés de lipides chargés négativement mais dépendante de cette chaîne
alkyle dans les films formés de lipides non chargés et zwittérioniques.
20
5.1.2. Cinétique de pénétration de C16BC dans les
monocouches lipidiques
(a) Πi = 30 mN/m, Sous-phase: eau, pH=5,7
Surface pressure (mN/m)
55
DPPS
DPPA
DPPE
POPC
CHOL
50
45
C16BC
40
- Effet de la tête
polaire de lipides
35
30
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
Time (sec)
(b) Πi = 20 mN/m, Sous-phase: PBS, pH=7,4
Surface pressure (mN/m)
50
40
Fig. 7. (a) Kinetics of the C16BC
(1.15µM) penetration into different
lipid monolayers initially
compressed at X mN/m at 25°C:
(a) water, pH 5.7, (b) PBS, pH 7.4.
30
C16BC
20
C16BC-P OP C
10
C16BC-SM
0
C16BC-CHOL
-10
0
500
1000
1500
2000
2500
Tim e (s e c)
- Pénétration de C16BC est favorable dans les films formés de lipides chargés
négativement et de ceux formés de lipides avec des têtes polaires petites.
21
Surface pressure increase
(mN/m)
5.1.3. Pouvoir pénétrant de C16BC dans les monocouches lipidiques
Πe (mN/m)
(a) Sous-phase: eau, pH=5,7
60
50
40
30
DPPS
:49,8
CHOL
:40,7
POPC
:47,1
20
10
0
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Initial surface pressure (mN/m)
Surface pressure increase (mN/m)
(b) Sous-phase: PBS, pH=7,4
45
Πe(mN/m)
:48,9
40
SM
35
POPC
30
CHOL
25
:34,2
:45,7
20
15
10
Fig. 8. Maximal surface
pressure increase induced by
the penetration of C16BC as a
function of the initial surface
pressure of the monolayer.
(water, pH 5.7, 1.15 µM,
25°C).
5
0
0
5
10
15
20
25
30
35
Initial surface pressure (mN/m)
- Pouvoir pénétrant de C16BC dans tous les films lipidiques étudiés est
au dessus de 30 mN/m, pression présumée des membranes biologiques
22
5.1.4. Conclusion
- CnBC
propriétés de surface, affinités pour des films lipidiques
- Pénétration
principalement influencée par les interactions
électrostatiques dans l’eau, l’effet hydrophobe dans le milieu salin et la
taille de la tête polaire de lipides formant les films dans les deux cas
- Dans le milieu fortement salin, l’adsorption à l’interface air-eau et la
pénétration dans les films lipidiques de C16BC
instantanées
- C16BC
capable de pénétrer les membranes biologiques in vivo.
23
5.2. Etude des interactions entre le
C16BC et les lipides
• Objectif
- Qualifier et quantifier les interactions entre le C16BC et les 3
familles de lipides formant le feuillet externe de membranes des
eucaryotes (glycérophospholipides, sphingolipides, stérols)
(Bicouches et monocouches lipidiques, modèles théoriques)
24
5.2.1. Analyse thermodynamique de l’adsorption de C16BC sur les
bicouches lipidiques (liposomes)
Tab. 3. Paramètres thermodynamiques de l’adsorption de C16BC sur les
liposomes (25°C)
Liposome
K
(mM-1)

T S Dwb
wb
D
(Kjmol-1)
GDwb
(Kjmol-1)
(Kjmol-1)
POPC
35.3 ± 2.3
-0.72 ± 0.19
35.17 ± 2.52
-35.9 ± 2.34
SM
41.6 ± 11.0
-0.88 ± 0.18
35.32 ± 0.92
-36.2 ± 0.73
195.2 ± 13.6
-0.93 ± 0.41
39.2 ± 0.58
-40.1 ± 0.17
SM/CHOL (1:1)
- Adsorption
de C16BC sur les liposomes est endothermique, gouvernée
par l’entropie et favorable dans le liposome contenant du CHOL.
25
60
100
C16BC
(a)
50
SM
C16BC/SM (2:1)
40
C16BC/SM (1:1)
30
C16BC/SM (1:2)
20
10
20mN/m
30mN/m
60
40
20
A12 = A1X1 + A2X2
0
0
20
40
60
80
100
120
0
140
0
Area (A²/molecule)
0,2
0,4
0,6
0,8
1
C16BC molar ratio
2
10 mN/m
1,5
0
(c)
20 mN/m
1
30 mN/m
0,5
0
-0,5
-1

G ex 
-1,5
(A
12
 X 1 A1  X 2 A2 )d
0
0,2
10 mN/m
-0,5
20 mN/m
-1
30 mN/m
-1,5
-2
-2,5
(d)
-3
-3,5
0
-2
ΔGM (10-21 J/molecule)
ΔGex (10-21 J/molecule)
10 mN/m
(b)
80
A (A²/molecule)
Surface pressure (mN/m)
5.2.2. Propriétés interfaciales de monocouches mixtes de C16BC/lipide
0,4
0,6
C16BC m olar ratio
0,8
1
-4
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
C16BC m olar ratio
Fig. 9. (a) Surface pressure (π)-area (A) isotherms, (b) Mean area, (c) Excess free energy of
mixing and (d) Total free energy of mixing versus composition plot for C16BC/SM spread onto
26
PBS subphase pH 7.4, 1.5 mM, 25°C.
Tabl. 4. Excès d’énergie libre (ΔGex) et énrgie libre totale (ΔGex) de
mélanges de C16BC et les lipides
C16BC/POPC
C16BC/SM
C16BC/CHOL
2/1
1/1
1/2
2/1
1/1
1/2
2/1
1/1
1/2
102030 102030 102030 102030 102030 102030 102030 102030 102030
ΔGex
ΔGM
+++ +++ +++ +++ - - -
-
-
-
-
+-- 000 000 000
-
-
-
-
ΔGex :missibilité, interaction entre les constituants de la monocouche
ΔGex : stabilité de la monocuouche mixte
+: répulsion/faible attraction,
0: mélange idéal,
- : attraction/faible répulsion, stabilité
Π: 10,20,30 mN/m
-Dans les films mixtes, les molécules de C16BC interagissent avec celles
de POPC et SM mais pas avec celles du CHOL. Néanmoins, le C16BC
forme des films mixtes stables avec les trois lipides.
27
5.2.3. Modélisation moléculaire (Modèles théoriques)
Black: polar contribution
(a)
Grey: Hydrophobic contribution
0
-5
-10
(b)
C16BC/Chol
Chol/Chol
C16BC/POPC
POPC/POPC
-20
C16BC/SM
-15
SM/SM
Energy of interaction (kcal/mol)
5
Fig. 10. (a) Energie totale d’interaction entre
molécules identiques de lipide/ et entre
chaque lipide et C16BC; Assemblage
moléculaire de C16BC avec (b) POPC, (c) SM
et (d) CHOL à l’interface
hydrophobe/hydrophile
(c)
C16BC/POPC
(d)
C16BC/SM
C16BC/CHOL
C16BC interagirait avec POPC et SM via des forces polaires et
hydrophobes mais uniquement via ces dernières avec CHOL
-
28
5.2.4. Conclusion
- C16BC
forte affinité pour les interfaces aqueuse et lipidiques dans
un milieu proche des milieux physiologiques
- Interactions entre le C16BC et le lipide
principalement
hydrophobes et favorisée par les arrangements géométriques impliquant
les interactions polaires ainsi que la complémentarité structurale
- C16BC forme des films mixtes thermodynamiquement stables avec les
lipides formant le feuillet externe des membranes des eucaryotes
29
5.3. Effet d’adsorption de quantités
croissantes de CnBC sur l’intégrité des
liposomes
• Objectif
- Etudier la perméabilité et/ou la solubilisation des liposomes par les
CnBC dans des conditions proches de celles physiologiques
(Bicouches lipidiques)
30
5.3.1. Perméabilité des liposomes (LUV + HPTS-DPX)
C12BC
80
% Leakage
100
C10BC
(a) POPC
C4BC
60
C16BC
40
20
C10BC
(b) POPG
C12BC
80
% Leakage
100
C14BC
C16BC
60
40
20
0
0
0
50
100
150
200
250
0
CnBC (µM)
100
150
200
250
CnBC (µM)
(c) PSC
100
50
100% = Triton X-100
% Leakage
80
C10BC
60
C12BC
40
C14BC
C16BC
20
0
0
50
100
150
200
250
Fig. 11. Libération de HPTS dans les
liposomes par les CnBC: (a) POPC, (b)
POPG et (c ) POPC/SM/CHOL
(50:20:30 mol%)
[CnBC] < et > CMC
CnBC (µM)
général, C10BC, C14BC et C16BC n’ont pas significativement
perméabilisé les liposomes comparativement au C12BC et l’effet de
ce dernier est plus accentué sur le liposome mixte (PSC/SM/CHOL).
31
- En
5.3.2. Titrage des liposomes par des solutions micellaires de
C12BC et C16BC
0.4
Heat flow (µcal/sec)
(a) C12BC/POPG
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.3
0.2
0.1
0
3500
500
0
8000
7000
6000
5000
(b’)
3000
dq/dn (cal/mol)
1000
4000
Time (sec)
1500
(a’)
3000
2000
1000
0
4
1.6 10
1.4 10
4
4
1 10
8000
6000
4000
2000
0
Time (sec)
4
-0.1
-0.4
dq/dn (cal/mol)
(b) C16BC/POPG
-0.2
1.2 10
Heat flow (µcal/sec)
1
2500
2000
1500
1000
500
-500
0
0
-1000
0
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
C12BC concentration (mM)
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
C16BC concentration (mM)
Fig. 12. Titration of micellaire solution of C12BC and C16BC into liposome suspensions. Raw data of C12BC
(a) and C16BC (b) into POPG suspensions. Normalized titration heat versus C12BC (a’) or C16BC (b’) conc. in
the cell.
- C12BC
a destabilisé les liposomes de POPG comparativement au C16BC
32
5.3.3. Taille de liposomes (avant et après titrage)
100
Diameter (nm)
Diam eter (nm )
Fig. 13. Dimension de particules (25°C): après titrage de POPG par C12BC et C16BC
- Dimension
de particules a sensiblement augmenté après titrage de
33
liposomes par les C12BC et C16BC
4573
80,17 99,19 122,7 151,8
2988
64,8
1952
42,34 52,38
1275
0
0
833
20
544
10
40
356
20
60
232
30
(b) C12BC/POPG
80
152
(a) POPG
40
Differential number (%),
Differential number (%),
50
5.3.4. Potentiel zêta de liposomes
(a) POPC
(b) POPG
60
40
40
20
C12BC
C16BC
0
-20
0
50
100
150
CnBC (µM)
200
250
Zeta potential (mV)
Zeta potential (mV)
60
20
0
C12BC
-20
C16BC
-40
0
50
100
150
200
250
-60
CnBC (µM)
Fig. 14. Potentiel zêta après addition des concentrations différentes de C12BC et
C16BC aux suspensions de liposomes: (a) POPC et (b) POPG.
- Le
potentiel zêta des liposomes a augmenté en fonction de la
concentration et de la longueur de la chaîne alkyle de CnBC
34
5.3.5. Conclusion
- Adsorption de CnBC sur les membranes dans un milieu fortement
salin
interactions hydrophobes et non attractions électrostatiques
- Interaction de CnBC avec les membranes
exothermique
processus endo et
- A des concentrations élevées en CnBC (> CMC)
perméabilisation
des membranes, mécanisme probable
formation de pores;
possibilité d’interactions hydrophobes entre les chaînes alkyles des
molécules de CnBC adsorbées sur des liposomes différents
agrégation de ces derniers.
35
6. Conclusion générale et perspectives
36
-CnBC peuvent être synthétisés à partir de la GB et les alcools gras
- Possèdent des propriétés de surface et des affinités intéressantes
pour des membranes biologiques
- Interagissent principalement via des attractions électrostatiques
dans l’eau et des forces hydrophobes dans un mileu fortement salin
- Sont moins toxiques et sont des TA potentiels pour la formulation
des produits de consommation humaine et pour l’usage médical
- Dans l’avenir: - envisager leur synthèse par voie enzymatique,
compléter les études de leurs propriétés de surface (émulsifiante,
solubilisante, stabilité thermique…) et membranaires (bactéries,
érythrocytes) en vue d’exploiter au maximum leurs potentialités
tensioactives et de bien évaluer le degré de leur toxicité in vivo.
37
Publications
1. Nsimba Zakanda F., Paquot M., Mvumbi Lelo G, Deleu M. (2010). Les dérivés de la
glycine bétaïne: méthodes de synthèse et potentialités d’utilisation. Biotechnologie
Agronomie Société et Environnement, 14 (4), 737-748.
2. Nsimba Zakanda F., Laurent P., Paquot M., Mvumbi Lelo G., Deleu M. (2011).
Alkylbetainate chlorides: synthesis and behaviour of monolayers at the air-water
interface. Thin Solid Films, 520, 344-350.
3. Nsimba Zakanda F., Nott K., Paquot M., Mvumbi Lelo G., Deleu M. (2011). Penetration
behaviour of alkylbetainate chlorides into lipid monolayers. Colloids and Surfaces B:
Biointerfaces, 86 (1), 176-180.
4. Nsimba Zakanda F., Lins L., Nott K., Paquot M., Mvumbi Lelo G., Deleu M. (2012).
Interaction of hexadecylbetainate chloride with biological relevant lipids. Langmuir.
DOI: 10.1021/la2040328
5. Nsimba Zakanda F., Lins L., Razafindralambo H., Blecker C., Paquot M., Mvumbi Lelo
G., Deleu M. (XXXX). Integrity of lipid vesicles in presence of alkylbetainate chloride
surfactants: Spectrofluorimetric, Isothermal Titration Calorimetry and Zeta potential
studies.
A soumettre dans: Biochimica et Biophysica Acta (BBA): Biomembranes.
38
Je vous remercie
Glx Agro Bio-Tech / Université de Liège
39