tworzenie kalusa 4:1

Download Report

Transcript tworzenie kalusa 4:1

Slide 1

Biotechnologiczne metody ochrony upraw rolnych
i zwiększenia wydajności produkcji roślinnej


Slide 2

Inżynieria genetyczna i komórkowa roślin

Techniki regeneracji rośliny z fragmentów rośliny wyjściowej


Slide 3

Otrzymywanie kalusa i hodowli zawiesinowej komórek roślinnych


Slide 4

Inżynieria genetyczna i komórkowa roślin
Stosunek auksyn do cytokinin
determinuje sposób wzrostu
10:1 – tworzenie kalusa
4:1 – organogeneza,
tworzenie odnóżek

100:1 – organogeneza,
tworzenie korzeni

Tworzenie kalusa i hodowli zawiesinowej
komórek roślinnych


Slide 5

Inżynieria genetyczna i komórkowa roślin

Metody izolacji i identyfikacji genów roślinnych


Slide 6

Gen (białko)

Czynnik selekcyjny

Działanie (cel molekularny, efekt)

npt11 (NPT11)

Kanamycyna

Podjednostka 30S rybosomu

neo (NPT11)

Neomycyna

Podjednostka 30S rybosomu

hpt (HPT)

Higromycyna

Elongacja łańcucha polipeptydowego

bar (PAT), pat

Fosfinotricyna

Acetylotransferaza fosfonotricyny

gox

Glyfosat

Oksydoreduktaza glyfosatu

EPSPS

Glyfosat

Syntaza EPSP

dhfr

Metotreksat

Reduktaza dihydrofolianowa

csr-1-1

Sulfonylomoczmik

Syntaza acetomleczanu

uid (GUS)

-glukuronidaza

Niebieskie zabarwienie

luc

Lucyferaza

Emisja światła

gfp (GFP)

Białko fluoryzujące

Emisja światła

Niektóre geny markerowe stosowane w technikach transformacji komórek roślinnych


Slide 7

Rośliny transgeniczne

Techniki konstrukcji roślin transgenicznych


Slide 8

Wprowadzanie DNA do roślin

Narośl powstająca w wyniku
zainfekowania rośliny przez
Agrobacterium tumefaciens
Uproszczony schemat mapy plazmidu Ti A. tumefaciens
Wektor skonstruowany na bazie Ti nie zawiera
Sekwencji zaznaczonych na czarno – w ich miejsce
wstawiane są geny markerowe oraz gen wprowadzany


Slide 9

Wprowadzanie DNA do roślin

Zasada działania strzelby biolistycznej


Slide 10

Rośliny transgeniczne – kierunki modyfikacji
- oporność na herbicydy
- odporność na patogenne owady
- odporność na patogenne grzyby, bakterie i wirusy
- wytwarzanie czynników biokontrolnych
- otrzymywanie roślin hybrydowych
- polepszenie właściwości odżywczych produktów roślinnych
- zwiększenie pobierania przez rośliny źródeł azotu i fosforu
- adaptacja do środowisk zasolonych i suchych
- akumulacja olei
- zwiększenie aktywności fotosyntetycznej
- zastosowanie roślin jako bioreaktorów do produkcji szczepionek,
biofarmaceutyków i chemikaliów


Slide 11

Rośliny transgeniczne – przykłady zastosowań praktycznych
Roślina

Liczba
opracowanych
odmian

Cecha

Zaakceptowane w
krajach

Rzepak

16

Oporność na herbicydy,
modyfikacja składu oleju,
sterylizacja formy męskiej

USA, Japonia Kanada

Goździk

3

Barwa kwiatu, oporność na
herbicydy, zwiększona trwałość
Oporność na herbicydy,
sterylizacja formy męskiej

Australia, UE

Cykoria

1

UE

Bawełna

5

Oporność na herbicydy,
odporność na owady

Len

1

Oporność na herbicydy

Kanada, USA

Kukurydza

22

Oporność na herbicydy,
odporność na owady,
sterylizacja formy męskiej

Argentyna, Kanada,
UE, Japonia, Afryka
Płd, USA

Melon

1

Przedłużenie trwałości

USA

Argentyna, Australia,
Chiny, Japonia,
Meksyk, Afryka Płd,
USA


Slide 12

Rośliny transgeniczne – przykłady zastosowań praktycznych
Roślina

Liczba
opracowanych
odmian

Cecha

Zaakceptowane
w krajach:

Papaja

1

Odporność na wirusy

USA

Ziemniak

4

Odporność na wirusy i owady

Kanada, USA

Ryż

2

Oporność na herbicydy

USA

Soja

7

Oporność na herbicydy,
modyfikacja składu oleju

Argentyna, Brazylia,
Kanada, Japonia,
Meksyk, Afryka Płd,
USA, Urugwaj

Kabaczek

2

Odporność na wirusy

USA

Burak cukrowy

2

Oporność na herbicydy
przedłużenie trwałości

Kanada, USA

Pomidor

6

Przedłużenie trwałości,
odporność na owady

Japonia, Meksyk, USA


Slide 13

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Oporność na herbicydy
-zwiększenie ilości enzymu będącego celem molekularnym
-zastąpienie enzymu będącego celem molekularnym przez wersję
niewrażliwą na herbicyd
- wprowadzenie genu kodującego enzym detoksyfikujący herbicyd

Odporność na owady
Konstrukcja roślin transgenicznych odpornych na patogenne owady stanowi
alternatywę dla stosowania chemicznych pestycydów.
-wprowadzenie genu kodującego toksynę Bacillus thuringensis
-wprowadzenie genu kodującego oksydazę cholesterolową Vip3A, inhibitor
amylazy lub białka odpowiedzi na uszkodzenie mechaniczne


Slide 14

Schemat szlaku biosyntezy aminokwasów aromatycznych w roślinach z zaznaczeniem
miejsca działania herbicydu gliofosatu (Roundup)


Slide 15

Larwy pasożyta kukurydzy zaatakowane
przez B. thuringiensis
8 września 2004 Komisja Europejska podjęła decyzję o dodaniu do listy nasion dopuszczonych do sprzedaży
na terenie UE 17 odmian zmodyfikowanej kukurydzy - MON 810, opracowanej przez biotechnologiczny
koncern Monsanto. Zastosowana modyfikacja uodparnia roślinę na larwy szkodnika-owada - omacnicę
prosowiankę (Ostrinia nubilalis).
Zmodyfikowane komórki rośliny zawierające już w swoim wnętrzu białka Cry są toksyczne po zjedzeniu przez
owada. W środowisku zasadowym przewodu pokarmowego owada następuje aktywacja białka Cry - łączy się
ono ze specyficznymi receptorami w błonach komórek przewodu pokarmowego. Powoduje to powstawanie
otworów w błonie, zniszczenie komórek co doprowadza do śmierci owada.
Dotychczas odkryto ponad 100 genów kodujących białka odpowiednie Cry, co pozwala na specyficzne
wykorzystywanie ich w zwalczaniu konkretnych gatunków szkodników, bez toksycznego wpływ na inne.
Białka Cry są owadobójcze jedynie w odniesieniu do niektórych gatunków motyli (z rodzajów: Lepidoptera,
Diptera, Coleoptera, - stonka ziemniaczana jest wrażliwa, mszyce już nie). Receptory dla tych białek nie
występują na powierzchni komórek jelitowych ssaków, dlatego też ludzie nie są na ich działanie wrażliwi.
Przeprowadzono badania dotyczące bezpieczeństwa, które pokazują, że Cry nie wykazuje żadnej znaczącej
homologii aminokwasów do znanych toksyn białkowych oraz, że jest gwałtownie degradowane w warunkach
symulowanych warunków żołądkowych i nie jest doustnie toksyczne dla myszy.


Slide 16

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Odporność na patogenne drobnoustroje i wirusy
Uzyskanie odporności na infekcje wirusowe poprzez:
a/ wprowadzenie genów lub fragmentów genów wirusa – pathogen
derived resistance
b/ wprowadzenie genu kodującego białko niszczące wirusy
Przykłady: ekspresja genu otoczki wirusa mozaiki tytoniowej w tytoniu;
wprowadzenie genu kodującego rybonuklezę pac1 z drożdży
(specyficznie rozcina dwuniciowy RNA) do ziemniaka czyni
tą roślinę odporną na wirus „potato spindle”
Uzyskanie odporności na infekcje bakteryjne:
a/ wprowadzenie genu kodującego białko niszczące bakterie
b/ zwiększenie naturalnej odporności rośliny


Slide 17

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Odporność na patogenne bakterie
Białka antybakteryjne pochodzące z innych organizmów
Białko

Pochodzenie

Rośłina

Odporność wobec:

Shiva-1

Jedwabnik

Tytoń

Ralstonia
solanacearum

Antaktyna E

Jedwabnik

Jabłoń

Erwinia amylomora

Lizozym

BakterofagT4

Ziemniak

Erwinia carotovora

Lizozym

Ludzki

Tytoń

Pseudomonas
syringae

Laktoferyna

Ludzka

Tytoń

Ralstonia
solanacearum

Tachyplezyna

Krab

Ziemniak

Erwinia carotovora


Slide 18

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Odporność na patogenne bakterie
Hamowanie patogenności bakterii
Białko

Pochodzenie

Rośłina

Odporność wobec:

Białko warunkujące
oporność bakterii
na tabtoksynę

Pseudomonas
syringae

Tytoń

Pseudomonas
syringae

Karbamoilotransferaza
ornitynowa niewrażliwa
na fazeolotosynę

Pseudomonas
syringae vr.
phaseolicola

Fasola

Pseudomonas
syringae

Zwiększenie naturalnej oporności
Białko

Pochodzenie

Rośłina

Odporność wobec:

Liaza pektynowa

Erwinia carotovora

Ziemniak

Erwinia carotovora

Oksydaza glukozowa

Asperillus niger

Ziemniak

Erwinia carotovora

Tionina

Jęczmień

Tytoń

Pseudomonas
syringae


Slide 19

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Sterylizacja form męskich
Usunięcie możliwości wytwarzania pyłku przez formy męskie
roślin transgenicznych, a w efekcie uniemożliwienie horyzontalnego
transferu genów

Zmiana właściwości użytkowych produktów roślinnych
- żywność funkcjonalna, np. ryż wytwarzający
prowitaminę A i białka wiążące żelazo („złoty ryż”)
– geny przeniesione z hiacynta
- Flavr SavrTM – pomidory o zwiększonej trwałości;
gen kodujący poligalaktouronazę wyciszony
dzięki zastosowaniu strategii antysensowej
- kawa o zredukowanej zawartości kofeiny
- słodkie ziemniaki – wprowadzenie genu kodującego
słodkie białko (taumatynę)
- winogrona bezpestkowe


Slide 20

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Adaptacja do warunków stresu
Pochodzenie

Gen

Roślina

Stres

E. coli

BetA

Ziemniak

Wymarzanie

S. cerevisiae

TPS1

Tytoń

Susza

Jęczmień

HVA1

Ryż

Wymarzanie
i zasolenie

Arabidopsis

Fe-SOD

Tytoń

Stres
oksydacyjny


Slide 21

Rośliny transgeniczne – strategie postępowania
Zastosowanie roślin jako bioreaktorów do produkcji szczepionek,
biofarmaceutyków i białek użytkowych
Białko

Roślina

Zastosowanie

Szczepionki
Antygen
powierzchniowy
Toksyna

Ziemniak, sałata*
Ziemniak

Szczepionka przeciwko wirusowi HCVB
Szczepionka przeciwko cholerze

Biofarmaceutyki
Erytropoetyna
Hirudyna
Interferon
Enkefalina

Tytoń
Rzepak
Rzepa
Rzepak

Anemia nerkowa
Przeciwzakrzepowy
Przeciwwirusowy
Przeciwbólowy

Inne białka
-amylaza
Fitaza
Lakkaza
Ksylanaza

Tytoń
Tytoń
Kukurydza
Tytoń

Scukrzanie skrobi
Skarmianie bydła
Przeróbka drewna
Papiernictwo

Poli-3HB

Len*

Tworzywo termoplastyczne

*technologie opracowane w Polsce


Slide 22

Zwierzęta transgeniczne
1. Modyfikacje mające na celu wytwarzanie w organizmie zwierząt białek terapeutycznych
Modyfikowane w tym celu są głównie krowy, kozy, owce, gdyż pożądane białka wytwarzane są w gruczołach mlecznych
i wydzielane z mlekiem. Produkowana jest antytrombina - ludzki enzym - czynnik krzepliwości krwi, pozwala na kontrolę
powstawania zakrzepów, produkcja antytrypsyny - stosowanej w leczeniu rozedmy płuc, erytropoetyny - leczenie anemii.
Owce wytwarzające ludzki enzym, który może pomóc w leczeniu stwardnienia rozsianego.

2. Uzyskanie szybszego wzrostu zwierząt hodowlanych.
Modyfikacje polegające na wprowadzeniu genów produkujących hormon wzrostu.
W ten sposób modyfikowane były głównie ryby: karpie, łososie, ale także
na zwierzętach gospodarskich, świniach, królikach, owcach.

3. Krowy dające więcej mleka, oraz mleko specjalnie przystosowane do produkcji serów.
Zwiększenie laktacji – zastosowanie rekombinowanej somatotropiny bydlęcej (BST)
Krowom wprowadzono dodatkowe kopie genów kodujących proteiny: beta- i kappa- kazeinę. Kazeina jest składnikiem
twarogów i białych serów. Modyfikacje powoduje to, iż z mleka łatwiej jest uzyskać ser - można go uzyskać więcej z tej
samej objętości mleka oraz szybciej.

4. Odporność na choroby.
5. Modyfikowane świnie jako dawcy narządów.


Slide 23

Klonowanie zwierząt
Zasada techniki: 16-komórkowy zarodek pochodzący ze sztucznej inseminacji
jest źródłem jąder komórkowych, Jądra te przenosi się do komórek jajowych
pozbawionych własnych jąder. Powstałe zarodki są następnie hodowane in vitro,
a potem wprowadzane do organizmów matek.

Przykłady dotychczas
sklonowanych zwierząt:
owca Dolly, koń,
pies Snuppy


Slide 24

Biologiczne metody kontroli chorób roślin
Nazwa handlowa

Drobnoustrój

Choroba

Bakterie
Serenade
Cedomon
Camperico
Rózne

Bacillus subtilis
Pseudomonas chlororaphis
Xanthomonas campestris
Bacillus thuringiensis

Grzybice
Grzybice zbóż
Grzybice traw
Choroby wywoływane przez owady

Grzyby//Promieniowce

Mycostop
Binab
Contans WG
Sporodex

Streptomyces griseoviridis
Trichoderma spp.
Coniothyrium minitants
Pseudozyme flocculose

Grzybice roślin w szklarniach
Zgnilizna korzeni
Zgnilizna korzeni
Zgnilizna korzeni

Niektóre komercyjne preparaty drobnoustrojów zapobiegających chorobom roślin

Mechanizmy działania: wytwarzanie antybiotyków, wytwarzanie
enzymów litycznych, pasożytnictwo, współzawodnictwo o składniki
odżywcze, indukcja oporności roślin