Transcript 《食品生物化学实验》课程 实验十一 维生素C含量的测定 一、实验目的 学习2,6-二氯酚靛酚定量测定维生素C 的原理和方法，了解微量滴定管的结构，掌 握微量滴定法的基本操作技术。了解蔬菜、 水果中维生素C含量情况 二、实验原理  还原型抗坏血酸(维生素C)能还原染料2,6二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血 酸。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色， 被还原后变为无色。因此，可用2,6-二氯酚 靛酚滴定样品中还原型抗坏血酸。当抗坏血 酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定 液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰， 样品提取液所还原的标准染料量与样品中所 含的还原型抗坏血酸量成正比。 脱氢抗坏血酸 三、实验步骤 1．样品的处理和提取 称取洗净并用纱布或吸水纸吸干表面水分的新鲜蔬 菜或新鲜水果2O.00g，加2％的草酸100ml，置研钵 或匀浆器制成匀浆。称取匀浆物6.00g，倒入50ml容 量瓶中，以2％草酸液定容至刻度。静置10min，过滤。 滤液备用。 2．标准液的滴定 准确吸取标准抗坏血酸(维生素C)溶液1.00ml于 100ml锥形瓶中，加9m1 1％草酸，用微量滴定管以 0.02％2,6-二氯酚靛酚滴定到淡红色，并保持15s即 为终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多 少毫克抗坏血酸（即计算出滴定度T）。  3．样液的滴定  准确吸取滤液2份，每份10.00 ml，分别放 入2个100 ml锥形瓶中，直接用0.02％ 2,6-二氯酚靛酚滴定到淡红色。

《食品生物化学实验》课程
实验十一 维生素C含量的测定
一、实验目的
学习2,6-二氯酚靛酚定量测定维生素C
的原理和方法，了解微量滴定管的结构，掌
握微量滴定法的基本操作技术。了解蔬菜、
水果中维生素C含量情况
二、实验原理
 还原型抗坏血酸(维生素C)能还原染料2,6二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血
酸。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，
被还原后变为无色。因此，可用2,6-二氯酚
靛酚滴定样品中还原型抗坏血酸。当抗坏血
酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定
液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，
样品提取液所还原的标准染料量与样品中所
含的还原型抗坏血酸量成正比。
脱氢抗坏血酸
三、实验步骤
1．样品的处理和提取
称取洗净并用纱布或吸水纸吸干表面水分的新鲜蔬
菜或新鲜水果2O.00g，加2％的草酸100ml，置研钵
或匀浆器制成匀浆。称取匀浆物6.00g，倒入50ml容
量瓶中，以2％草酸液定容至刻度。静置10min，过滤。
滤液备用。
2．标准液的滴定
准确吸取标准抗坏血酸(维生素C)溶液1.00ml于
100ml锥形瓶中，加9m1 1％草酸，用微量滴定管以
0.02％2,6-二氯酚靛酚滴定到淡红色，并保持15s即
为终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多
少毫克抗坏血酸（即计算出滴定度T）。
 3．样液的滴定
 准确吸取滤液2份，每份10.00 ml，分别放
入2个100 ml锥形瓶中，直接用0.02％
2,6-二氯酚靛酚滴定到淡红色。
四、实验结果
计算所用果实的维生素C含量。
T = C标准VitC × VVitC÷ V染料
样品中维生素C含量(mg／lOOg)= V × T × 100/Ｗ
式中：
VVitC：所取标准抗坏血酸(维生素C)的体积（ml）
V染料：为滴定标准抗坏血酸所消耗的2,6-二氯酚靛酚的体积（ml）
Ｖ：为滴定样品时所消耗的2,6-二氯酚靛酚的体积（ml）
Ｔ：为1ml 2,6-二氯酚靛酚溶液所氧化抗坏血酸的毫克数（mg）
Ｗ：为滴定时所用样液所含样品的克数（g）
五、讨论分析
1、维生素C在生物体内有什么作用？
2、用用2,6-二氯酚靛酚法测定的维生素C是否
是维生素C的总含量？为什么？
六、改进试验建议
附：仪器和试剂
1．材料：柑橘、鲜枣、洋葱、甘蓝、辣椒等。
2．仪器
（1）微量滴定管(3m1)：（2）移液管(1ml、10ml)；（3）
容量瓶(50m1)；（4）锥形瓶(100m1)；（5）漏斗；
（6）扭力天平；（7）研钵或匀浆器。
3．试剂
（1）1％草酸溶液；（2）2％草酸溶液；（3）0.1mg/ml
标准抗坏血酸溶液(准确称取50.Omg纯抗坏血酸，溶于
1％草酸溶液，并稀释至500m1。贮棕色瓶，冷藏，最
好在使用前临时配制)：（4）0.02％（或0.01％）2,6二氯酚靛酚溶液(溶解50mg 2,6-二氯酚靛酚于约200ml
含有52 mg碳酸氢钠的热水中，冷却后加水稀释至
250m1。过滤后，装于棕色瓶内，冷藏保存(4℃可保存
一星期)。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定)。
注意事项
(1)本法简单易行，但有下列缺点：一、抗坏血酸还能以脱氢抗
坏血酸及结合抗坏血酸形式存在，它们同样具有抗坏血酸的生
理作用，但不能将2,6-二氯酚靛酚还原脱色。二、生物组织提
取液中，常有色素物质存在，影响滴定，虽可用白陶土将提取
液脱色，但最适用的白陶土不易得到、往往不能将颜色脱尽。
(2)市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以滴定标准抗坏血酸溶液时，
染料用量在2ml左为宜。
(3)提取样液时，如浆状物泡沫很多，可加数滴辛醇或丁醇，若
浆状物不易过滤，可离心取上清液测定。
(4) 2％草酸可抑制抗坏血酸氧化酶，1％草酸因浓度太低不能
起到上述作用。偏磷酸有样功效。若样品中含有大量Fe2+，
可用8％醋酸溶液提取，如仍用偏磷酸或草酸为提取剂，
Fe2+可以还原二氯酚靛酚，如用乙酸则Fe2+不会很快与染
料起作用。
(5)样品滴定过程宜迅速，一般不超过2min。滴定所用的染料不
应少于1ml或多于3ml如样品含抗坏血酸太高或太低时，可酌
量增减样液。另外，样品中某些杂质亦能还原二氯靛酚，但速
度均较抗坏血酸慢，故终点以淡红色存在15s为准。