Transcript Sección Inmunología. Instituto de Investigaciones Médicas “Alfredo Lanari” Proteinograma: Cuatificación de Proteínas Totales y sus fracciones con métodos instrumentales adecuados (densitometría, colorimetría, nefelometría, turbidimetría) Separación.

Sección Inmunología.
Instituto de Investigaciones Médicas
“Alfredo Lanari”
Proteinograma:
Cuatificación de Proteínas Totales y sus fracciones con métodos instrumentales
adecuados (densitometría, colorimetría, nefelometría, turbidimetría)
Separación de las proteínas presentes en sangre y orina y su análisis cualitativo,
para la detección de anormalidades proteicas.
Proteínas:
Conformadas por: C – H – O – N – S, que forman aminoácidos
Estructura: los aminoácidos forman péptidos formando largas cadenas que se
pliegan entre sí dando forma a las estructuras proteicas complejas.
Propiedades físicas:
 Movilidad electroforética
 Punto isoeléctrico
 Peso molecular
 Coeficiente de difusión
 Viscosidad
 Coeficiente de extinción
Propiedades químicas:
 Estructura química
 Precipitación
Método de elección para el estudio de las proteínas: electroforesis sobre sostén.
Instrumental:
 Sostén o soporte: acetato de celulosa; agar/agarosa; gel; poliacrilamida, etc.
 Buffer: soluciones iónicas de pH alcalino. Buffer Veronal sódico/Michaelis.
 Voltaje: otorgado mediante fuente de energía. Voltaje 220 V; ≈ 7mA por tira.
 Material a separar: suero fresco o congelado a -20ºC; orina de 24 hs; LCR.
¿Suero o plasma?
Plasma: encontramos proteínas como el fibrinógeno, la protrombina, el
factor V y el factor VIII. Corren electroforéticamente en la
fracción Gama del proteinograma. Se puede confundir con
componente monoclonal.
Suero: las proteínas anteriormente mencionadas son consumidas en la
formación del coágulo. No existen interferencias.
Orina de 24 hs: concentrada de acuerdo a la proteinuria del paciente.
Fracciones de un proteinograma:
Albúmina:
o Valor normal: 3.0 - 5.0 g/l.
o Indicadora del estado nutricional del paciente.
Fracción Alfa 1 (α1)
o α1 antitripsina
o α1 antiquimiotripsina
o α1 glucoproteína ácida
o α1 fetoproteína
+
ALBÚMINA
ALFA 1 (α1)
ALFA 2 (α2)
BETA (β)
Fracción Alfa 2 (α2)
o Haptoglobina
o Ceruloplasmina
o α2 macroglobulina
o Lipoproteinas
Fracción Beta (β)
o Transferrina
o β2 microglobulina
o Componentes C3; C4 y C5 del complemento
Fracción Gamma (γ)
o Inmunoglobulinas IgG; IgA; IgM, IgD, IgE
GAMMA
-
Corrida electroforética NORMAL:
PROTEÍNA
AUMENTO
Albúmina
o Hemoconcentración
o Bisalbuminemia
o Lesión hepática
o Malnutrición
o Pérdida de proteínas por orina
Alfa 1 (α1)
o Enfermedades inflamatorias
agudas o crónicas
o Anormalidades hematológicas
o Lesión hepática
o Déficit de α1 antitripsina
o Malnutrición
o Reactante de fase aguda
o Anemia hemólítica
o Hepatitis aguda
o Lesiones hepáticas severas
o Síndrome nefrótico
Alfa 2 (α2)
o Suero hemolizado
o Tumores malignos
DISMINUCIÓN
Corrida electroforética NORMAL:
o Embarazo
o Enfermedades inflamatorias
o Síndrome nefrótico
o Pérdida de proteínas
o Tumores
Beta (β)
o Anemia ferropénica crónica
o Hepatitis aguda
Gama (γ)
o Aumento policlonal de las
Inmunoglobulinas
o Aumento monoclonal
o Aumento biclonal o
biclonalidad
o
o
o
o
o
Pérdida de proteínas
Síndromes deficitarios
Linfomas
Leucemias
Mieloma micromolecular
Aumento policlonal de las Inmunoglobulinas: varios clones de Linfocitos B se
activan frente a un estímulo, generando un aumento difuso de las
inmunoglobulinas.
o Hepatopatías agudas (Cirrosis biliar primaria; Hepatitis Autoinmune)
o Infecciones crónicas (Tuberculosis; HIV; parasitosis; malaria)
o Enfermedades autoinmunes (Lupus Eritematoso sistémico; Artritis
Reumatoidea; Síndrome de Sjögren, Polimiositis)
Aumento monoclonal de las Inmunoglobulinas: un único clon de Linfocitos B y
con una especificidad única, genera un único tipo de Inmunoglobulina en forma
de banda homogénea.
¿ Cómo estudiar una banda monoclonal?
o Dosaje de Proteínas Totales y Albúmina
o Dosaje de Inmunoglobulinas
o Determinar “identidad estructural” de la banda
• Tipo de cadena pesada: IgG; IgA; IgM; IgD
• Tipo de cadena liviana: Kappa o Lambda
o Métodos
•
•
•
de identificación:
Inmunoelectroforesis en suero y orina de 24 hs.
Inmunofijación en suero. Eventualemente Inmunofijación en orina
Difusión simple en orina de 24 hs.
Inmunoelectroforesis:
1. Electroforesis en agar o gel
2. Aplicación de antisuero mono o poli específico
3. Difusión por 24 hs.
4. Lavado 24 hs
5. Revelado
Inmunofijación:
1. Electroforesis en gel
2. Aplicación de antisuero monoespecífico
3. Difusión 15 min.
4. Lavado y revelado
Aumento biclonal de las Inmunoglobulinas: dos clones de linfocitos B con
especificidad única o diferente, generan dos bandas homogéneas.
Suero: doble banda en zona de Beta y
Gamma lenta.
Orina de 24 hs concentrada: Albúmina
Inmunofijación en suero: doble especificidad: IgG
e IgA, cadena liviana Kappa.
Disminución de las Inmunoglobulinas
Hipogamma común variable del adulto:
Mieloma micromolecular
Suero: disminución de las Inmunoglobulinas y banda
en zona de Gamma rápida.
Orina de 24 hs: banda en zona de Gama rápida.
Inmunofijación en suero: banda de cadena liviana Lambda
IgA
IgG
IgM
Kappa
Lambda
Difusión simple de orina: cadena
liviana Lambda.
Cuidemos a nuestro Hogar haciendo una
adecuada recolección de los residuos
peligrosos.
Muchas gracias
Sección Inmunología