Transcript 4 Кузнецов (размер файла 3.4 Мб)
Кузнецов О.Е.
к.м.н., доцент кафедры клиническая трансфузиология
Технологии обеспечения инфекционной безопасности.
1. Лабораторный скрининг донорской крови; 2. Карантинизация; 3. Лейкофильтрация; 4. Инактивация.
1943 год - первый зарегистрированный случай гемотрансфузионной передачи вирусной инфекции*
1969 г. - начало тестирования донорской крови на HBsAg 1970 г. - введение тестирования крови на АЛТ 1985 г. - появление anti-HIV теста 1990 г.- введение anti-HCV теста
1997 г. – внедрение NAT скрининга донорской крови в мире 2008-2010 год – внедрение NAT скрининга в России
*P. Beeson. Jaundice occurring one to four months after transfusion of blood or plasma report of seven cases. JAMA. 1943;121(17):1332-1334
Технологии серологического скрининга.
ИФА
Иммуноферментный планшетный анализатор
Evolis ИХЛА
Иммунохемилюминесцентный анализатор Abbott ARCHITECT
Структура брака на станции переливания крови Департамента здравоохранения г. Москвы Маркеры
Аг/Ат ВИЧ HBsAg { Сумм. антитела сифилис АЛТ Всего
2011 г.
0,06% 0,12% 0,45% 0,41% 3,3%
4,34% 2012 г.
0,05% 0,09% 0,55% 0,3% 3,1%
3,82% 2013 г
0,05% 0,12% 0,36% 0,34% 2,78%
3,65%
Сравнительная таблица результатов серологического скрининга Учреждение службы Кол-во первично подтвержденных реактивных реактивных крови доноров Кол-во доноров.
Ижевск
{
Калининград
9,31% 7,13% 0,66% 0,44% 0,79% 0,65%
Димитровград
0,41% 0,3% *по данным анкетирования
Внедрение NAT тестирования в мире
Russia Russia Russia
ОПЫТ Германии
1995-1996 гг. –формирование команды специалистов для разработки “in house” технологий NAT скрининга в Германии (Institute Frankfurt am Main)
Автоматизированная «закрытая » система Zelos x100 В Германии с 1999-2009 гг.
зафиксированы случаи гемотрансфузионной передачи вирусов у NAT обследованных:
1 случай HCV (10 МE/мл), 1 случай ВИЧ (2007г)
П риказ Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 16 апреля 2008 г. N 175н "О внесении изменений в приказ N 364 "Об утверждении Порядка медицинского обследования донора крови и ее компонентов“
3.3.4. Кровь доноров подвергается
плазмы для фракционирования
обязательному тестированию на поверхностный антиген вируса гепатита В, на антитела к вирусам гепатита С, ВИЧ-1, ВИЧ-2, на антитела к возбудителю сифилиса.
Образцы плазмы с отрицательными результатами серологических ИФА-тестов объединят в минипулы и подвергают исследованию на наличие
нуклеиновых кислот ВИЧ, вирусов гепатита С.
Постановление Правительства РФ от 31.12 10 г. N 1230 "Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови…"
10.
В целях выявления маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов B и C и возбудителя сифилиса необходимо использовать следующие иммунологические и молекулярно-биологические методы:
б) молекулярно-биологические методы:
метод тестирования нуклеиновых кислот, метод
мультиплексного
одновременном
анализа
обнаружении
,
основанный нуклеиновых на кислот нескольких возбудителей инфекций, 12. Молекулярно-биологические исследования проводятся
дополнительно
(до, после, одновременно) к обязательным иммунологическим исследованиям
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 11 января 2011 г. N 1 "Об утверждении СП 3.1.5.2826-10 "ПРОФИЛАКТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ"
8.4.2.11. Безопасность компонентов крови с малым сроком годности
должна
дополнительно
подтверждаться ПЦР и другими методами NAT технологии.
8.4.5.1.
Запрещается переливание донорской крови
ее компонентов,
не обследованных
и на наличие возбудителей гемотрансмиссивных инфекций, в том числе ВИЧ,
с использованием иммунологических и молекулярно-биологических методов.
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 22.10.2013 N 58 "Об утверждении СП 3.1.3112-13 "ПРОФИЛАКТИКА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА C”
Приложение 2
Контингенты, подлежащие обязательному обследованию на наличие вируса гепатита С anti-HCV IgG и РНК в сыворотке (плазме) крови: Доноры крови (ее компонентов). При каждой донации или каждом взятии донорского материала.
Постановление от 9 октября 2013 г. N 52 Об утверждении СП 3.1.7.3107-13 "ПРОФИЛАКТИКА ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА"
7.4. Проводятся:
лабораторное обследование на ЛЗН (с помощью ПЦР) доноров крови
в эпидемический сезон на территориях с высоким уровнем эпидемического риска при регистрации случаев ЛЗН с поражением центральной нервной системы;
В РФ зарегистрирован 181
случай заболевания ЛЗН, в том числе 31 с поражением ЦНС (2013 г.) Области: Ростовская, Липецкая).
Волгоградская, Астраханская, Саратовская, Челябинская, Новосибирская, Воронежская,
Собственный опыт в развитии NAT скрининга 2008 год – первый опыт применения «открытых» систем для скрининга донорской крови с ручным выделением
2012 гг
. – использование автоматизированных «закрытых» систем для NAT скрининга донорской крови
Частота выявления маркеров гемотрансмиссивных инфекций среди доноров (платные и безвозмездные) Год 2012 2013 Год 2012 2013
Абс.
18 12
HBV
% 0,18 0,17 ИФА метод Абс.
87
35 HCV
% 0,85
0,48
Абс.
13
6 HIV
% 0,13
0,08 Сифилис
Абс. % 60 0,59
12 0,17
ПЦР метод в мультиплексном формате Абс.
15 9
HBV
% 0,14 0,13 Абс.
69
24 HCV
% 0,64
0,31
Абс.
13
5 HIV
% 0,13
0,07
Отношение NAT (+) образцов к положительным по серологии
Регион Азиатско Тихоокеанский Северная Америка
Вирус HIV-1 HCV HBV HIV-1 Отношение к серологии (+) 100% 69% 86% 89%
NAT тестирование не заменяет серологический метод, даже при использовании высокочувствительных тест-систем.
HCV 68% HBV 55%
Европа Центр Крови Первого МГМУ
HIV-1 98% HCV 75% HBV
HIV-1 95% HCV
72%
69% HBV 81%
* С дополнениями W. K Roth, M.P. Busch, A. Shuller et al.: International survey on NAT testing of blood donation: expanding implementation and yield from 1999 to 2009 Vox Sanguinis (2012) 102
Центр крови Первого МГМУ и СПК ДЗ г. Москвы
За период с 2010 по 2013 год скрининговыми NAT– тестами обследовано
621 124
образцов ,
120 NAT(+) в серонегативном периоде
(47 РНК HCV, 69 ДНК HBV и 4 РНК HIV)
Частота выявления 1: 5 176
Технологии: автоматизированный комплекс Cobas s 201(Hoffmann-La Roche)
Название учреждения
Результаты NAT скрининга донорской крови в серонегативный период
Период Кол-во обследован ных Кол-во NAT (+) Частота выявления NAT(+) Производитель тест-системы Саратовская областная станция переливания крови*
01.2008 03.2011
118 420 Пул из 10 4 HCV
1:29605
ЦНИИЭ Роспотребнадзора
ГУМП СК «Сангвис» г. Пятигорск*
03.2010 03.2011
10 937 Пул из 10 4 HCV 1HBV
1:2188
ЦНИИЭ Роспотребнадзора
Ульяновская областная станция переливания крови**
05.2010 05.2012
51 767 Пул из 7-10 5 HCV 3 HIV 1 HBV 1:5752 *Данные, получены по результатам анкетирования **Е.В. Леготина, Л.М. Шишкина/Вектор-Бест" N2(64) 2012 ЗАО “Вектор Бест”
Кол-во NAT(+),серология (-) в мире с момента внедрения молекулярного скрининга Регион
Африка Вирус Кол-во обследованных NAT(+) HIV-1 HCV HBV 2 202 295 2 202 295 2 202 295 81 4 232 Азиатско Тихоокеанский Европа Северная Америка HIV-1 HCV HBV HIV-1 HCV HBV HIV-1 HCV HBV 71 458 330 71 458 330 50 679 100 110 860 111 139 474 595 56 342 555 87 652 586 89 652 687 5 062 264
HIV-1 272 520 696 Все страны HCV HBV 303 196 074 114 286 214
44 169 1091 73 206 550 45 299 11
244 680 1884
Десятилетний опыт проведения NAT скрининга донорской крови в мире позволил выявить около
3000
инфицированных донаций International survey on NAT testing of blood donation: expanding implementation and yield from 1999 to2009 Vox Sanguinis (2012) 102
Технологии и размер пула в странах мира
ID Slovenia South 6 Brazil Italy Finland Africa Australia Taiwan USA USA France SingaporeFrance Thailand Latvia Russia Spain 8 12 Belgium Brazil 16 South 24 South Korea Korea Estonia Estonia Australia Canada Ireland USA UK France USA USA France Spain 48 Netherlands UK Greece Denmark Kuwait Greece Israel Poland Hong KongPoland Portugal Portugal 96 Austria Germany UK 20 Japan 10-24 Italy 16-40 Switzerland
* C дополнениями. W. K Roth, M.P. Busch, A. Shuller et al.: International survey on NAT testing of blood donation: expanding implementation and yield from 1999 to2009 Vox Sanguinis (2012) 102
2015 год
Современный молекулярный скрининг в Службе крови – это применение автоматизированных, «закрытых» мультиплексных систем.
Объективная оценка и интерпретация результатов Стандартизация исследований Высокое качество выполнения исследований Автоматизированные системы Большой объем исследований, снижение трудозатрат Пониженные требования к квалификация персонала Документирование всех этапов исследования
I. Обязательное требование к лабораторным исследованиям –
ДОСТОВЕРНОСТЬ
результатов.
получаемых II. Обязательное условие работы диагностической лаборатории –
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
проводимых исследований.
Система контроля качества
Стандартизация этапов лабораторного исследования всех Анализ результатов внутрилабораторного контроля качества Внешняя оценка качества (межлабораторный контроль качества) ФСВОК – это осуществление контроля качества клинических лабораторных исследований на уровне системы здравоохранения
Результаты проведения ФСВОК по России в процентах РНК HCV ложноположит.
Ложноотрицат. 2013 до 2 до19
700 МЕ/мл
2014
до 2,4
до 9,4
103 МЕ/мл
ДНК HBV ложноположит.
Ложноотрицат. 2013 до 11 до 13
721 МЕ/мл
2014 до 5,7 до 7,5
998 МЕ/мл
РНК HIV ложноположит.
Ложноотрицат.
2013 до 2 до 27
100 копий/мл
2014 до 0,9 до 19
743 копий/мл
Необходим специальный раздел для контроля лабораторного скрининга в Службе крови
Аналитическая чувствительность различных тест-систем Cobas TaqScreen HBV, МЕ/мл HCV, МЕ/мл HIV-1 копий/мл
2,3 6,8 18,3 5 10 20
HCV/HBV/HIV-FL, ЦНИИЭ РеалБест ВГВ,ВГС,ВИЧ, Вектор бест
5 15 20
Сравнительные результаты различных моделей пула в эксперименте
Исследование 20 независимых образцов плазмы: NAT (+) , Серология (-), полученных в процессе рутинного NAT скрининга донорской крови.
Название тест-системы пул из 6 пул из 5 индив.
сobas TaqScreen MPX
{
HCV/HBV/HIV-FL 19/20 17/20 18/20 20/20 20/20 HCV
4,50 х10 2 копий/мл;
HBV
4,1 х10 1 копий/мл;
HBV
7,50 х10 1 копий/мл Прямая зависимость выявления положительных образцов в низкой концентрации от размера пула с помощью разных тест-систем.
Случай из практики
Донор: HBsAg – отрицательный, a-HBc - положительный ДНК HBV –положительный
Вирусная нагрузка менее 20 МЕ /мл
{
Cobas s 201, сobas TaqScreen MPX 2.0
индив пул из 6 7/10 2/10 Станции TECAN Freedom EVO, РеалБест ДельтаМаг ВГВ/ВГС/ВИЧ, РеалБест ДНК ВГВ 0 0
«Молчащая» форма гепатита B
При использовании «открытых» систем и пулировании необходимо учитывать:
1.
Эпидемиологическая ситуация в стране по данной вирусной инфекции; 2. Характеристики оборудования и тест-системы; 3. Биологические свойства вирусов; 4. Эффективность тестирования
.
Несмотря на то, что в России регламентирован скрининг донорской крови только на HBV, HCV, HIV, с целью повышения вирусной безопасности гемотрансфузий у иммунокомпрометированных реципиентов , (с иммунодефицитами, реципиентов костного мозга, солидных органов, новорожденных и т.д.), целесообразно проводить скрининг доноров на маркеры герпесвирусных инфекций.
Классификация передачи CMV групп риска впервые была посттрансфузионной предложена Dr. Jutta K.Preiksaitis в 2000 г.
Группа 1: высокий риск
Заболеваемость и смертность четко ассоциированы с CMV-инфекцией;
Рекомендации: переливание CMV серонегативных компонентов крови (
экстремально низким весом (<1500 г) от серонегативных матерей, серонегативные реципиенты серонегативных доноров.
аутологичных новорожденные с или аллогенных трансплантатов костного мозга, серонегативные реципиенты органов от
Частота выявления маркеров герпесвирусов у доноров крови n=300 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 84,0% 3,3% ИФА метод 86,7% 7,3% 2,3% 72,0% 12,9% антител герпесвирусов в активной форме IgG/ IgM -CMV IgG-NA/ IgG-EA/ IgM VCA-EBV IgG-HHV6 ПЦР метод в мультиплексном формате 30,70% 35% 30% 25% 20% 15% 10% 5% 0% 6,30% 2,70% 2,00% EBV HHV-6 CMV EBV и HHV6
Уровень вирусной нагрузки герпесвирусов у доноров крови Параметры EBV HHV-6 CMV Вирусная нагрузка, копий/мл 4,1x10 2 - 1,5x10 6 4,6x10 2 - 8,7x10 6 5,7x10 2 - 2,3x10 4 менее 10 3 77,2%
(71/92)
57,9%
(11/19)
87,5%
(7/8)
в пределах 10 3 -10 5 21,7%
(20/92)
31,6%
(6/19)
12,5%
(1/8)
более 10 5 1,1%
(1/92)
10,5%
(2/19) Мультиплексные тест-системы позволяют расширить спектр выявляемых вирусов (в рамках одной постановки выявить до шести вирусов: CMV, EBV, HHV-6, HCV, HBV, HIV ) и упростить процедуру молекулярного скрининга
Остаточный риск передачи гемотрансмиссивных инфекций
В основе расчета модель: инцидентность / период “окна” 1. При определении остаточного риска инфицирования учитывали только кадровых доноров («repeat donors»).
Schreiber G.B. et al. Risk of transfusion-transmitted viral infections. N. Engl. J. Med. 1996;
2. В настоящее время предложен подход «single-sample» (единого образца), который позволяет определять инцидентность и остаточный риск у всех категорий доноров в целом.
Zou, et al. Prevalence, incidence, and residual risk of human immunodeficiency virus and hepatitis C virus infections among United States blood donors since the introduction of nucleic acid testing. Transfusion, 50, 2010
Остаточный риск трансфузионного инфицирования на 1 млн. донаций HBV HCV HIV
без NAT с NAT без NAT с NAT без NAT до NAT
США, Япония
15,9 1,02
*
9,7 0,87 2,03 0,68
РФ
337 971 13.35
162 3,2
1. Seed CR et al Vox Sang. 2013 Nov;105(4) 2. Гематология и тpансфузиология №1, 2014 3. Трансфузиология №4, 2013 , стр 13-22
Остаточный риск трансфузионного инфицирования в Москве на 1 млн. донаций Инфекция Безвозмездные доноры Платные доноры Все категории доноров HIV
3.81
4.34
3.2
HCV
5.34
25.37
13.35
*Гематология и тpансфузиология №1, 2014
Направления развития скрининга донорской крови:
1. Регламентация и стандартизация обязательного NAT скрининга на законодательно уровне; 2. Создание раздела ФСВОК “Служба { 3. Создание архива донорских образцов; 4. Регулярное проведение расчета остаточных рисков трансфузионного инфицирования;
По данным ВОЗ, за последние десять лет число заражений ВИЧ инфекцией выросло на 80% Журнал Vangardist, издаю щийся в Вене, отпечатал надпись на обложке нового номера чернилами, в которые добавили кровь троих ВИЧ инфицированных человек с целью привлечь внимание к проблеме ВИЧ и СПИДа.
Также издатели хотят, чтобы люди преодолели страх, брезгливость и попробовали взять в руки журнал.
Знание = Безопасность
http://www.cnet.com/news/magazine prints-cover-with-ink-infused-with-hiv positive-blood/