Transcript un nouveau et efficace booster de la telomerase

UN NOUVEAU ET EFFICACE BOOSTER DE LA TELOMERASE
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RESULTATS EXPERIMENTAUX
1 ère Partie: Résultats de laboratoire sur des cellules humaines
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2 ème Partie: Résultats expérimentaux sur des sujets humains
1 ère Partie
Résultats de laboratoire sur des cellules humaines
Avant-propos
Protocole
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Il est bien connu que la télomérase est le principal agent de protection des télomères au cours de la
division cellulaire [7].
Des tests récents, en particulier sur des souris, ont montré l'efficacité de certaines plantes, tout en
déterminant que ces plantes n'ont pas d'effet cancérogène [7, 8].
Le Prix Nobel de physiologie ou médecine 2009 a été décerné à Elizabeth H. Blackburn, Carol W.
Greider et Jack Szostak W. pour leur découverte de la protection des télomères par la télomérase.
Ces extraits de plantes sont actuellement en vente sous le nom générique de "protocole Patton" à un prix
de 2200 $ pour un traitement de six mois. Nous avons testé ces extraits de plantes sur fibroblastes cellules
humaines de type de MRC5 et trouvé des preuves d'un effet significatif sur la mesure de la vie de la
cellule humaine [9].
Des expériences ont été effectuées sur une souche de cellules MRC5 alimenté avec un milieu DMEM
(milieu de Eagle modifié par Dulbecco) et un «agent activateur de la télomérase» dont les composés ne
sont pas de divulgués dans le présent document.
Les cellules MRC-5 sont une culture de fibroblastes diploïdes humaines en mesure de se reproduire in
vitro pendant environ 50 doublements de population, après quoi elles deviennent sénescentes et cessent de
se répliquer d’où leur qualification de «lignée cellulaire finie.
Nous avons travaillé sur la souche marquée 11D007 en date du 04/2011 et âgée de 30 doublements de
population.
Le milieu est fabriqué à partir du milieu DMEM et on mélange avec ces composés supplémentaires
suivants
: • sérum de veau foetal à 10%
• Glutamine 1%
• Pénicilline (10 000 U / ml) et streptomycine (10 000 pg / ml) à 1%
Les échantillons de référence MRC5 ainsi que la culture de MRC5 nourrie avec notre «Telomerase Agent
Activator» (TAA pour faire court) ont été cultivés dans des puits selon les conditions habituelles de
culture (CO2, température, ...).
Lors d'une première expérience, nous avons 6,4% de cellules supplémentaires pour MRC5 nourries avec
notre TAA.
Après avoir réglé le pourcentage de composés dans le TAA, nous avons lancé une deuxième expérience et
réalisé une augmentation de la population de cellules de 19% lorsqu'elle est alimentée avec notre TAA.
Pour déterminer si la différence entre la quantité de cellules supplémentaires dans l'échantillon de
référence et le milieu modifié résulte de cellules sénescentes encore actives plutôt que de jeunes cellules
divisées, nous avons réalisé une nouvelle expérience.
La caractéristique principale de cette expérience réside dans la contrainte lièe à l'espace limité pour les
cellules de se développer sans limites spatiales. De cette façon l’ensemble des cultures atteint le même
nombre de cellules dans le même espace à coloniser. Le niveau d'activité de la densité optique de ces
cellules est en proportion directe avec leur âge puisque l'activité des cellules diminue à mesure que les
cellules vieillissent. Pour obtenir un chiffre global sur le niveau d'activité de nos échantillons, nous avons
travaillé avec le test XTT. Les échantillons ont été cultivés dans deux séries indépendantes de 12 puits
indépendants pendant une semaine. Afin d'équilibrer le facteur de bruit lié à des différences de quantité de
cellules, qui ont été comparées les uns aux autres en ce qui concerne leur niveau d'activité optique, nous
avons fait l'hypothèse que les échantillons de cellules peuvent atteindre une différence aléatoire de 20%
en quantité. En général, nous n'avons pas vu une telle variation dans les niveaux de population dans un
espace fini, mais nous avons pris en compte ce facteur de bruit afin d'écarter tout résultat aberrant
Résultats
Au fur et à mesure que les cellules vieillissent, le pourcentage de cellules vieillissantes et leur mortalité
augmentent ce qui entraîne une moindre activité du test XTT.
Le taux de mortalité des cellules de référence (nourries sans notre TAA) étant fixé à 100, le taux de
mortalité des cellules sous TAA est tombé à 50, soit 2 fois plus faible que dans la population de référence.
Étant donné que l'échantillon de MRC5 nourri avec notre TAA compte autant de cellules que dans
l’échantillon de référence de cellules MRC5, le TAA a entrainé la survie de 2 fois plus de cellules que
dans les échantillons dépourvus de TAA.
Cela conduit à la conclusion que ces cellules survivantes sont des cellules «sénescentes» fonctionnant
encore à un niveau acceptable d'activité selon le test XTT.
En conclusion, selon nos expériences et les données recueillies à partir de la littérature scientifique, notre
TAA aide les cellules à préserver l’érosion des télomères de telle sorte que les cellules peuvent survivre
plus longtemps que pourraient le faire les cellules en condition «naturelle».
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Selon notre modèle biologique et en tenant compte du niveau de bruit tel que spécifié ci-dessus,
l'espérance de vie supplémentaire obtenue sous TAA pourrait être 1,6 fois plus élevée que l'espérance de
vie normale.
Comparaison du pourcentage de mort par vieillissement des cellules MRC5 pendant une semaine
de culture avec ou sans présence du TAA.
Barre blanche : résultat comparatif entre les 2 échantillons (rouge et bleu) selon la
présence de TAA (barre bleue) ou sans TAA (barre rouge)
REFERENCES
1. Smith FP and Stuart GA, Chinese Medicinal Herbs, 1973 Georgetown Press, San Francisco, CA.
2. Yang Shouzhong (translator), The Divine Farmer's Materia Medica, 1997 Blue Poppy Press, Boulder, CO.
3. Dharmananda S, The Jin-Yuan medical reforms, 2001 START Manuscripts, ITM, Portland, OR.
4. Huang Bingshan and Wang Yuxia, Thousand Formulas and Thousand Herbs of Traditional Chinese
Medicine, vol. 2, 1993 Heilongjiang Education Press, Harbin.
5. Yang Yifan, Chinese Herbal Medicines Comparisons and Characteristics, 2002 Churchill Livingstone,
London.
6. State Administration of Traditional Chinese Medicine, Advanced Textbook on Traditional Chinese
Medicine and Pharmacology, (vol. 2) 1995 New World Press, Beijing.
7. Bernardes de Jesus, B., Vera, E., Schneeberger, K., Tejera, A. M., Ayuso, E., Bosch, F. and Blasco, M. A.
(2012), Telomerase gene therapy in adult and old mice delays aging and increases longevity without
increasing cancer. EMBO Mol Med. doi: 10.1002/emmm.201200245.
8. Calvin B. Harley,1,6 Weimin Liu,2 Maria Blasco,3 Elsa Vera,3 William H. Andrews,4 Laura A. Briggs,4
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and Joseph M. Raffaele5. REJUVENATION RESEARCH. Volume 14, Number 1, 2011. ª Mary Ann
n.
Liebert, Inc. DOI: 10.1089/rej.2010.1085
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9. Caterini R, Trials to extend MRC5 cell life expectancy induced by a telomerase activator agent. Report in
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University of Lyon, VALBEX Laboratory, 06/2012.
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2 ième Partie
Résultats expérimentaux sur des sujets humains
UN APERÇU SUR UN ACTIVATEUR NATUREL DE LA TELOMERASE
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Nos travaux préliminaires ont montré qu’il est possible de fournir une protection aux télomères des
mammifères ainsi que de combattre le raccourcissement de ceux-ci afin d'augmenter l'espérance de vie.
Le raccourcissement des télomères et la sénescence cellulaire (1) sont intimement liés.
Le raccourcissement des télomères se poursuit tout au long du vieillissement cellulaire que ce soit in vivo
ou bien dans la vie réelle de tous les jours (2, 3). En outre, la relation entre le raccourcissement des
télomères et la sénescence a été établie en constatant le raccourcissement de la durée de vie de cellules
mutantes de levure en leur imposant en laboratoire un système défectueux de régulation de la protection
de leurs télomères (4).
Les chromosomes sont de longues tiges d'acide désoxyribonucléique (ADN), le matériel génétique qui
contient les éléments de base de la vie. L'ADN contient un code spécifique qui donne des instructions à
notre corps sur la façon de grandir, de se développer. Les instructions sont organisées en unités appelées
gènes.
Les chromosomes servent de stockage de cette matière importante qu’est l’ADN, se divisant
périodiquement au cours de la division cellulaire pour faire des copies de l'ADN qu'ils contiennent. Les
chromosomes sont également très importants dans la reproduction sexuelle, car ils permettent à un
organisme de passer son matériel génétique à la descendance.
Dans les organismes dont les cellules sont dotées de noyaux, appelés les eucaryotes, les chromosomes se
trouvent à l'intérieur du noyau. La plupart de ces micro-organismes ont un ensemble de chromosomes qui
viennent en paires. Dans les cellules structurelles, chaque cellule conserve un ensemble complet de
chromosomes, dans ce qui est connu comme forme diploïde, se référant au fait que les chromosomes
contiennent deux copies de chaque gène.
Les télomères sont les extrémités des chromosomes et ont un rôle essentiel dans la protection de leur
intégrité. (5) Les télomères sont formés par des répétitions en tandem d'une séquence d'ADN, qui est
conservée tout au long de l'évolution (TTAGGG chez les vertébrés) et des protéines associées (les soidisant protéines télomères contraignant ou «shelterings»).
La fonction des télomères est de protéger extrémités des chromosomes de l’érosion de l'ADN et des
activités de dégradation, par conséquent, assurer le bon fonctionnement et la viabilité des cellules.
La télomérase est une enzyme qui est capable de maintenir les télomères et la réparation des télomères
courts. A cet effet, la télomérase ajoute des répétitions télomériques «de novo» aux extrémités
chromosomiques. Dans des conditions non pathologiques la télomérase est exprimée dans les cellules
pluripotentes (stades précoces du développement de l'embryon), ainsi que dans les cellules souches
d'adulte. Les cellules saines produisent généralement peu ou pas de télomérase et, en conséquence de cela,
les télomères raccourcissent progressivement lors des cycles successifs de division cellulaire, jusqu'à ce
qu'ils atteignent une longueur critique qui déclenche la mort cellulaire ou un arrêt irréversible de la cellule
appelé sénescence réplicative
Si une cellule se divise de manière récursive, à un moment donné tous les descendants atteindront leur
limite de Hayflick [6] qui est censé être située entre 50 et 70 dans la vie d'une personne [7].
La relation entre la perte des télomères et la sénescence a été établie par la durée de vie finie imposée sur
les cellules mutantes de levure hébergeant un système de maintien des télomères défaillant (4).
Les télomères sont progressivement érodés tandis que les cellules vieillissent comme la conséquence de
cycles cumulés de la division cellulaire lors du maintien ou de la régénérescence tissulaire. Cela se
produit aussi bien dans les cellules différenciées que dans les cellules souches.
Il existe des preuves solides à partir de modèles de souris transgéniques qui montrent que l'accumulation
des télomères courts est suffisante pour provoquer vieillissement organique des animaux et que la
diminution de la vitesse de raccourcissement des télomères avec l'âge, tels que l'expression forcée de
l'enzyme télomérase, est également suffisant pour retarder le vieillissement cellulaire et augmenter la
longévité des mamifères. Une variété de syndromes de vieillissement prématurés sont associés à des
télomères courts [8]. Ainsi, les stratégies thérapeutiques basées sur l'activation de la télomérase sont
envisagées comme potentiellement importantes pour traiter les problèmes liés à l'âge.
La longueur des télomères à un âge donné est l'un des meilleurs marqueurs moléculaires du vieillissement
d'un organisme et peut donc être utilisée pour estimer l’âge biologique des sujets.
Matériel et méthode
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Toutes les analyses ont été menées par le laboratoire LABCO, Barcelone (Espagne), lequel est une
référence internationale en matière de mesure de la longueur des télomères par la technique « Q-FISH »
La technologie de LABCO est la seule technologie d'analyse des télomères à grande échelle pour
quantifier l'abondance des télomères courts. Les autres techniques de mesure de la longueur des télomères,
tels que la PCR (réaction en chaîne de la polymérase) ou la cytométrie de flux, ne peuvent déterminer que
la longueur moyenne des télomères d'une cellule ou d'un échantillon, mais sont incapables de mesurer la
véritable cause du vieillissement et ses effets provoquée par le pourcentage de télomères courts car de
légers changements dans le pourcentage des télomères courts en fonction de l’âge des sujets ou bien en
fonction du style de vie ou de la qualité de la vie ne sont pas pris en compte dans la mesure moyenne de la
longueur des télomères. LABCO est un laboratoire qui mesure la longueur des télomères par FISH
quantitative (Q-FISH) sur des noyaux en interphase à la fois sur des coupes de tissus (Telomapping) et
sur des cellules de sang ou tout autre type de cellule qui peut être fixée à une plaque d’analyse
(technologie HT Q-FISH : High Throughput quantitative fluorescence In Situ Hybridization) où les
télomères sont hybridés avec une sonde télomérique identifiée et quantifiée par fluorescence. Chaque
sonde télomérique reconnaît un nombre fixe de répétitions télomériques (paires de bases). Pour cette
raison, l'intensité du signal fluorescent provenant de sondes télomériques qui s'hybrident à un télomère
donné est directement proportionnelle à la longueur des télomères. Enfin, les valeurs de la fluorescence
sont transformées en valeurs de longueur de télomères pour chacun des télomères d'une cellule. De ce fait
il est possible de connaître la longueur moyenne du télomère mais également le pourcentage de télomères
courts dans une population cellulaire. Notre travail vise à protéger la longueur des télomères du
vieillissement et donc a augmenter leur durée moyenne de vie de sorte que les cellules sont capables de
continuer à se diviser et à produire une gestion saine et forte du corps dans son ensemble. Sur le plan
technique tous les sujets ont subi une prise de sang avant de commencer à prendre chaque jour notre
nutriment naturel au cours d'une année. Les résultats issus de ce premier échantillon de sang est marqué
comme "2012" dans la partie suivante de ce rapport.
Au cours d'une année, tous les sujets prennent une capsule chaque matin à jeun.
Ces capsules ont été remplies avec un mélange spécial de nutriments naturels et, après une année, les
mêmes sujets ont subi une seconde analyse télomèrique.
Les résultats issus de ce deuxième échantillon de sang est marqué comme "2013" dans la partie suivante
de ce rapport.
La mesure de la longueur des télomères fournie dans ce rapport a été réalisée par un laboratoire de
renommée internationale en conformité avec les contrôles de qualité (cGMP) et disposant de la meilleure
technologie disponible sur le marché au moment où ce rapport a été publié.
Résultats
Après un an d'une prise quotidienne de nos nutriments naturels tous les résultats montrent la même
augmentation de la longueur des télomères pour tous les sujets humains.
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Pourcentage de télomères courts (< 3Kb)
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SUJETS HUMAINS
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Tableau 1
De 2012 à 2013, les résultats de laboratoire montrent que le pourcentage de télomères courts (<3 kb) est
plus faible en 2013 qu'en 2012.
Cela signifie que nos nutriments induisent une augmentation de la longueur des télomères.
Comparaison de la valeur médiane des télomères courts
SUJETS HUMAINS
Tableau 2
De 2012 à 2013, les résultats de laboratoire montrent (ci-dessus) que la longueur médiane des télomères
est plus importante en 2013 qu'en 2012.
Cela signifie que nos nutriments induisent une augmentation de la longueur des télomères.
SUJETS HUMAINS
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Tableau 3
Une partie des résultats de laboratoire en 2012 (ESLA001040 de référence de l'objet). Classement du
sujet en fonction de ses résultats par rapport à des classes d’âge de référence.
Le sujet âge de 70 ans (ESLA001040) a un âge biologique plus élevé que son âge chronologique. Cette
relation sera totalement inversée après une année de prise de nos produits naturels.
SUJETS HUMAINS
Tableau 4
Autre type de résultat en 2013 après une année de prise de notre produit naturel par le sujet référencé
ESLA001040. On constate que le sujet a changé de classe d’âge par rapport à son pourcentage de
télomères courts (< 3 Kb)
A titre d'exemple: comparaison entre les deux graphiques à barres ci-dessus (2012/2013) en provenance
du même sujet humain référencé ESLA001040.
SUJETS HUMAINS
SUJETS HUMAINS
Différence dans la valeur médiane de la mesure de la longueur des télomères après 1 an de traitement
chez le sujet référencé ESLA001040.
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Conclusion
Bien que la longueur des télomères diminue avec le vieillissement dans la vie de tous les jours, tous les
sujets humains appartenant à notre groupe ont constaté une augmentation de leur longueur des télomères
après un an de traitement avec notre mélange de produits naturels.
Selon la littérature scientifique, cela signifie que tous les sujets humains ont augmenté leur espérance de
vie grâce à l’apport de notre produit naturel après seulement un an de traitement.
Il est important de souligner que de récents travaux ont mis en corrélation la probabilité de développer
certains types de cancer et l’existence de télomères courts chez l’humain [9]. L’augmentation de la
longueur des télomères, selon ces travaux, diminuerait l’apparition de certains types de cancer.
Aucun effet secondaire n’a été détecté et, au vu des résultats remarquables obtenus, notre groupe de sujets
humains a fait le souhait de poursuivre cette consommation de produits naturels.
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REFERENCES
1- G. Bodnar et al., Science279, 349 (1998).
2- C. B. Harley et al., ibid.345, 458 (1990)
3- R. Allsopp et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.89, 10114 (1992)
4- V. Lundblad and J. W. Szostak, Cell 57, 633 (1989)
5- H. J. Cooke and B. A. Smith, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. LI, 213 (1986).
6- Hayflick L, Moorhead PS 1961. Exp Cell Res 25, 3: 585–621 5 (1961)
7- Siegel, Are Telomeres the Key to Aging and Cancer ?’ Learn. Genetics. The University of Utah.
Retrieved (30 September 2013)
8- Blasco MA "Telomeres and human disease: ageing, cancer and beyond". Nature Reviews Genetics
6, 8: 611–22. (2005)
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9 Willeit et al. “Short telomeres are associated with an enhanced risk of fatal cancers “. JAMA 304:
69-75, (2010)
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Richard Catérini eng., PhD, Dr Hab.
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