Transcript DCEM1.2014.10.15.Hémostase Primaire Plaquettes.CG.AD

DCEM 1
Strasbourg, 15 octobre 2014
Hémostase Primaire
Plaquettes
Christian Gachet, Arnaud Dupuis
Etablissement Français du Sang-Alsace
Strasbourg
http://www.efs-alsace.fr/
Introduction
Rôle des plaquettes
1. Intégrité vasculaire et arrêt des hémorragies de la
microcirculation
2. Activation au contact des lésions des vaisseaux à
fort débit
Agrégation
Facilitation de la génération de thrombine
3. Participation au développement de la thrombose et
de l’athérosclérose
EFS-ALSACE
INSERM U.311
Physiologie des plaquettes circulantes
• 150 à 400.000/mm3, discoïdes, 7 à 12 mm3
• Durée de vie : 7 à 9 jours dont 20-30%
transitoirement dans la rate
• Précurseurs 15 millions de mégacaryocytes
dans la moelle osseuse
• 1 mégacaryocyte produit 1.000 à 8.000
plaquettes
Hémostase
L’hémostase assure l’intégrité des vaisseaux sanguins
L’hémostase primaire arrête le saignement
Lésion
vasculaire
Pathologies :
Adhésion et
activation
Agrégation
Arrêt du
saignement
Hémorragies
Thromboses
EFS-ALSACE
INSERM U.311
Hémostase primaire
FLUX
FLUX
FLUX
1
0
(min.)
Cellule
endothéliale
3
(min.)
Aggrégation
Collagène
plaquettaire
FLUX
FLUX
0
1
(min.)
3
Adhésion
plaquettaire
5
(min.)
Clou
plaquettaire
Vasoconstriction
EFS-ALSACE
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Hémostase primaire
FLUX
EFS-ALSACE
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Ultrastructure d'une plaquette
EFS-ALSACE
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500 nm
500 nm
EFS-ALSACE
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MT
A
MTs
B
ocs
m
a
ocs
a
C
d
pm
EFS-ALSACE
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Activation des plaquettes
EFS-ALSACE
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Mécanismes d'activation plaquettaire
Thrombine
TXA2
Sérotonine
ADP (P2Y1)
ACTIVATION
Adrénaline
ADP (P2Y12)
FcRII
Ca2+
P2X1
PL
Fibrinogène
PLA2
GPIIb-IIIa
ATP
IP3 /DAG
AGREGATION
cAMP
PI3-K
PKC
[Ca2+]i
AA
a
COX-1
Ca2+
Ca2+
Ca2+
d
TXA2
PTK
Phosphatidyl
sérine
ACTIVITE
PROCOAGULANTE
FvW
Fibrinogène
PF4
-TG
PDGF
ATP
ADP
5-HT
FcRII
SECRETION
GPVI
GPIa-IIa
Collagène
GPIb-V-IX
FvW
ADHESION
GPIIb-IIIa
FN
Lam
VN
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Récepteurs d’adhésion des plaquettes impliqués
dans l’hémostase primaire
Sous-endothélium
Endothélium
Flux
GPIIb-IIIa
GPIb-V-IX
Artériel
>1000s-1
Fg
R. au collagène
GPVI, a21
Plaquettes
Fg
F Willebrand
Collagène
Adhésion réversible
Fg
Fg
Fg
F Willebrand
Fibrinogène
Fg
Fg
F Willebrand
Collagène
Changement de forme
Adhésion stable
Agrégation
Sécrétion
EFS-ALSACE
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Mécanismes moléculaires des étapes d’adhésion
et d’agrégation plaquettaire
Flux
ADP
Collagène
Adhésion réversible
Roulement
GPIIb-IIIa
GPIIb-IIIa activée
Activation
Adhésion stable
Etalement
Intégrine a2 1
Facteur de Willebrand
Sécrétion
GPIb-V-IX
Fibrinogène
Agrégation
GPVI
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Structure et fonction du complexe GPIb-V-IX
GPIba
145 kDa
CC
C C
FXI, FXII, FXIIa, KH
P-sélectine
Mac-1
Thrombine
fvW
NC
C C
C
CN
C cC C
GPV
82 kDa
GPIX
GPIb
20 kDa
26 kDa
C
C
C
C
N
C C
CC
C
C
C
C
C
C
C
C
C
NC
C C
C
N
C C
C
C C
C NC
C C
S
CaM
C
C
C
C
C
C
N
C C
C C
S
P
P
CaM
14-3-3z
14-3-3z
P
P
PI3K
ABP
Actine
ABP
SIGNALISATION
EFS-ALSACE
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Structure du facteur Willebrand (1)
-
Glycoprotéine multimérique de très grande taille, formée d’unités répétitives
(dimères de 270.000 daltons) polymérisés par des ponts disulfure
-
Synthétisé dans la cellule endothéliale et le mégacaryocyte
-
La sous-unité est stockée au niveau des corps de Weibel-Palade de la cellule
endothéliale, puis secrétée dans le plasma à la suite de stimulations
physiologiques
Structure du facteur Willebrand (2)
- Clivage du propeptide et libération de multimères de
500.000 daltons à 10-20 millions de daltons
- Ces multimères sont présents sous forme repliée et
prennent une forme allongée sous l’effet des forces de
cisaillement à la paroi
- Cet allongement permet d’exposer des domaines
fonctionnels dans chaque monomère et leur permet de
jouer leur rôle dans les fonctions de liaison
- Cet allongement permettra aussi le clivage physiologique de
la protéine (protéase du Willebrand, ADAMTS 13)
Fonctions du facteur Willebrand
-
Le vWF se lie au récepteur plaquettaire GP Ib et à des structures
sous-endothéliales comme le collagène, formant un pont entre les
plaquettes et le sous-endothélium des vaisseaux lésés
-
Il joue également le rôle de pont entre les plaquettes adjacentes dans
les vaisseaux ou les forces de cisaillement à la paroi sont élevées,
comme les artérioles, formant de petits agrégats plaquettaires
-
Le vWF se lie également au facteur VIII, de manière indépendante de
la taille des multimères, protégeant le facteur VIII dans ce complexe
et augmentant sa ½ vie (2 heures sans vWF, 8 à 12 h avec, dans la
circulation)
Importance des nucléotides adényliques
Plaquettes Activation
Erythrocytes
Agrégation
ATP / ADP
Endothélium
ATP
ADP AMP
CD39
Pathologie
Maladie du « pool vide »
Défaut héréditaire d’agrégation à l’ADP
Médicaments
Thiénopyridines (ticlopidine/Ticlid®, clopidogrel/Plavix®)
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Compartiments des nucléotides adényliques des
plaquettes
Compartiment granulaire
ADP
NDK
NDK
ATP
d
Ca2+ 2 M
5HT 60 mM
ADP 650 mM
ATP 400 mM
ATP
APY
AMP
ADP
Compartiment
métabolique
AMP
5'-Nu
ATP
Energie
Adénosine
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Transmission lumineuse
Changements morphologiques des plaquettes au
cours de l'agrégation à l'ADP
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ADP cofacteur de l'agrégation plaquettaire
Thrombine
0.1 U/ml
Thrombine
Thrombine
Fibrinogène
ADP
Contrôle
2
Temps (min)
3
Fibrinogène
Collagène
1
Collagène
0
Collagène
35 mg/ml
Collagène
5 mg/ml
Apyrase
Fibrinogène
Transmission lumineuse
Thrombine
0.03 U/ml
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Les récepteurs purinergiques P2 des plaquettes
ADP
ATP
P2X1
P2Y1
P2Y12
AC
Gai2
Gaq
PLC-
cAMP
ATP
PI 3-K
Ca2+
PKB/Akt
Rap1b
Changement de
forme
INITIATION
AMPLIFICATION
VASP
a
d
AGREGATION
PLAQUETTAIRE
EFS-ALSACE
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Activation des plaquettes par le collagène
TXA2 / ADP
Plaquettes
Sécrétion
Adhésion Activation
Collagène
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La GPVI est le principal récepteur
plaquettaire au collagène
TxA2
ADP
?
platelet
collagen
GPIb-V-IX
GPIaIIa
GPVI
GPIIbIIIa
?
CD 36
GPV
von Willebrand factor
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[65%]
collagène
Témoin
fibrinogène
collagène
fibrinogène
collagène
fibrinogène
Transmission lumineuse (%)
Agrégation au collagène
Aspirine
Apyrase
[5%]
[5%]
1 min
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Complexe GPIIb-IIIa/intégrine aIIb3
Signalisation par le complexe GPIIb-IIIa
FLUX
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Molécule de Thrombine
Récepteur PAR-1 de la thrombine
EFS-ALSACE
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Génération de thrombine dépendante
de la plaquette
Surface plaquettaire
procoagulante
Facteur tissulaire leucocytaire
(association leuco-plaquettaire)
Phosphatidyl-sérine
Facteurs de
coagulation
Génération de thrombine
Exposition
de FT
P-sélectine
Leucocyte
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Facteurs importants de
l'hémostase primaire
1. Endothélium vasculaire
2. Matrice sous-endothéliale
3. Protéines adhésives : FVW lié au collagène
4. Activation des plaquettes par l'ADP
5. Génération de thrombine
6. Réseau de fibrine
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Rôle de l’endothélium
Inhibition de l’adhésion et de l’activation plaquettaire
Inhibition de la coagulation
TM
NO
PGI2
PS
Héparan
Stimulation de la fibrinolyse
t-PA
u-PA
13-HODE
ATP
Surface
hémocompatible
ADP AMP
CD39
Cellule au repos
Stimulation de l’adhésion et de l’activation plaquettaire
PAF
vWF
Stimulation de la coagulation
FT
Inhibition de la fibrinolyse
V
PAI-1
15-HETE
TXA2
Phospholipides
anioniques
+++++++++
Récepteurs
Th, IX, IXa, Xa
Cellule activée
EFS-ALSACE
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Hémostase primaire
1. Processus physiologique de maintien de l'homéostasie
2. Première étape de la réparation tissulaire
3. Met en jeu les interactions entre la paroi vasculaire, les
plaquettes et la coagulation dans des conditions de flux
sanguin
4. Les anomalies de l'hémostase primaire sont la cause de
saignements hémorragiques
5. La transfusion de concentrés plaquettaires corrige la
syndrome hémorragique lié aux anomalies plaquettaires
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