Transcript 实验二 蛋白质两性解离和等电点的测定

这样的药物是如何生产的？
一、目的
（1）熟悉蛋白质的两性性质及等电点与蛋
白质分子沉淀的关系
（2）掌握蛋白质等电点的测定方法 (pH法)
二、原理
蛋白质是两性电解质 。
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的pH达到某值，蛋白质颗粒上正负电荷数目相等。
在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动。
此时，溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点(pI)。
不同蛋白质各有其特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化。
可利用此种变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验借观察在不同pH溶液中,酪蛋白的
溶解度以测定其等电点。
用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶
液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出
现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
三、材料
（一）试剂
1mol/L乙酸
0.1mol/L乙酸
0.01mol/L乙酸
0.02mol/LNaOH
0.02mol/L盐酸
0.01%溴甲酚绿指示剂
0.5%酪蛋白溶液
（二）器材
 试管架
 试管：15ml×6
 刻度吸管：1ml×4，2ml×4，10ml×2
 胶头吸管×2
四、操作
一、蛋白质的两性解离
（1）取一支试管，加0.5%酪蛋白1ml，再加溴甲酚绿
指示剂4滴，摇匀。
（2）用胶头滴管慢慢加入0.2mol/L盐酸，边加边摇
直至有大量的沉淀生成。观察溶液颜色的变化。
（3）继续滴加0.2mol/L盐酸，沉淀会逐渐减少以至
消失。观察此时溶液颜色的变化。
（4）滴加0.2mol/L NaOH 进行中和，沉淀又出现。
继续滴加0.2mol/L NaOH，沉淀又逐渐消失。观察
溶液颜色的变化。
二、酪蛋白等电点的测定
（1）取同样规格的试管5支，按下表精确地
加入下列试剂后，充分混悬
（2）用-、+、++、+++等符号表示各管的混浊
度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混
浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。
五、注意事项
 滴加液体后要迅速混匀