Transcript f2噬菌体的检测

大肠杆菌f2噬菌体空斑实验
一、意义
• 由于大肠菌群的生物学特性与肠道病毒之间存在一定差异，
因此用大肠菌群来指示经粪便污染水体的病毒学质量有其
不足之处。有研究表明大肠杆菌噬菌体 (Coliphage) f2是一
种评价水源污染和水处理过程病毒杀灭效率的有希望的指
示生物，其主要优点是： （1）大肠杆菌噬菌体 (Coliphage)
f2是RNA噬菌体，其核酸性质、粒子大小、 pH稳定性等均
与肠道病毒极为接近。（2）大肠杆菌噬菌体经粪便排泄，
在水和废水中存在的数目比肠道病毒多，其数量的季节变
化也与肠道病毒相似。（3）对外界环境和氯、碘等消毒
剂的抵抗力也与肠道病毒相似或略强一些。（4）大肠杆
菌噬菌体的检测与计数等方法也较简易。
二、原理
• 根据f2噬菌体感染大肠杆菌285宿主菌后，
可在宿主细胞内增殖、最后裂解细胞的特
性，将噬菌体适当稀释，再感染宿主细胞，
并利用固体琼脂限制单个感染灶的无限扩
散，而形成肉眼可见的空斑。一般而言，
每个空斑即由一个噬菌体增殖裂解而成，
因此可利用此原理定量检测样品中的噬菌
体数量。
三、试剂及培养基制备
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营养肉汤
2%营养琼脂固体培养基
1%营养琼脂固体培养基
灭菌蒸馏水
• 实验分组： 3人/组
四、实验步骤
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大肠杆菌285宿主菌增菌培养： 接种1～2
个菌落至10～20 ml营养肉汤液体培养基中，
置37 ℃培养10～12 h，备用。
•
融化2%营养琼脂固体培养基，将50 ℃左
右营养琼脂倒入平皿，10～20 ml/皿，冷
却凝固待用。
• 融化小试管中1%营养琼脂固体培养基，置
45 ℃保温，待用。
• 用无菌蒸馏水，将f2噬菌体悬液作系列稀释：
10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6。
• 对以上平皿，按上述稀释度编号，每个稀
释度3皿平行。
• 将不同稀释度f2噬菌体稀释液1 ml、285宿主
菌悬液0.2 ml和约45 ℃，1%营养琼脂5 ml，
混匀，倒入以上平皿，冷却。
• 平皿倒置37 ℃培养16～24 h。
• 观察透明空斑并计数。
f2噬菌体稀释液1 ml
菌悬液0.2 ml
混匀
45 ℃， 1%营养琼
脂5 ml
静置、冷却
Plaque
P1  P2  P3 1
PFU / m l  稀释倍数

n
V
PFU： 空斑形成单位 (plaque-forming units)；
P： 某稀释度计数的空斑数；
n： 某稀释度平行培养瓶数；
v： 培养瓶接种的病毒液体积。
• End