(Tangerina) ESPRESSO NEL TESTICOLO DI RATTO
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Transcript (Tangerina) ESPRESSO NEL TESTICOLO DI RATTO
ISOLAMENTO DI UN NUOVO GENE
(Tangerina) ESPRESSO NEL
TESTICOLO DI RATTO:
LOCALIZZAZIONE SPAZIALE E
TEMPORALE
La Spermatogenesi
Fase Proliferativa o
Spermatogoniale
Meiosi
Spermioistogenesi
Organizzazione del testicolo nei vertebrati
Ampollare (Anamni)
Cistica (Anfibi Anuri)
Tubulare (Rettili, Mammiferi, Uccelli)
Organizzazione ampollare
Organizzazione cistica
Organizzazione tubulare
Studio della spermatogenesi
ANFIBI
MAMMIFERI
RETTILI
Nuovi markers dell’attività testicolare
Prima evidenza della presenza dei recettori Mel1 e
H9 per la melatonina nel testicolo di ratto adulto.
88% di omologia tra la sequenza del
prodotto della PCR ottenuto dal cDNA di
testicolo di ratto e la sequenza dell’mRNA
della Tangerina A (tang-A) di topo
Scopo degli esperimenti
Indagare la presenza della tangerina nel testicolo di ratti
in età prepuberale e adulta e studiarne il profilo di
espressione
Tangerina
Mus musculus
Tre isoforme dovute a splicing alterativo
•
tang-A
di 5705nt
•
tang-B
di 3179nt
•
tang-C
di 2834nt
Splicing alternativo
5’-UTR
Sequenza codificante
5’-
3’-UTR
-3’ tang-A
1349nt
2526nt
5’-
-3’ tang-B
1349nt
5’-
2860nt
-3’ tang-C
Analisi della sequenza amminoacidica
predetta dalla sequenza nucleotidica di
tang-A
Analisi incrociata con due diversi software (DAS e TMpred)
per indagare sull’eventuale presenza di domini
transmembrana
Analisi della sequenza amminoacidica
predetta dalla sequenza nucleotidica di
tang-A
Rappresentazione lineare computerizzata della
proteina
28 S
18 S
12 mesi
6 mesi
1 mese
2 settimane
Localizzazione del
gene Tangerina sul
braccio lungo del
cromosoma 1 di
ratto
Oligonucleotidi per PCR
TangA(1): 5’-caaagaacacttggacccaag-3’
TangA(2): 5’-cacttgtgccttattcaggctg-3’
TangBC(1):5’-cgctcaggttccacttcga-3’
TangBC(2): 5’-gtgatgcagacaccacggtag-3’
T.M. 62°C
LUNGH. 21cb
tang-A
460cb
tang-B
700cb
tang-C
450cb
T.M. 62°C
LUNGH. 22cb
T.M. 62°C
LUNGH. 19cb
T.M. 61,5°C
LUNGH. 21cb
tang-A
460 cb
tang-B
700 cb
tang-C
450 cb
GAPDH
500 cb
Analisi dei prodotti di
RT-PCR nel testicolo di
ratto agli stadi di
sviluppo
presi
in
esame
Ibridazione
dei
prodotti di PCR
ottenuti con gli
oligo per tang-A
e GAPDH con
cDNA marcato di
tang-A e GAPDH
12 mesi
6 mesi
3 mesi
2 settimane
460cb
GAPDH
460cb
tang-A
12 mesi
6 mesi
3 mesi
2 settimane
700cb
460cb
GAPDH
700cb
460cb
tang-C
Ibridazione
dei
prodotti di PCR
ottenuti con gli
oligo per tang-C
e GAPDH con
cDNA marcato di
tang-C e GAPDH
Ibridazione in situ con cRNA antisenso di
tang-C su sezioni di testicolo di ratto adulto
Conclusioni
Prima evidenza dei trascritti della Tangerina nel testicolo di ratto
Presenza delle isoforme tang-A e tang-C e assenza di tang-B
Andamento crescente dei livelli di espressione di tang-A durante lo
sviluppo mentre restano costanti quelli di tang-C
Localizzazione cellulare degli mRNA della Tangerina a livello dei
spermatociti e dei spermatidi