Transcript Penyediaan Tisu Kultur Cendawan

PENYEDIAAN TISU
KULTUR CENDAWAN
Rusidah Ahmad
dan
Prof. Dr. Noorlidah Abdullah
Institut Sains Biologi, Fakulti Sains, Universiti Malaya,
50603 Kuala Lumpur
E-mail: [email protected]
Apa itu Cendawan?
• Cendawan ialah sejenis kulat yang tumbuh di
atas tanah atau sumber nutriennya seperti kayu
dan daun mereput
• Cendawan didapati tumbuh liar dan juga
ditanam oleh manusia sebagai makanan.
Terdapat juga cendawan yang beracun.
• Cendawan mempunyai kepentingan sebagai
sumber makanan, nutraseutik, ubatan, enzim
industri dan lain-lain
Pengelasan Biologi
Domain : Eukariot
Alam : Fungi (kulat)
Filum (5)
Citridiomikota
Deuteromikota
Zigomikota
Askomikota
Basidiomikota
Cendawan
KITARAN HIDUP CENDAWAN
Hifa dari cendawan
mikoriza yang tumbuh
secara simbiosis dengan
akar pokok
Jana buah
Penyebaran spora
Spora/basidiospora
jatuh di atas tanah
dan bercambah
Miselia
membentuk
koloni = kultur
Jana buah muda
/primordia
Dua hifa dari dua spora bercantum
Kepentingan Kultur Cendawan
• Sumber genetik cendawan di dalam
penyelidikan seperti protoplas dan
kejuruteraan genetik cendawan.
• Untuk menghasilkan benih cendawan yang
berkualiti dan bebas daripada penyakit.
• Bioteknologi – untuk menghasilkan sebatian
bioaktif (sebagai sumber ubat baru. Cth:
antikanser)
KAEDAH DAN BAHAN
Penyediaan kultur cendawan
1.Kaedah penyediaan kultur dari spora
2.Kaedah penyediaan tisu janabuah
Kerja Lapangan-pengutipan spesimen cendawan
aktiviti ekspedisi
saintifik dan kerja
lapangan
2)Penyediaan kultur cendawan
Peralatan semasa penyediaan kultur cendawan
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Medium Malt Extract Agar (MEA) di dalam piring petri
Forsep
Pisau
Vaseline
Kabinet laminar flow
Lampu spirit
Botol spray berisi 70% alkohol
1 botol kecil berisi alkohol 70%untuk steril forsep dan pisau
Inkubator dengan suhu 25 °C untuk proses pertumbuhan.
Kaedah penyediaan kultur dari spora
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Jana yang buah matang dan dibersihkan dengan tuala kertas lembab
Kemudian dipotong sebesar 1.5 sm.
Piring Petri diterbalikkan yang mengandungi media dan vaselin
diletakkan pada bahagian penutup piring Petri
Kemudian janabuah yang dipotong tadi diletakkan dengan bahagian
bawah bersemuka dengan medium.
Inkubat dalam inkubator pada suhu 25 °C secara sendeng.
Spora akan jatuh atas medium selepas 1 malam
Tisu dibuang pada penutup piring Petri dan dibersihkan
Teruskan inkubasi selama 5-15 hari
Apabila spora mula bercambah, miselia akan bercantum dan koloni kecil
kelihatan. Kemudian miselia dipindahkan ke medium lain dalam piring
Petri atau botol.
Permindahan dibuat sebanyak lebih kurang sepuluh kali untuk
mendapatkan kultur dikaryon yang tulen.
Proses penyediaan kultur dari spora
Janabuah cendawan dipotong
sebesar 1.5sm
Spora yang tumbuh di atas media
selepas 10 hari
Piring Petri diterbalikkan dan vaselin
diletakkan pada bahagian penutup
piring Petri untuk melekatkan
janabuah
Jana buah yang dipotong tadi
diletakkan dengan bahagian bawah
bersemuka dengan medium
Inkubat dalam inkubator pada
suhu 25 °C secara sendeng
Kaedah penyediaan tisu janabuah
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Pastikan jana buah yang segar, sihat & muda dan dibersihkan
dengan tuala kertas basah.
Forsep dipanaskan hingga merah
Celupkan ke dalam alkohol 70% untuk sterial
Forsep disejukkan dengan menyentuh medium agar dalam piring
Petri
Jana dibelah dan dicubit secebis tisu bahagian dalam jana buah
dengan forsep tadi dan tanam pada medium agar di mana forsep
disejukkan.
Kemudian, Inkubat dalam inkubator pada suhu 25 °C selama
seminggu untuk pertumbuhan miselium berlaku.
Miselium dipindahkan ke medium agar dalam piring petri yang
lain atau dipindahkan ke dalam botol /tiub yang mengandungi
medium agar sendeng untuk simpanan di panggil kultur stok.
Proses penyediaan kultur janabuah
Jana buah cendawan yang
segar, sihat & muda
Jana buah cendawan dibelah
Cubit secebis tisu bahagian
dalam jana buah dengan forsep
Inkubat
dalam
inkubator
pada suhu
25 °C
Pertumbuhan miselium
selepas 1 minggu
Sebisan tisu tadi ditanam
pada medium agar
Sebisan tisu janabuah
cendawan
Faktor – Faktor Mempengaruhi Kejayaan
Kultur Tisu Cendawan
• Peralatan yang lengkap, sesuai dan sempurna.
• Makmal yang bersih, bebas daripada jangkitan
kuman dan bakteria serta kulat.
• Medium yang sesuai dengan keperluan miselia
tisu cendawan dan perlu ditimbang dengan teliti
dan tepat.
• Proses pemindahan kultur tisu cendawan
memerlukan persekitaran yang steril dan mesti
dilakukan di dalam kabinet Laminar flow, untuk
mengelakkan kontaminasi oleh bakteria atau
kulat yang akan merosakkan kultur.