Transcript 層析法的簡介與分類

層析法的簡介與分類
層析法的分類
 依流動相與固定相分類
1. 氣相層析法：GSC、GLC、GBC
2. 液相層析法：LSC、LLC、LBC
 依分離過程的原理分類
1. 吸附層析法
2. 分配層析法
3. 離子交換層析法
4. 凝膠滲透層析法

層析法的簡介與分類
層析法的分類
 依固定相的形式分類
1. 管柱層析法
2. 平面層析法：
薄層層析法、紙層析法

根據物質的吸附性差別進行分離

物理性吸附（表面吸附）

化學性吸附

半化學性吸附

常用的吸附材料：矽膠、氧化鋁、活性炭
色層分析法(Chromatography)
色層分析法(Chromatography)是利用吸附劑
(adsorbent)對於一個溶液中部同成分物質具有
不同的吸附能力，利用另一沖提展延用的溶劑，
予以展延成不同的位置（或高度）將溶液中所
含各種物質加以分離純化的方法。本法為俄國
植物學家M. Tswet於1906年所首創，他利用這
種方法來分離葉綠素，由於在吸附劑上展開後
形成許多色層而命名為色層分析法。
色層分析法(Chromatography)
一般影響溶質在濾紙上移動速率有下列的因素需要考量：
1. 溶質本身的分子量(molecular weight)：分子量較小者，移動
較快。
2. 溶質本身的電荷(charge)：溶質的電荷常受其他存在的溶液的
pH值支配，如天然氨基酸在鹼性溶液中呈負離子狀態。
3. 溶質本身的極性(polarity)：試樣中各成分移動速率之所以不
同，主要導因於各成分對於兩種液相（固定液相及流動液相
）之溶解度(solubility)的不同。
例如：甲物質易溶於水，不易溶在有機溶劑，，而乙物質與
甲相反，則乙物質被有機溶劑攜帶而移動之速率必將大於甲物
質，其移動速率視下式比率（即分配係數）之大小而定：
溶質對有機溶劑的溶解度
分配係數＝
溶質對水的溶解度
色層分析法(Chromatography)
極性化合物（如分子上帶有OH或COOH或NH2較多的
物質），其極性越大親水性越強，故在紙上之移動速率
越慢。
4. 展開用的溶劑種類：分配係數之大小為支配溶質在濾
紙上移動速率的首要因素，改變不同種類的展開溶劑
為改變同一溶質的分配係數之主要方法。
5. 所使用的濾紙的種類：(type of paper used)：
(1)濾紙質地越鬆，溶質移動速率越大。
(2)濾紙越厚，溶質移動速率越快（濾紙越厚，對溶質
的負荷力越大，適用於多量溶質的分離，但各樣品
點的擴散現象亦越顯著，此為其最大缺點）。
6. 溫度(temperature)：溫度越高，溶質移動速度越快。
色層分析法(Chromatography)
Rf值的定義為溶質移動的距離與溶劑移動
距離的比值：
溶質移動的距離 D
Rf 
＝
溶劑移動的距離 L
色層分析法(Chromatography)
求出Rf的用途為：
1. 判定兩種物質是否相同(identification)：在同一條件下，
若兩物質的Rf值相同，可推論他們極可能為同一種物
質；若Rf值不同，則必定是不相同物質。
2. 判定兩種物質能否在該條件下用色層分析法來分離
(separation)：一般而言，在一混合溶劑系中(或單一種溶
劑)兩物質的Rf數值若差別在0.1以上者即可加以分離，
當色點拖尾(tailing)過長，則仍難分離。
3. 測定未知物質為何物：使用相同的展開溶劑系以測定未
知物質之Rf，若與已知物的Rf相比較，即可推測出定該
未知物質。
薄層層析法
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常用的固定相
流動相的要求
分析物的定位：以UV、I2、或水觀
察（物理性檢出法）或噴灑特殊試
劑（化學性檢出法）。
定性分析
定量分析
吸附柱色譜法用於物質的分離

吸附劑的使用量

樣品的製備

洗脫溶劑的使用

減少化學吸附的發生

利用加壓方式加速實驗進行