Transcript 植物的脱病毒培养

第六章
第一节
植物脱病毒技术
植物脱病毒培养的意义
一、意义
1、无性繁殖的植物在感染病毒病后，病毒可能在世代交替
中积累。
2、真菌和细菌病害可医，病毒病无药可治。
3、有性世代可以屏除病毒，但能引起后代的变异，如苹果，
马铃薯、月季等。
4、一旦获得脱病毒植株，可以利用无性系快繁技术迅速扩
繁。
5、脱病毒苗可以大幅度地提高经济植物的产量和品质。
二、脱病毒的含义
“无病毒”植物一词使用相当粗放，不确切
1、植物感染病毒后，再去除，称“脱病毒”苗更确切
2、植物感染病毒可能是复合感染，脱病毒后，可以标明
去掉了哪些病毒。
第二节 脱病毒的途径
一、通过热处理消除病毒
1、原理
①在高于正常的温度下，植物组织中的许多病毒可以被部
分地或完全地“钝化”，但很少伤害甚至不伤害寄主植物。
植物生长区与热处理区关系图解。在热处理中，B-C区是一个关键；
在寄主的热死点C和寄生物的热死点B之间的距离越大，热疗法成功
的机会也就越大。
2、热处理方法
①热水处理：
对休眠芽效果好。
②热空气处理：
对活跃生长的茎尖效果好，既能消除病毒，又能使寄主植
物有较多的存活机会。
温箱处理：对马铃薯、甘薯类的块茎、块根进行处理，效
果好。
热处理室处理：对盆栽植物进行处理效果好。
热处理室中空气干热，容易发生“红蜘蛛”螨虫虫害，并
注意防蚜。
一般用内吸剂农药防治上述虫害的效果比较好。
热恒温处理：
37-38℃，4-6周。
热变温处理：
40℃4小时，20 ℃20小时，对寄主的健壮生长有利。
③茎尖培养与热处理相结合：
效果最好。
注意：
并非所有的病毒都对热处理敏感，等径的和线性的
病毒对热处理敏感。
有时热处理过后的寄主对病害的抗性会降低，比对
照更易患病害。
二、小茎尖培养脱病毒
通行、有效的主流脱病毒技术
(一)、脱病毒培养的原理
现在国际上一般都采用“小茎尖培养”进行脱病毒培养，原因
可能有：
1、在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生
组织中，不存在维管系统。病毒在细胞间移动的另一个途径是
通过胞间连丝，但它的速度极慢，难以追上生长活跃的茎尖。
2、在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，使得病毒无法复
制。
3、倘若在植物体内确实存在“病毒钝化系统”的话，它在分生
组织中应比在任何其他区域都有更高的活性，因而分生组织不
受侵染
4、在茎尖中存在高水平的内源激素，可以抑制病毒的增殖。
（二）外植体
茎尖生长点带1-2个叶原基的小茎尖，0.1-0.3mm
大小。
（三）接种及培养方法
1、接种及解剖用具：解剖针，尖锐有弹性。
虹膜刀，小，锋利。实体显微镜，表面消毒。
2、消毒、接种
消毒液复合使用
70%酒精，30秒左右；
0.1%的HgCl2，8-10分钟；
或饱和漂白粉（10%左右）.
无菌条件下剥取茎尖接种于培养基上。
带一个生长点和一对叶原基的小茎尖
草莓小茎尖培养接种一个月后的生长状况
（四）在茎尖培养中影响脱毒效果的因素
1、培养基
基础培养基可以选用MS培养基，附加生长素、细胞激动素，
茎尖一般会按原来的发育方向发展，加入激素促进其快速
发育。
一般固体培养较好；
液体培养（如滤纸桥法）可以减少愈伤组织的形成。
2、外植体的大小
过小，生长缓慢；过大脱病毒不彻底；叶原基内含有内源
激素，因此带叶原基往往被保留比较好。
3、培养条件
25±2℃，1000lux，12小时黑暗和光照交替进行。
4、外植体的生理状态
活跃生长的芽比休眠芽好，顶芽比侧芽好。
5、热疗方法
小茎尖培养加热处理，效果更好。
6、化学疗法
利用抗病毒制剂，加入到培养基中。
放线菌素-D，放线菌酮能抑制原生质体中的病毒。
二、花药培养脱病毒
1、脱病毒原因：
花粉母细胞减数分裂旺盛，无病毒。花粉粒雄核发育后形成
的再生苗应该是脱病毒苗。
2、存在问题：
单倍化，脱病毒检验。
三、愈伤组织培养法脱病毒
在由受感染的组织形成的愈伤组织中，并非所有的细
胞都均匀一致地带有病毒。在受到TMV侵染的烟草愈伤
组织中，只有40%的细胞受到侵染。
1、脱毒原因：
①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度，
②有些细胞通过突变获得了抗病毒特性，
③抗病毒侵染的细胞可能与敏感细胞一直存在于母体
植株的组织中。
2、存在的问题：愈伤组织的再生能力和再生植株的变
异
五、脱毒效果的检验
（一）检验的意义、目的
小茎尖培养并不能100%的脱掉病毒。
（二）检验的方法：
1、目测法检验：一年要多次检测。
2、指示植物检测
指示植物：蔓陀萝、洋酸浆、苋色黎。
①石英砂接种：取待检植物的叶片，冲洗干净后
放入研钵，加600号石英砂和等体积的
0.1mol/L Na3PO4（缓冲液），研磨后进行摩擦
接种检测。
②蚜虫接种检测
③小叶嫁接法检测
野生东方草莓为鉴定寄主，
如EMK，UC4，UC5等。
接种后10-14天可以存活，3-4周可进行调查。
3、血清学鉴定
鸡冠血、兔耳血
快速、准确、效率高、鉴定量大。
4、电子显微镜鉴定
梯度离心，采取特定病毒沉积层，透射电子显微镜
观察。
六、脱病毒原种的保存
脱病毒植株可以再次感染病毒。
病毒的主要传毒媒介是蚜虫。
在繁殖原种和生产上使用的种苗时，要防蚜。
1、网室防蚜
采用尼龙纱网防蚜，尼龙纱网200-300目。
网室内定期喷药杀虫。
2、土壤消毒
对于土壤传播的病毒如TMV等，应进行土壤消毒。
可以采用福尔马林熏蒸土壤。
注意残毒和药害。
3、割除地上部器官
对于马铃薯这样的以地下贮存器官或营养器官作为繁殖器官
的，可以在结合蚜虫预报，割除地上器官，防止蚜虫传染病
毒。
七、脱病毒苗的优缺点
一般由于脱毒苗消除了病毒对植株的影响和抑制，所以
生长旺盛，产量和品质会得到改善。
但有些脱病毒苗，易感染强系病毒或病菌，造成更大的
危害。
如:
马铃薯脱掉PVX病毒后，对镰孢菌造成的干腐病的敏
感性比相应的受PVX感染的马铃薯要强。日本曾经由
于该原因造成干腐病流行。
病毒交叉保护现象：一种病毒的存在可以使寄主植物有
能力抵抗另一种病毒的侵染的现象。该现象已经受到广
泛的重视