Utilização de Polimorfismos em Análises Forenses

Transcript Utilização de Polimorfismos em Análises Forenses

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Implantado pelo FBI 1998

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Combina a ciência forense + tecnologia eletrônica DNA extraído de

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criminosos evidências coletadas na cena do crime Entre outros Todos os estados americanos podem ter acesso ao Banco de DNA

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Avaliam:

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Reprodutibilidade e exatidão das metodologia utilizadas O FBI acrescenta

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Controle do laboratório Realização de periódicos testes de proficiências ( a cada 180 dias) Auditorias anuais

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Os testes de proficiência são realizados pelo grupos _ ISFG

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Espanhol Português Esses testes constituem:

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Analise de amostras de sangue o outros fluidos biológicos que simulam um caso forense

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Material de coleta

1985_ Alec Jeffreys • Desenvolve as sondas multi-locús para a caracterização de vinculo genético 1998_ FBI • Cria o CODIS

Cronologia

1988_ FBI • Começa a realizar analises por sondas 1999_ Brasil • Resolução SSP- 194 em 2/Ago 1991_ STR • Marcador fluorescentes são descritos pela primeira vez 2000_ Projeto Genoma • Finaliza o sequênciamento • Concluído em Abril de 2003 2004_ SENAP • Online protocolos de padronização de exame de DNA em pericia criminal www.profiva.com.br

Os testes de DNA podem ser utilizados:

Teste de paternidade •Caracterização de vínculos genéticos Desastres em massa •Identificação de fragmentos humanos Investigação histórica Identificação de pessoas desaparecidas Identificação de militares Banco de DNA de criminosos Banco de evidencias biológicas www.profiva.com.br

Sangue Esfregaços bucais Saliva Ossos Dentes Tecidos Órgãos Cabelo Sêmen

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Importante

Polimorfismo Genético

 É a coexistência de alelos múltiplos em um lócus cromossômico; regiões do genoma nas quais existem variações entre as pessoas.

Polimorfismo de sítio de restrição (RFLP)

Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) Polimorfismos de inserção/deleção (indels)

Polimorfismos de minissatélites (VNTR) Polimorfismos de microssatélites (STR)

Recuperação de DNA em amostras de tecidos e fluidos

Amostra (tecidos e fluidos) Quantidade recuperada Análise de RFLP 1mL de sangue Manchas de sangue seco de 1cm 3 20 a 40mg 200ng SIM NÃO Sêmen Sêmen (esfregaço vaginal pós-coito) Cabelo com raiz (contendo bulbo capilar) Saliva 150 a 300mg por mL SIM 0 a 3mg (DNA dos espermatozóides) SIM 1 a 750ng por fio 1 a 10mgpor mL NÃO SIM Análise de STR SIM SIM SIM SIM SIM SIM

Retirado de “Os exames de DNA nos Tribunais”, Revista Ciência Hoje (vol. 29, nº 169 - março/2001)

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OBS: Quantas regiões são necessárias?

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STRs

Fonte de variabilidade; Permitem construir um perfil genético indivíduo-específico • “

DNA fingerprint”

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importante em Genética Forense

Regiões polimórficas do tipo VNTR

• Uma fração de DNA repetido consiste de regiões denominadas mini-satélites ou repetição em tandem de número variável (VNTR – “variable number of tandem repeats”). • Os VNTRs exibem uma enorme variabilidade e são constituídos de 9 à 100 pares de bases repetidos sequencialmente em loci cromossômicos.

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Alec Jeffreys, 1985

DNA fingerprint

Revolucionou a análise do DNA Caracteriza o vinculo genético Identificações das regiões polimórficas

Restriction fragment lenght polymorfism

•DNA digerido (enz. de

restrição)

•Eletroforese •Autorradiação •Analisado

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Determinação de paternidade; Resolução de casos criminais envolvendo:

• Estupro; • Homicídio; • Rapto; • Troca ou abandono de crianças.

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Sangue  padrão-ouro; células epiteliais da mucosa oral: saliva, pontas de cigarro, selos e envelopes, gomas de mascar, copos, tampas de caneta mordidas,...; Pêlos e fios de cabelo (com ou sem o bulbo capilar); Unhas; Esfregaços;

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Manchas de material biológico: líquido seminal, urina, saliva, sangue; Tecidos de biópsias cirúrgicas; Ossadas (carbonizadas ou não); Tecidos mumificados ou congelados; Células deixadas por impressão digital; Dentes; outras

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Métodos disponíveis para utilização:

VNTRs estudados com sondas multilocais; STRs estudados com PCR; DNA mitocondrial (mtDNA); STRs do Cromossomo Y; Técnicas mais recentes.

VNTRs estudados com sondas multilocais

 Princípio do método: após clivagem por endonucleases, cada indivíduo tem um padrão de bandas específico com tamanhos determinados pela presença, ou não, do sítio da enzima e pela quantidade de repetições em tandem. Para que possa-se visualizar, esses fragmentos devem ser hibridizados a sondas radioativas de seqüência invariável.

Técnica de custo razoável; DNA não degradado; Quantidade suficiente de DNA; Várias dificuldades inerentes à técnica.

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STRs estudados com PCR

Princípio do método: Reação de PCR utilizada para copiar extensivamente várias regiões de STR, fornecendo fragmentos de tamanhos diferentes visualizados por eletroforese em gel de poliacrilamida ou por seqüenciamento

Vantagem sobre a técnica de VNTR: como o DNA é “amplificado”, a amostra a ser analisada pode ter uma quantidade inicial muito menor.

Mesmo existindo contaminação por DNA de outras espécies, a técnica de PCR é específica o suficiente para amplificar apenas o DNA humano

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Também contém regiões polimórficas que permitem a “individualiz ação”

Características importantes:

Descendent es recebem apenas da mãe  permite traçar a linhagem materna de uma pessoa É mais resistente à degradação que o DNA nuclear Taxa mutacional do mtDNA é 5-10 vezes maior que a do DNA nuclear nos sejam  poucos mecanismos de reparo permitem que as variações nucleotídeos acumuladas www.profiva.com.br

Princípio do método: Reação de PCR com o objetivo de copiar extensivame nte regiões polimórficas presentes no DNA mitocondria l, analisado posteriorme nte por sequenciam ento

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mtDNA

• Utilizado na identificação de corpos em grandes desastres específico; evolutivos.

 comparar a seqüência de interesse com a obtida nos possíveis irmãos ou ascendentes maternos; • Identificação de maternidade sem o pai (p/ filhos e filhas) • Não identifica um indivíduo • Estudos históricos ou

STRs crY

Características importantes:

• Também contém regiões polimórficas que permitem a

“individualização”;

• Homens recebem apenas do pai 

permite traçar a linhagem paterna de um homem;

• Crossing-over com o crX em regiões homólogas entre os 2

cromossomos.

Identificação de paternidade sem o pai (p/ filhos); Elucidação de estupro (mistura de DNA); Não identifica um indivíduo específico; Estudos históricos ou evolutivos;

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Analise de Repetições curtas ou •STRs Leituras •Laser •Com indicadores marcados com fluoróforos.

Com gel de •poliacrilamida corado por prata

SNPs • Minissequenciamento; • São muito numerosos; • Baixa taxa de mutação; • Requer maior nº de marcadores; Indels Estudados em produtos de amplificação muito curtos (50pb ou menos).

Vantagem sobre STRs em estudos de DNA extremamente degradado (ex: cadáver em estado avançado de decomposição ou carbonizado) www.profiva.com.br

Referencias interessantes

  

http://www.sspds.ce.gov.br/noticiaDetalhada.do?tipoPortal=1&codN oticia=1452&titulo=Reportagens&action=detail http://super.abril.com.br/cotidiano/dna-nao-prova-mais-nada 626306.shtml

http://cienciacontraocrime.blogspot.com.br/2009/08/falsificacao-de dna.html