Transcript MRDinCLL Michel van Gelder 31 mei 2011

Minimal Residual Disease
bepaling bij CLL
Waarom zou je het doen?
Hoe zou het kunnen?
overleving (%)
Overleving na Eerstelijn behandeling met
chemotherapie met / zonder rituximab (anti-CD20)
maanden
Overleving na donor (allogene)
stamceltransplantatie
Waarom werkt allogene
stamceltransplantatie ?
• Donor T-cel anti-CLL effect
• Treedt vaak op na
– verminderen afweeronderdukkende medicatie
– bij optreden graft-versus-host ziekte
– na donor lymfocyt infusie (DLI)
.
Gribben J G et al. Blood 2005;106:4389-4396
©2005 by American Society of Hematology
HOVON 88 CLL
Allogeneic stem cell transplantation after reduced intensity
conditioning for high-risk relapsed or refractory CLL.
A prospective multi-center phase II study
MRD bij CLL
drie reeksen vergeleken met
kappa/lambda/CD19/CD5
Rawstron, Leukemia 2007
werkwijze validatie
• 7 patiënten casus
– nieuwe CLL
– MRD
– zonder CLL
• negen antistof combinaties
• verstuurd naar 10 labs in 9 verschillende
landen
uitkomsten
• laagste inter-lab variatie en minste valspositieve uitslagen met:
– CD20 / CD38 / CD19 / CD5
– CD22 / CD81 / CD19 / CD5
– CD43 / CD79b / CD19 / CD5
waarom niet CD23 ?
• normale CD5 positieve B cellen zijn ook
CD23 positief
• CD23 komt ook voor op subpopulaties van
CD5 negatieve normale B cellen
MRD bij CLL
CD20, CD38, CD19 en CD5
CD20 en CD38 expressie
• CD20
– rijpere B precursors
– rijpe B cellen
• CD38
–
–
–
–
–
geactiveerde T cellen
geactiveerde B cellen
allerlei precursors
plasmacellen
NK cellen
waarom CD20 en CD38 bij MRD ?
B precursors
CD19 gated
normale rijpe B cellen
CLL
volstaat deze reeks ?
ofwel, onderscheidt CD20 en CD38
expressie CLL cellen altijd van normale
rijpe en precursor B cellen ?
CD20 soms op
(rijpere) B cel precursors
= B cel precurors
CD38 soms hoog bij CLL
CD19 gated
geactiveerde CLL
R2
B cel precurors
conclusie
• reeks met CD38 en CD20 volstaat niet in
alle gevallen
MRD bij CLL
CD22, CD81, CD19 en CD5
expressie van CD81 en CD22
• CD81
– T cellen
– B cellen
– Monocyten (zwak)
• CD22
– voorloper en rijpe B
cellen
B-cel CD81 en CD22 expressie
CD19 gated
CLL
MRD met CD22 en CD81
R7 = CLL (moderate CD22)
R8 = CLL (moderate CD22, dim CD81)
conclusie
• reeks met CD22 en CD81 levert in vrijwel
alle gevallen bruikbare MRD informatie
MRD bij CLL
CD79b, CD43, CD19 en CD5
expressie van CD79b en CD43
• CD79b
– precursor B cellen
(m.n. cytoplasmatisch)
– rijpe B cellen
• CD43
–
–
–
–
–
–
T cellen
geactiveerde B cellen
plasmacellen
monocyten
granulocyten
macrofagen
MRD met CD79b en CD43
CLL
rijp B
B cel precursors
Conclusie CD79b/CD5/CD43
• zelfs bij lage CD5 expressie
onderscheidend van normale B cellen
Conclusie CD79b/CD5/CD43
• zelfs bij lage CD5 expressie
onderscheidend van normale B cellen
• buis niet informatief indien er geen
duidelijke populatie met
CD5 en CD79b is
kunnen normale B cellen (rijp en
precursor) CD5 positief zijn ?
T
• op geactiveerde B cellen
kunnen normale B cellen (rijp en
precursor) CD5 positief zijn ?
• op geactiveerde B cellen
• op precursors ?
– (5-7% van de CD19+ cellen in kind BM is
CD5+)
validatie van deze en andere
MRD methodes
• 141 data files, naar 10 internationale labs
– alleen normale cellen (n=40)
– 0.00001-0.01% CLL (n=32)
– 0.01-0.1% CLL (n=69)
Rawstron, Leukemia 2007
validatie
• 141 data files, naar 10 internationale labs
– alleen normale cellen (n=40)
– 0.00001-0.01% CLL (n=32)
– 0.01-0.1% CLL (n=69)
• inter-operator variabiliteit en
fout-positieve metingen ‘t minst bij:
– CD79b / CD43
– CD81 / CD22
– CD38 / CD20
Rawstron, Leukemia 2007
analyse-SOP verhoogt precisie en
verlaagt fout-positieve uitslag
Rawstron, Leukemia 2007
flow MRD correleert met Q-PCR
boven 0.01%
Rawstron, Leukemia 2007
detectie limiet
• minimaal 0.01% MRD detecteren
• die 0.01% moeten minimaal 50 events zijn
• hoe?
– minimaal 500.000 leukocyten meten
– SOP gebruiken
Rawstron, Leukemia 2007
Dank voor de aandacht !