Transcript HER2 - Institut Pasteur

Pathologie des cancers du sein
• Classification histopathologique
• Caractères histopronostiques
• Marqueurs biologiques
Dr Xavier Sastre-Garau,
Département de Biopathologie, Institut Curie, Paris
[email protected]
Histologie mammaire
canal
lobule
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Histologie mammaire: canal
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Histologie mammaire: lobule
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Aspects marcroscopiques des
cancers du sein
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Aspects macroscopiques des
cancers du sein
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Classification histologique
•
•
•
•
•
•
Les cancers infiltrants
- carcinome canalaire infiltrants
- carcinome lobulaire infiltrant
- carcinome médullaire
- carcinome mucineux
- autres types
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
85%
10%
1%
2%
3%
Carcinome canalaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome canalaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome lobulaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome lobulaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome lobulaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome lobulaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Perte de la E-Cadhérine
dans les carcinomes lobulaires
Carcinome canalaire
Carcinome lobulaire
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome médullaire
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome médullaire
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome mucineux
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome mucineux
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome apocrine
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Caractères histopronostiques
• Taille
• Grade: différenciation, atypies, mitoses
• Embolies tumorales
• Statut ganglionnaire: méthodes d’analyse du
ganglion sentinelle
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Index histopronostique
• Différenciation
• 1: > 75% de formation glandulaires
• 2: 10-75% de formations glandulaires
• 3: <10% de formations glandulaires
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome bien différencié
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome bien différencié
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome peu différencié
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Index histopronostique
Pléomorphisme nucléaire
•1: noyaux petits, réguliers, uniformes
•2: noyaux modérément pléomorphes
•3: noyaux atypiques et nucléolés
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Index histopronotique
• Index mitotique
• sur 10 champs consécutifs (X400)
– 1: de 0 à 10 mitoses
– 2 : de 11 à 22 mitoses
– 3 : > 22 mitoses
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Index mitotique
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Index histopronostique
(Index de Nottingham)
• Grade 1: score global = 3, 4 ou 5
• Grade 2: score global = 6 ou 7
• Score 3: score global = 8 ou 9
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
0.6
0.2
0.4
Survival rate 0.5
grade I
grade II
grade III
0.0
Survival rate
0.8
1.0
Taux de survie sans métastase en fonction
du grade histopronostique
0
24
60
120
180
Time (months)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
240
300
Embolies tumorales
•
•
•
•
Lymphatiques ou veineuses
Critères diagnostiques stricts
En périphérie de la tumeur
Valeur pronostique péjorative
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Embolies lymphatiques
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Embolies lymphatiques
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Extension métastatique ganglionnaire axillaire
Terminologie
TNM
Taille
Technique
métastase
pN1
> 2 mm
standard
pN1mi
0.2-2 mm
standard
pN0 (i+)
< 0.2 mm
immunohistochimie
micro métastase
Métastase occulte
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Evaluation histopathologique des
ganglions sentinelles axillaires
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Evaluation per-opératoire des
ganglions sentinelles
Section médiane du ganglion
– Analyse microscopique
d’une cryocoupe
– Si métastase: curage
axillaire d’emblée
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Evaluation histopathologique des GS
• Analyse de 3 sections
histo-logiques standard
pour la détection de
métastase ou micrométastase
• immunohistochimie pour
la détection des
métastases occultes
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Métastase occulte dans un GS axillaire
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
1.8 mm
149 SN
74 patients
Number of sections
with immuno-labelled
cells
150 m
HES
IHC1
Number of new positive cases
successively disclosed
at each level
20 / 74
23/149
IHC2
7 / 74
22/149
IHC3
6 / 74
23/149
IHC4
1 / 74
17/149
IHC5
0 / 74
15/149
IHC6
1 / 74
7 /149
Dr X Sastre-Garau,
107 / 894 (12%)
Institut Curie, Paris
35 / 74 (47.3%)
Analyse des GS axillaires à l’aide
de sections histologiques sériées
et par immunohistochimie
• Test sensible
• La plupart des évènements détectés à l’aide
de 3 sections
• Procédure adaptée à l’étude des étapes
précoces de la dissémination tumorale
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Analyse des GS axillaires
série prospective de 879 cas
• Métastases:
14.4% (127/879)
• Micro-métastases:
9.1% (80/879)
• Métastases occultes: 6.5% (57/879)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
0.6
0.2
0.4
Survival rate 0.5
N1-3 N+
>3 N+
0.0
Survival rate
0.8
1.0
Taux de survie sans métastase en fonction
du statut ganglionnaire
0
24
60
120
180
Time (months)
Dr X Sastre-Garau, Institut CurieParis
240
300
Cancers du sein :
extension métastatique précoce
dans la moelle osseuse
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Aspiration de la moelle en per-opératoire
Séparation des cellules mononuclées par gradient de densité
Numération
Cytospots
(106 cellules/lame)
Immuno-cyto-chimie
Analyse microscopique
Résultats (287 cas) (2001-2004)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Mo 753
Mo 358
Métastases occultes
Mo 695
Mo 381
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Mo 817
Mo 817
Cellules cytokératines positives de
signification indéterminée (CK+)
Mo 728
Mo 728
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Extension ostéo-médullaire précoce
Taux de métastases occultes
dans la moelle osseuse
au moment du traitement initial
des tumeurs mammaires de petite taille:
15.3% (44/287)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Comparaison entre le statut médullaire et le
statut du GS axillaire
Ganglion sentinelle
négatif
métastase
Moelle osseuse
N° de
cas
negative
CK+
métastase occulte
174
60 (34.5%)
89 (51.1%)
25 (14.4%)
53
24 (45.3%)
19 (35.8%)
10 (18.9%)
p
0.5
micro métastase
22
9 (40.9%)
10 (45.5%)
3 (13.6%)
Métastase occulte
25
11 (44.0%)
9 (36.0%)
5 (20.0%)
274
104
127
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
43
L’extension métastatique ganglionnaire axillaire
n’est pas une étape nécessaire
à l’extension métastatique ostéo-médullaire
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Marqueurs biologiques en
pathologie mammaire
• Récepteurs aux oestrogènes
• Récepteur à la progestérone
• c-erb B-2
• Prolifération (Ki67)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Récepteurs aux oestrogènes :
méthode immunohistochimique
Carcinome lobulaire infiltrant
Dr X Sastre-Garau
Institut Curie, Paris
Récepteurs à la progestérone :
méthode immunohistochimique
RP
Carcinome mucineux
Dr X Sastre-Garau,
Institut Curie, Paris
Taux de prolifération (mib1)
Ki 67
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Amplification et surexpression de HER2
• Définition de l’amplification génique
• Correlation entre amplification et
surexpression: deux types d’analyses
• Stratégie pour détermination du statut HER2
• Aspects pratiques et recommandations
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
HER2 oncogène, localisé en 17q21
Activation par amplification
Surexpression protéique
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Détermination du statut HER2
Statut génomique
→ Statut du gène
− Hybridation in situ en fluorescence (FISH)
Statut d’expression
→ Statut de la protéine
− Immunohistochimie (IHC)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Amplifications
• Duplications d’un gène ou d’un groupe de gènes (amplicon) en
de multiples copies (généralement plus de 10),
indépendamment des gènes adjacents
• Deux formes au niveau chromosomique:
•
- double minutes (dm)
•
MYCN in neuroblastoma
•
•
- homogeneously staining regions
(hsr) HER2 dans les cancers du sein
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Amplification de HER-2: hsr
FISH HER-2
hybridization on hsr
hsr
Caryotype d’un cancer mammaire
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Document M. Muléris
Les cellules tumorales sont souvent aneuploïdes…
Surtout dans les
carcinomes de haut grade
• polyploïdies
• polysomies, monosomies
• translocations déséquilibrées
Sur-représentations
chromosomiques
Dr X Sastre-Garau,
Institut Curie, Paris
HER-2: 17q21.1
A. AURIAS
A. Aurias
FISH HER2
HER-2
noyau
cen 17
métaphase
cen 17
HER-2
Amplification de HER2
sur- représentation du chromosome 17
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Surexpression fortes secondaires à amplification
Surexpression de la protéine HER2
Amplification du gène HER2
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Statut de HER2 et traitement anti-HER2
• Seulement les amplifications de HER2 amplification
conduisent à un haut niveau (>10x) de surexpression de
la protéine HER2
• Les sur-representations conduisent à un faible niveau
(<3x) de surexpression de la protéine
• La cible du Trastuzumab est la protéine HER2 avec haut
niveau d’expression (IHC 3+)
• La réponse au Trastuzumab des cancers mammaires
avec faible niveau de surexpresison de la protéine
HER2 n’est pas documentée
•  But: pour l’efficacité thérapeutique, détecter les haut
niveaux de surexpression correspondant à une
amplification génique
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Stratégie pour l’analyse du statut de HER2
IHC ou FISH ?
• IHC comme première étape
• IHC: technique fiable après calibration par la FISH
• Problèmes non résolus:
• - altération possible d’épitopes après fixation
• - artéfacts potentiels avec marquage non spécifique
• - intensité de marquage correspondant à une variable
continue pouvant être difficile à répartir par classe
• - incomplete consensus on the rate of labeled cells
• Indications de FISH restreintes aux cas 2+ par IHC
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
IHC HER2: Recommandations
• Standardisation des procédures de fixation et de préparation
des sections histologiques
•
Automatisation
• Calibration par la FISH
• Contrôles inclus dans toutes les analyses
• Règles d’interprétation
• Contrôles de qualité interne et externe (AFAQAP, UKNEQUAS)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Calibration de l’IHC
• Calibration de la procédure
• FISH
• contrôles positifs et négatifs systématiques
• Importance majeure du pH du tampon pour le
dénaturation thermique (pH : 6)
• Forte dilution de l’anticorps primaire
CB11 : 1/500 à 1/800
A0485 : 1/ 1500 à 1/2000
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Contrôles
Négatif
Canaux normaux
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Positif
PAGET
Régles d’interprétation
Score
Immunomarquage
Herceptin®
0
Pas de cellules marquée ou
< 10%
non
1+
Marquage faible et incomplet de
>10% to 50-60% cellules
no
2+
Marquage faible ou modéré mais
complet et dans > 60% cellules
Oui seulement si
amplification prouvée
par FISH
3+
Marquage fort et complet dans >
60% cellules
oui
Vincent-Salomon et al., 42:337-47, Histopathology, 2003
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Taux de positivité attendus comme
contrôle de qualité interne
• Canalaire
•
•
< 2 cm
> 2 cm
10 to 15%
20 to 25%
•
•
grade I
•
grade II
•
grade III
•
• Inflammatoire
• Femme de moins de 35 ans
30%
• Lobulaire
< 5%
0%
11%
27%
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Surexpression forte de HER2 (+++)
Dr X Sastre-Garau,
Institut Curie, Paris
Amplification forte de HER2 (> 15 copies)
Surexpression modérée de HER2 (++)
Amplification faible (8 – 10 copies) de HER2 ?
Sur-representation sans amplification?
Dr X Sastre-Garau,
Institut
Curie, Paris
Amplification
forte mais altération de l’épitope ?
FISH pour la détermination du statut de HER2
• Technique fiable
– - reproductibilité supérieure à celle de l’IHC
– - échecs identifiables
– - variable discontinue (résultat numérique)
• Plusieurs limitations:
– équipement onéreux pour l’analyse microscopique
– coût de l’analyse (135 €) plus élevé que celui de l’IHC
– Formation spécifique requise
• Deux indications en pratique:
– calibration de l’IHC
– détermination du statut de HER2 dans les cas IHC 2+
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
FISH HER2
• Deux types de kits approuvés par la FDA
•
•
- HER2 probe seule
•
 numbre de copies de HER2
•
•
- mélange des sondes HER-2 + cen 17
 taux entre HER2 / cen 17 copies
 Buts: dans les cas d’immunomarquage ambigue, (++),
 (1) distinguer amplifications et sur-representations
 (2) éliminer de potentiels artéfacts
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Seuils pour un diagnostic d’amplification
(littérature)
• Variable: de ≥ 4 to ≥ 6 copies HER2 (≥ 2 à ≥ 3 HER-2/cen 17)
• La plupart des études:
• Kit HER2 :
•
. 1-4 copies:
•
. ≥ 5 copies:
•
•
•
Pas d’amplification
Amplification
kit HER2/cen 17:
. HER2/cen 17 ≤ 2.2: pas d’amplification
. HER2/cen 17 >2.2 : Amplification
•  seuil bas et arbitraire, non basé sur un rationel genetique
•  des sur-representations peuvent être rapportées comme des
amplifications
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
FISH HER2: recommandations
• But: détecter de vraies amplifications conduisant à une
surexpression forte
•
- HER2:
> 6 copies
•
- HER2/cen 17:
>3
• Présence d’amas de signaux (hsr) signant l’amplification.
• Préciser le nombre de signaux de HER2
• Vérifier le ratio HER2/cen 17 si 6-7 HER2 copies
• Garder des images pour contrôle de qualité
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Sélection des patientes pour le traitement
anti-HER2 (Institut Curie 2000-2005)
IMMUNOHISTOCHIMIE (4697 cas)
Pas de surexpression
: 80 %
Surexpression: 20%
Forte (3+) 64%
Modérée (2+)
36%
FISH
Trastuzumab®
+
chimiothérapie
Amplification
40%
56% 8-12 copies
44% >15 copies
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Pas
d’amplification
60%
Les carcinomes triple négatifs
• Définition immunophénotypique
– RO– RP– ERBB2• Carcinome canalaire infiltrant de haut grade
• Types histologiques spécifiques
– Carcinome apocrine
– Carcinome lobulaire pléomorphe…
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Les carcinomes de type basal-like
• Un sous groupe des carcinomes « triple négatifs »
• Immunophénotype caractéristique
– Cytokératine 5/6 + ; EGFR + ; P53 +
• Carcinome canalaire infiltrant de haut grade
• Types histologiques spécifiques
– Médullaire
– BRCA1/2 associé
– Autres: sécrétoire, adénoïde kystique,
myoépithélial…
• Indications thérapeutiques spécifiques ?
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
Carcinome médullaire
RO
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
0.6
0.2
0.4
Survival rate 0.5
ER ER +
0.0
Survival rate
0.8
1.0
Taux de survie sans métastase en
fonction du statut des RO
0
24
60
120
180
Time (months)
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris
240
300
Analyse histopathologique des cancers du sein
Remarques générales
Forces
Phénotype + immunophénotype à valeur pronostique et prédictive:
Robustesse, simplicité, spécificité, coût minime
Limites
Les cancers triples négatifs,
Extension systémique minime: maladie micrométastatique,
Nouveaux marqueurs moléculaires pronostiques et prédictifs ?
Dr X Sastre-Garau, Institut Curie, Paris