Transcript Français 5155 Ko - Institut luxembourgeois de la normalisation, de l

Assurance de la Qualité
dans les laboratoires
d’analyses de biologie médicale
LA VALIDATION DES METHODES
Enseignement du 5 novembre 2010
OLAS - LUXEMBOURG
Docteur François Trapadoux – Médecin biologiste – Evaluateur Qualité – Expert technique
La validation des méthodes
SOMMAIRE
LES EXIGENCES NORMATIVES
LES PORTEES
DESCRIPTION DES PROCESSUS
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRE
- DEFINIR ET MAÎTRISER LES DONNEES D’ENTREE
- VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES…
RECEVABILITE DES METHODES
CONCLUSION
François Trapadoux
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Diapositive n°2
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO/CEI 17025 / 5.1 Généralités
« De nombreux facteurs déterminent l'exactitude et la fiabilité des essais :
- facteurs humains ;
- installations et conditions ambiantes ;
- méthodes d'essai et de leur validation ;
- équipement ;
- traçabilité du mesurage ;
- manutention des objets d'essai et d'étalonnage »
« Le laboratoire doit appliquer des méthodes et procédures appropriées pour
tous les essais relevant de son domaine d'activité. Celles-ci comprennent
l'échantillonnage, la manutention, le transport, le stockage et la préparation
d'objets à soumettre à l'essai et l'estimation de l'incertitude de mesure ainsi
que des techniques statistiques pour l'analyse de données d'essai ». ISO/CEI
17025
François Trapadoux
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Diapositive n°3
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO/CEI 17025 / 5.4
METHODES D’ESSAI ET D’ETALONNAGE - VALIDATION DES METHODES
APPLIQUER MÉTHODES ET PROCÉDURES APPROPRIÉES :
- pour tous essais et/ou étalonnages du domaine d’activité
- pour Échantillonnage, Manutention, Transport, Stockage et préparation
des objets soumis à essai et/ou étalonnage
- pour l’estimation de l’incertitude de mesure
-et les techniques statistiques pour l’analyse des données
INSTRUCTIONS TENUES A JOUR ET ACCESSIBLES :
- Utilisation et fonctionnement des appareils
- Manutention et préparation des objets
- Ecarts possibles si documentés et justifiés avec accord du client
François Trapadoux
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Diapositive n°4
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO/CEI 17025 / 5.4
METHODES D’ESSAI ET D’ETALONNAGE - VALIDATION DES METHODES
SÉLECTION DES MÉTHODES
- Les méthodes doivent répondre aux besoins des clients
- Bibliographie et publications scientifiques
- Méthodes normalisées, adoptées ou développées par le laboratoire
- Le client est informé de la méthode que le laboratoire a la capacité de réaliser
MÉTHODES DÉVELOPPÉES PAR LE LABORATOIRE
Projet planifié – Personnel qualifié – Ressources adéquates
MÉTHODES NON NORMALISÉES
Accord du client et documentation technique préalable - Validation avant emploi
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Diapositive n°5
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO/CEI 17025 / 5.4
METHODES D’ESSAI ET D’ETALONNAGE - VALIDATION DES METHODES
VALIDATION : Obligatoire pour toutes les méthodes
- Confirmation par examen et apport de preuves objectives du fait que les
prescriptions particulières en vue d’une utilisation prévue déterminée sont
remplies
- Consigner les résultats, le mode opératoire utilisé et la déclaration d’aptitude de la
méthode à l’emploi prévu (en faire la démonstration)
- Détermination et vérification des performances de la méthode sur Site
- La gamme et l’exactitude des valeurs obtenues doivent correspondre aux
besoins du client (incertitude sur résultats, limites de détection, linéarité,
répétabilité, reproductibilité, robustesse, etc..)
- Les moyens de validation diffèrent selon les méthodes (étalons et/ou
matériaux de référence, comparaisons de méthodes, comparaisons interlaboratoires, évaluation des facteurs influençant les résultats, évaluation de
l’incertitude)
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Diapositive n°6
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO 15189 / 5.5. PROCEDURES ANALYTIQUES = METHODES :
Méthodes incluant sélection et aliquotage des échantillons,
correspondant aux besoins des utilisateurs et convenant à chaque type
d'analyse.
Méthodes conseillées = publiées ou réglementairement recommandées.
Si méthode interne = validation appropriée pour utilisation prévue et
documentées
Utilisation exclusive de méthodes validées en rapport avec l’utilisation
prévue. Validations approfondies en rapport avec le domaine concerné.
PROCEDURE utilisée pour la validation et résultats obtenus enregistrés.
Méthodes évaluées (Pro) et résultats obtenus satisfaisants avant utilisation.
Revue des méthodes documentées une fois par an colligées dans un
manuel.
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Diapositive n°7
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO 15189 / 5.5. PROCEDURES ANALYTIQUES = METHODES :
Instructions documentées (Pro) disponibles et compréhensibles au poste
de travail.
Application stricte des instructions de travail fournisseurs
documentation spéciale
sauf
Vérification des performances et de l'aptitude à l'emploi prévu et
revalidation si changements.
Une liste des documentations sur chaque méthode est proposée et
comprend la prise en compte de tous les éléments entrant dans la
méthode y compris les modes d’étalonnage et matérialisée par l’analyse
de risques sur les résultats et les calculs des incertitudes de mesure
avec l’ensemble de la documentation s’y rapportant
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Diapositive n°8
La validation des méthodes
LES EXIGENCES NORMATIVES
ISO 15189 / 5.5. PROCEDURES ANALYTIQUES = METHODES :
Spécifications de mise en œuvre de
chaque méthode doivent
correspondre à l'utilisation prévue
Revue
périodique
des
intervalles
de
référence
comme
après
modification de méthode.
La liste des méthodes courantes, incluant les exigences relatives
aux spécimens, les spécifications et les exigences d'exécution
pertinentes, mises à disposition des utilisateurs.
Modification de méthode expliquées aux utilisateurs par écrit avant
d'appliquer le changement.
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Diapositive n°9
La validation des méthodes
Choix de la portée
Portée Flexible Standard (A) : Possibilité d’utiliser des méthodes
(normalisées ou consensuellement reconnues) reposant sur des
compétences techniques déjà démontrées = méthodes équivalentes.
Portée Flexible étendue (B) : Mise en œuvre, sans évaluation
spécifique et préalable, de nouvelles méthodes adaptées, modifiées,
développées selon un/ou
des principes de méthodes dont la
compétence est déjà démontrée (= même principes de méthode).
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Diapositive n°10
La validation des méthodes
Réclamations clients, EVALUATION,
Stratégie et politique, objectifs, écoute
indicateurs,
gestion des non conformités, actions
clients, pilotage opérationnel
direction
PROCESSUS DE REALISATION
R Réaliser des analyses de laboratoire
R1
Réaliser des analyses de type qualitatif
R2
Réaliser des analyses de type quantitatif
R3
Réaliser …..
Résultats des
analyses
+
Prestations
P
Réaliser des prestations de conseil
S2
PATIENTS
HOPITAUX
S3
S4
CLINIQUES
LABM
SECURITE
SOCIALE
Etc….
de conseil
S6
S5
SATISFACTION CLIENTS
correctives, actions préventives, revue de
communication interne et externe
S1
S7
Assurer la veille
juridique et la
conformité
réglementaire
Mettre à
disposition les
équipements et
les infrastructure
Acheter et
approvisionner
Gérer
le système
documentaire
Gérer les
Ressources
humaines
Gérer le
système
informatique
Gérer les
flux financiers
P
R
O
C
E
S
S
U
S
M2 Améliorer
M1 Diriger et Manager
DEMANDES D’ANALYSES
D
E
S
PROCESSUS DE MANAGEMENT
EXIGENCES CLIENTS
D
E
S
C
R
I
P
T
I
O
N
PROCESSUS SUPPORT
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Diapositive n°11
La validation des méthodes
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRES
 Elaborer la politique du laboratoire 5.4 / 5.5
 Choisir et valider les Méthodes d’analyse par méthode et/ou
regroupement de méthode en fonction de la portée
•
Rédaction des protocoles de validation en prenant en compte toutes
les données d’entrée ayant une influence sur le résultat d’essai
•
Validation initiale / Validation continue
 Evaluer les incertitudes de mesure
 Réaliser l’analyse des risques sur les résultats
 Rédiger les procédures et les modes opératoires d’application en
routine
 Analyses réalisées et maîtrisées en routine = Assurer la qualité des
résultats 5.9 / 5.6
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Diapositive n°12
La validation des méthodes
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRES
La politique du laboratoire en matière de méthodes
•
fonction du domaine d’application et de la portée de l’Accréditation (MAQ)
•
Quant au choix des méthodes selon des critères définis : principe, fiabilité,
avancées technologiques, automatisation et informatisation, critères
BIBLIOGRAPHIQUES de performances et de limites, cout, exigences de la
clientèle, …
•
Quant à la validation par méthode et/ou regroupement de méthode selon le
type de méthode (quantitatif, qualitatif, semi quantitatif)
•
Quant à l’estimation des incertitudes de mesure et/ou à l’analyse des
risques sur les résultats
•
Connaître l'état de l'art actuel et ses évolutions ++++
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Diapositive n°13
La validation des méthodes
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRES
Choisir et valider les méthodes d’essai par méthode et/ou
ensemble de méthodes
Tenir compte de la portée : analyses « normalisées » ou portée
flexible
Une méthode d’analyse présente plusieurs caractéristiques essentielles; La
connaissance de ces paramètres peut être acquise par la bibliographie (si possible
indépendante du fournisseur) et/ou par l’expérimentation sur site.
Définir la méthode et ses limites d’acceptabilité (vérification par BIBLIOGRAPHIE
++++ et expérimentale), préalable à la validation
REDACTION DES PROTOCOLES de validation en prenant en compte toutes les
données d’entrée ayant une influence sur le résultat d’essai
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Diapositive n°14
La validation des méthodes
DEFINIR ET MAÎTRISER LES DONNEES D’ENTREE
Leur criticité est variable en fonction de chaque méthode
1 – PERSONNEL 5.2 / 5.1
- Formations spécifiques préalables surtout sur les automates
- Habilitation formalisée
2 – LOCAUX ET CONDITIONS AMBIANTES (ENVIRONNEMENTALES)
5.3 / 5.2 Selon spécialités et méthodes
- Hygiène en bactériologie,
- Circuits et empoussiérage en biologie moléculaire,
- Température (informatique),…
VALIDER DANS L’ENVIRONNEMENT DU LABORATOIRE.
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Diapositive n°15
La validation des méthodes
DEFINIR ET MAÎTRISER LES DONNEES D’ENTREE
Leur criticité est variable en fonction de chaque méthode
3 – EQUIPEMENTS 5.5 / 5.3 :
- Equipement s d’essais / d’analyses
- Equipements Informatique 5.4 /5.3 et Annexe B
- Equipements de mesure
- Equipements Intermédiaires
Qualifications dans la logique des méthodes
Dossiers de vie - Maintenance
Raccordements Métrologiques 5.6 / 5.3 et 5.5
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Diapositive n°16
La validation des méthodes
DEFINIR ET MAÎTRISER LES DONNEES D’ENTREE
Leur criticité est variable en fonction de chaque méthode
4 – OBJETS SOUMIS A ESSAI / SPECIMENS / ECHANTILLONS
PRIMAIRES 5.7 et 5.8 / 5.4
-> DU prélèvement
-> logistique
-> prétraitements
–> analyse
-> conservation
-> A l’élimination
5 – REACTIFS ET CONSOMMABLES 5.4 et 4.6 / 5.5 et 4.6
Marquage CE, contrôles à réception, évaluation fournisseur, utilisation OU
NON selon les recommandations fournisseur (cf. Portées), Réactovigilance, ..
Validation dans la logique des méthodes
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Diapositive n°17
La validation des méthodes
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRES
Validation initiale / Validation continue
VALIDATION = Confirmation par examen et apport de preuves objectives du fait
que les prescriptions particulières en vue d'une utilisation déterminée sont remplies.
Une méthode d’analyse présente plusieurs caractéristiques essentielles
:
La connaissance de ces paramètres peut être acquise par la bibliographie (si
possible indépendante du fournisseur) et/ou par l’expérimentation sur site.
Réalisation du protocole
Vérification de performances sur site.
- PHASE INITIALE avant sa mise en œuvre effective en routine
- PHASE DE VERIFICATION
PERFORMANCES
CONTINUE
ET
DE
CONFIRMATION
DES
Les paramètres à vérifier et/ou connaître sont fonction du type de
méthode
François Trapadoux
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Diapositive n°18
La validation des méthodes
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRES
EVALUATION DES INCERTITUDES DE MESURE
La validation de technique est mise à profit pour estimer les incertitudes
des mesures ; une approche dans l’évaluation des incertitudes de mesure
est mise à disposition du prescripteur et du patient, en cas de besoin.
Parmi les sources d'incertitude figurent, sans caractère d'exhaustivité, les
étalons de référence et les matériaux de référence, les méthodes et
l'équipement utilisés, les conditions ambiantes, les propriétés et la
condition de l'objet soumis à l'essai, et l'opérateur.,
François Trapadoux
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Diapositive n°19
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
Une méthode d’analyse présente plusieurs caractéristiques essentielles :
La connaissance de ces paramètres peut être acquise par la bibliographie
(si possible indépendante du fournisseur) et par l’expérimentation sur site.
CONDITIONS PREALABLES
Le biologiste
- lit le dossier des fournisseurs (notices, fiches techniques,
références bibliographiques, )
Ces informations doivent être impérativement réclamées au
fournisseur
- évalue et apprécie ces informations à la lueur des
recommandations ou de textes réglementaires, des critères de
performance des sociétés savantes, des attentes du prescripteur,…
Connaître l'état de l'art actuel et ses évolutions
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Diapositive n°20
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
CHOIX PREALABLES A LA VERIFICATION
DES LIMITES D’ACCEPTABILITE DE LA METHODE
- doit se faire PREALABLEMENT à l’étude de validation
- est du ressort du biologiste
- doit refléter l’état de l’art et la pertinence clinique. (recommandations
de sociétés savantes ou de groupes de travail, ou issues de conférences
de consensus, sur des publications scientifiques, sur des résultats de
campagnes d’inter-comparaison, etc.)
- sont adaptées et notifiées pour chacun des niveaux et pour chacun des
analytes qui seront contrôlés dans l’étude
DES VERIFICATIONS EXPERIMENTALES
DES VERIFICATIONS BIBLIOGRAPHIQUES
François Trapadoux
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Diapositive n°21
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
Réalisation de la validation proprement dite.
Le champ et la profondeur de cette évaluation dépendra des circonstances et
de chaque cas particulier.
- Démontrer que la méthode (généralement un couple analyseur/réactif)
fonctionne correctement dans les conditions opératoires du laboratoire
et qu’elle donne des résultats sûrs pour les patients.
- Cette validation est une validation de mise en application, ou encore une
vérification de performance sur site.
- Validation initiale puis continue dans le temps (changement de lots de
réactifs, extensions analytiques, maintenance lourde,…).
- Dans certains cas cette validation sera une confirmation de performances
d’une technique déjà en cours d’utilisation.
François Trapadoux
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Diapositive n°22
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
Les critères fondamentaux de validation
En principe déterminés par le fabricant de coffrets réactifs et systèmes commerciaux.
(exemple dossier de marquage CE)
Si ces coffrets réactifs et systèmes sont utilisés strictement dans les conditions
préconisées par le fabricant, le laboratoire doit uniquement valider (vérifier) la mise
en application dans son environnement propre.
Beaucoup de facteurs peuvent affecter les performances d’une méthode : tels que
- les différents lots de calibrateurs et de réactifs,
- les changements dans les consommables et de fournisseurs d’accessoires,
- les changements selon les lots de fabrication des instruments et/ou des réactifs,
- les conditions d’expédition et de stockage,
- les conditions ambiantes locales, la qualité de l’eau, la stabilité de l’alimentation
électrique
- la compétence (« habileté, dextérité ») de l’utilisateur, …
François Trapadoux
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Diapositive n°23
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
DIFFERENTS TYPES DE TECHNIQUES
Les analyses de type qualitatif
Le résultat n’apporte pas d’information sur la quantité de l’analyte, mais seulement sur
sa présence ou son absence (positif / négatif), ou éventuellement sur une présence ou
une activité supérieure à celle d’un témoin donné (cas des titrages).
Analyses dont le résultat est obtenu par la lecture de la réaction par un observateur,
par comparaison avec des témoins positif, négatif, ou de titre donné, et donc avec une
part de subjectivité.
Immuno-chromatographie (sérologies rapides unitaires par exemple), de Blot et
assimilés (Western-Blot, RIBA, etc.),
Agglutination de latex, de particules sensibilisées ou d’hématies (VDRL, TPHA,
Facteur rhumatoïde,
groupage sanguin et RAI, etc.),
Immunoélectrophorèse, ou d’Immunofluorescence (auto-anticorps, sérologies,
recherche de bactérie, mycobactéries)
François Trapadoux
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Diapositive n°24
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
DIFFERENTS TYPES DE TECHNIQUES
Les analyses de type quantitatif
Fournissent un résultat chiffré, sur une échelle continue dont les limites basses et
hautes sont connues, en relation directe avec une quantité ou une activité donnée de
l’analyte à mesurer.
Biochimie – hormonologie - numération globulaire - hémostase courante immunologie avec résultats chiffrés – etc.
Les analyses pour lesquels des éléments quantifiables peuvent et
doivent être prises en compte (automation et informatisation)
Analyses fournissant un résultat de type qualitatif, extrapolé à partir de la mesure d’une
donnée quantifiable
Densité Optique avec un effet de seuil (EIA ou RIA) – Sérologies, …
Quantification à partir de traitement d’images informatisées, immuno- electrophorèse,
…
François Trapadoux
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Diapositive n°25
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE ET VALIDATION DES METHODES
Méthode quantitative
Méthode qualitative
Méthode assimilable au quantitatif
Spécificité
Spécificité
Spécificité
Répétabilité et reproductibilité
NA
Répétabilité et reproductibilité
Justesse
NA
NA
Inexactitude totale
NA
NA
Domaine d’analyse
NA
NA
Sensibilité :
Sensibilité diagnostique
Sensibilité diagnostique
NA
NA
Contamination entre échantillons
Contamination entre échantillons
Contamination entre échantillons
(s’il y a lieu)
Stabilité
(s’il y a lieu)
Stabilité
(s’il y a lieu)
Stabilité
Robustesse
Robustesse
Robustesse
Valeurs de référence
NA
NA
« ex- valeurs normales »
Interférences
Interférences
Interférences
Limite de détection
Linéarité
Limite de quantification
Corrélation avec méthode de référence **
Corrélation avec méthode de référence **
Corrélation avec méthode de référence **
Corrélation avec méthode déjà utilisée au
laboratoire **
Corrélation avec méthode déjà utilisée au
laboratoire **
Corrélation avec méthode déjà utilisée au
laboratoire **
(* NA : Non applicable)
François Trapadoux
** Chaque fois que cela est nécessaire
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Diapositive n°26
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
REPETABILITE
Analyse d’un même échantillon pour la même analyse dans des
conditions standardisée : même opérateur, même lots et réactifs, même
instrument, même calibrateur, au cours d’une même série.
Exploitation des résultats : calculer la moyenne (m), l’écart-type (s) et le
coefficient de variation (CV) des valeurs expérimentales de chaque série.
Plusieurs niveaux de concentration (« bas », « moyen » , « élevé »)
choisis en fonction des valeurs physiopathologiques. Le nombre de
détermination dépendra de la cadence de l’automate, du coût des
réactifs,… (compris entre 10 et 30. La valeur statistique des résultats
obtenus dépend de ces effectifs.
Le CV = ( s / m ) x 100, représente la répétabilité de la méthode,
exprimé en %. Il est comparé au CV limite admissible.
Ce calcul répété pour chacun des échantillons (sérum, urine, LCR,…).
François Trapadoux
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Diapositive n°27
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
REPRODUCTIBILITE / FIDELITE INTERMEDIAIRE
Analyse d’un même échantillon pour la même analyse dans des
conditions différentes : l’opérateur, les lots de réactifs, les calibrateurs et
courbes de calibration peuvent être des données variables.
Réalisée au cours de séries successives, en général 1 à 2 par jour, par
le passage des échantillons de contrôle de qualité interne quotidiens.
30 déterminations
échantillons.
minimum
sont
nécessaires
pour
chacun
des
Les modalités de calcul sont identiques à celles de la répétabilité, avec
calcul de la moyenne (m), de l’écart-type (s) et du coefficient de variation
(CV) sur les valeurs expérimentales de chaque série ; le CV ainsi calculé
sera comparé au CV limite admissible.
Le CV représentera la reproductibilité de la méthode, exprimé en %.
François Trapadoux
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Diapositive n°28
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
JUSTESSE
Pas d’échantillons de contrôles raccordés sur le plan métrologique à
des étalons internationaux En biologie médicale, ; il est donc impossible
de parler stricto sensu de « valeur vraie » et par là-même de justesse.
En absence d’échantillon certifié, utiliser des échantillons pour des EEQ
réguliers (et dont la commuabilité aura été vérifiée ou prouvée), et pour
lesquels la valeur cible retenue sera la moyenne des résultats cumulés de
l’ensemble des utilisateurs de la méthode. Il est souhaitable d’utiliser des
échantillons de différentes origines commerciales
Justesse (biais) estimée en comparant la moyenne obtenue (m) lors de
l’étude de répétabilité et/ou de reproductibilité à la valeur cible attendue
assimilée à la valeur « vraie » (v) de l’échantillon testé. Exprimée en
pourcentage de la valeur cible = ( m – v ) / v x 100
Contrôlée éventuellement à l’aide des valeurs de référence qui pourront
être comparées à celles de la littérature.
François Trapadoux
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Diapositive n°29
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
CONTAMINATION INTER-ECHANTILLONS
LIMITE DE DETECTION - SEUIL DE QUANTIFICATION
STABILITE (du processus et notamment des réactifs selon le fournisseur)
François Trapadoux
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Diapositive n°30
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
CORRELATION DE METHODES
Seulement après vérification de la répétabilité, reproductibilité, justesse, inexactitude,
et éventuellement de la stabilité, limite de détection et seuil de quantification.
Comparer une méthode B / à une méthode A utilisée au laboratoire, analyser en
simple sur les deux techniques « simultanément » au moins 40 échantillons (frais) de
patient couvrant l’étendue du domaine physio-pathologique rencontré
Résultats examinés au fur et à mesure. Vérifier si la discordance est jugée supérieure
aux limites pré-établies. Pour chacun des couples retenus xi (méthode A) et yi
(méthode B) :
Calculer les différences xi - yi Calculer les rapports yi / xi
Reporter sur les graphes xi - yi et yi / xi les limites retenues
Noter le nombre de spécimens discordants et en rechercher la cause et si elle
subsiste après vérification (aspect, fibrine, hémolyse, etc.).
Calculer les paramètres de la droite de régression des moindres rectangles.
François Trapadoux
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Diapositive n°31
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
CORRELATION DE METHODES
Sur le graphe y = f(x)
- Vérifier l’alignement des points et l’absence de points aberrants
- Vérifier que les paramètres de la droite de régression calculé par le tableur
correspondant à ceux calculés selon les modalités ci-dessus.
- Vérifier le coefficient de régression R2.
- Calculer t
Les essais de corrélation en statistiques sont prévus pour des variables
indépendantes ce qui n’est pas le cas lors d’une validation de technique. Cette
dépendance explique les valeurs de r trouvées qui exceptionnellement permettront de
mettre en évidence une différence significative. Il faut donc accorder une valeur toute
particulière au graphique des différences et au pourcentage de valeurs discordantes
selon une différence acceptable prédéfinie. La répartition des valeurs choisies pour
cet essai est importante et devra faire l’objet d’une attention particulière.
François Trapadoux
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Diapositive n°32
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
VALEURS DE REFERENCE
Vérifier si possible, par la bibliographie et/ou par calcul statistique
- après une période d’utilisation permettant d’obtenir un nombre de valeurs
statistiquement significatifs (pour chaque sexe et tranche d’âge si incidence) (n >
100).
- à partir de patients exempts de pathologie (si possible)
- en écartant les valeurs aberrantes
- en vérifiant que la répartition de la population est gaussienne
Ecarter toutes les valeurs > à m + 2s et < à m – 2s.
Recalculer la moyenne (moyenne normalisée) mn et l’écart-type (écart-type
normalisé) sn à partir des valeurs retenues
Les valeurs de référence seront données par l’intervalle [ mn – 2sn ; mn + 2sn ].
François Trapadoux
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Diapositive n°33
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
REACTOVIGILANCE
« Les Etats membres prennent toutes les mesures nécessaires pour
que toute information portée à leur connaissance conformément aux
dispositions de la présente directive, relative aux incidents mentionnés
ci-après qui concernent les dispositifs portant le marquage CE, fasse
l’objet d’un enregistrement et d’une évaluation centralisée. (Chapitre 11
de la directive.) »
La loi de transposition : principe de libre circulation des produits afin d’assurer la
sécurité d’utilisation des DMDIV (dispositifs médicaux de diagnostic in vitro). impose
aux professionnels de santé utilisateurs ainsi qu’aux industriels d’alerter
l’AFSSAPS de tout incident susceptible d’engendrer un effet (ou un risque d’effet)
néfaste pour le patient. Le contrôle s’effectue à posteriori grâce à la vigilance
exercée par l’utilisateur et/ou le fabricant du DMDIV.
L’absence de contrôle préalable impose aux utilisateurs d’exercer une réelle
vérification des performances sur site lors de l’utilisation des DMDIV. Rôle de
premier plan à jouer dans la mise en œuvre de la réactovigilance.
François Trapadoux
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Diapositive n°34
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
VERIFICATION D’UNE METHODE D’ANALYSE QUALITATIVE
PHASE INITIALE avant sa mise en œuvre effective en routine
Obtention des échantillons positifs (ou négatifs) en nombre suffisant pour
vérifier la spécificité et la sensibilité diagnostique.
Vérification bibliographique critique +++
Vérification expérimentale sur site réduite, performances des E.E.Q. +++
PARAMETRE A VERIFIER ET/OU CONNAITRE
Spécificité
Sensibilité diagnostique
Contamination entre échantillons (automates ++)
Stabilité
Robustesse
Corrélation avec méthode de référence
Corrélation avec méthode déjà utilisée au labo
François Trapadoux
Bibliographie
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui (si existe)
Vérification sur site
Non
NA
Oui
Si besoin
Si besoin
Non
Oui (si possible)
Enseignement du 05 novembre 2010 – OLAS - LUXEMBOURG
Diapositive n°35
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
VERIFICATION D’UNE METHODE D’ANALYSE QUALITATIVE
PHASE DE VERIFICATION CONTINUE ET DE CONFIRMATION DES
PERFORMANCES dans le cadre du fonctionnement normal et quotidien
Suivi des CQI et des EEQ faits par le laboratoire, et l’analyse des
différentes études d’EEQ disponibles
Spécificité et la sensibilité diagnostique sont les paramètres essentiels à
maîtriser
Surveillance par l’étude des EEQ (performances du laboratoire, comparaison
avec les autres méthodes) et par le suivi des informations de
réactovigilance
François Trapadoux
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Diapositive n°36
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
VERIFICATION D’UNE METHODE D’ANALYSE QUANTITATIVE
PHASE INITIALE avant sa mise en œuvre effective en routine
PARAMETRE A VERIFIER ET/OU CONNAITRE
Spécificité
Répétabilité et reproductibilité
Justesse (approche de la)
Inexactitude totale (approche de l’)
Domaine d’analyse
Sensibilité :
Limite de détection
Limite de quantification
Linéarité
Contamination entre échantillons (s’il y a lieu)
Stabilité
Robustesse
Interférences
Valeurs de référence « ex- valeurs normales »
Corrélation avec méthode de référence
Corrélation avec méthode déjà utilisée au laboratoire
François Trapadoux
Bibliographie
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Vérification sur site
Non
Oui
Oui, si possible
Oui, si possible
Si besoin
Non
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui (si existe)
Si besoin et si possible
Oui, pour les paramètres
sensibles
Si besoin
Non
Si besoin
(plus tard)
Non / Oui (si possible)
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Diapositive n°37
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
VERIFICATION D’UNE METHODE D’ANALYSE QUANTITATIVE
PHASE DE VERIFICATION CONTINUE ET DE CONFIRMATION DES
PERFORMANCES dans le cadre du fonctionnement normal et quotidien
Utilisation de contrôles de qualité internes (CQI) et
externes (EEQ) indispensable
Leur exploitation statistique permet de vérifier et de
confirmer les éléments suivants :
- reproductibilité / fidélité intermédiaire
- justesse, ou du moins en faire une approche en
l’absence de matériau de référence
-Inexactitude
- vérification (et l’adaptation éventuelle) des valeurs
de références de la méthode pour la population du
laboratoire
François Trapadoux
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Diapositive n°38
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
VERIFICATION D’UNE METHODE D’ANALYSE QUALITATIVES AVEC DES
DONNEES QUANTIFIABLES EXPLOITABLES / SEMI QUANTITATIVES
PHASE INITIALE avant sa mise en œuvre effective en routine
Obtention des échantillons positifs (ou négatifs) en nombre suffisant pour vérifier
spécificité et sensibilité diagnostique (paramètres essentiels à maîtriser)
Le fabricant doit fournir ces éléments en s’appuyant sur des études menés par des
experts indépendants
Vérification expérimentale sur site variable selon les éléments quantifiables et la
performances des E.E.Q. +++
PHASE DE VERIFICATION CONTINUE ET DE CONFIRMATION DES PERFORMANCES
dans le cadre du fonctionnement normal et quotidien
- comparaison avec les résultats obtenus par d’autres méthodes complémentaires ou par
des techniques de référence mises en œuvre pour vérifier un premier résultat.
- l’étude des EEQ (performances du laboratoire, comparaison avec les autres méthodes)
- le suivi des informations de réactovigilance
Vérification régulière de la reproductibilité (surtout pour les valeurs proches du seuil
décisionnel / cut-off par exemple) .
François Trapadoux
Enseignement du 05 novembre 2010 – OLAS - LUXEMBOURG
Diapositive n°39
La validation des méthodes
VERIFICATION DES PERFORMANCES SUR SITE
ET VALIDATION DES METHODES
Une étude de contamination inter-échantillon est à mener pour tous les
systèmes automatisés surtout sur les paramètres réputés sensibles à ce
genre d’influence (Béta HCG, Antigène HBs, etc.)
Cette étude sera à répéter au moindre doute quant au fonctionnement correct
du système automatisé, et en particulier du système de lavage et/ou de
décontamination.
Le dossier de vérification peut renvoyer à d’autres documents
(bibliographie, notices fournisseurs, documents internes au laboratoire, etc.),
correctement identifiés et accessibles.
La robustesse. Selon les méthodes l’influence de certains facteurs peut être
déterminante pour les résultats
Exemple : incubation, volume pipeté, centrifugation peuvent avoir des
conséquences directes sur le résultat. La vérification d’un incubateur qui
atteint bien un point de consigne sans dépassement supérieur lors de la
stabilisation L’effet de bord sur les techniques en microplaques, …
François Trapadoux
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Diapositive n°40
La validation des méthodes
REALISER DES ANALYSES DE LABORATOIRES
EVALUATION DES INCERTITUDES DE MESURE
- déterminer puis modéliser le processus de chaque analyse et ses différentes
étapes
- déterminer les valeurs et les étalons de référence, les unités en fonction des
besoins cliniques
- déterminer pour chaque étape une estimation des différentes incertitudes de
mesures
- déterminer l’équation mathématique et procéder aux différents calculs
- effectuer une situation globale de façon à avoir une vision de l’incertitude finale
puis déterminer un plan d’action de maîtrise de l’incertitude obtenue.
- Les plans d’action sont fixés pour l’année à venir lors des revues de direction.
REALISATION DES ANALYSES DE RISQUES SUR LES RESULTATS
Rédiger les procédures et les modes opératoires d’application en routine
François Trapadoux
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Diapositive n°41
La validation des méthodes
RECEVABILITE DES METHODES
Les POLITIQUES relatives à la validation des méthodes sont inscrites dans
le Manuel Qualité des laboratoires concernés par l’accréditation
Le laboratoire doit présenter aux évaluateurs deux éléments différents :
1. La(es) procédure(s) qui décri(ven)t les lignes directrices et les modalités
du processus qu’il suit pour la validation des méthodes en général et la
procédure de sa gestion de la portée flexible.
2. Le dossier de validation de la méthode proprement dit, qui comprend
différents enregistrements :
- un protocole de validation :
- les éléments de preuve : Bibliographie, Données brutes, Calculs,
- Les conclusions du biologiste responsable de la validation : jugement sur
la validité de la méthode clôturé par un avis délivré par l’autorité désignée et
concluant sur le respect des critères analytiques exigés, l’adaptation à
l’usage prévu avec l’’autorisation de mettre en œuvre la méthode au sein du
laboratoire.
François Trapadoux
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Diapositive n°42
La validation des méthodes
CONCLUSION
Le dossier de validation de méthode est le document le plus
important car il conditionne la recevabilité en cas d’audit initial
Au cours de la vie du laboratoire, les mises à jour de méthode
passe toujours par une validation de méthode dont les
éléments doivent être transmis aux évaluateurs
La validation de technique est mise à profit pour estimer les
incertitudes des mesures du laboratoire
Le biologiste doit pouvoir mettre à disposition du prescripteur et
du patient, en cas de besoin, une approche dans l’évaluation des
incertitudes de mesure.
François Trapadoux
Enseignement du 05 novembre 2010 – OLAS - LUXEMBOURG
Diapositive n°43