Transcript Migration des cellules cancéreuses

Thème : Les
caractéristiques du Cancer
La migration des
cellules
cancéreuses
BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne
Lycée Aristide Briand GAP 05
Problématique :
Comment les cellules cancéreuses
parviennent-elles à envahir les tissus
voisins ?
• La modification d’un gène peut-il avoir une incidence sur la migration des cellules ?
• Que produisent les cellules pour traverser la matrice extracellulaire ?
Mise en évidence de la migration des cellules par
blessure/cicatrisation
Hypothèse 1 : La modification du gène Cdx1 a une incidence sur la migration
des cellules ?
Expérience 1 : Test de blessure-cicatrisation
Cellules
témoins
Cellules
CDX1
Monocouche cellulaire
Blessure, lavages puis incubation
Blessure puis 5
lavages PBS
Milieu nutritif +
Antiprolifératif :
mitomycine (surnageant )
Cellules
• Incubation des plaques pendant 6h à 37°C.
Résultat du test de migration
CAT: cellules contrôles
6h
Cellules CDX 1
6h
Grossissement x40
Morphologie des cellules avant et après migration.
Cellules témoins
Incubation de 6h
Cellules CDX1
Incubation de 6h
Vitesses de migration
des cellules
µm/min
Cellules CDX1 1.5 fois plus rapides que les cellules contrôles !
Mise en évidence d’enzymes permettant la
migration
• Hypothèse 2 : c’est grâce à des enzymes libérées par les
cellules qu’elles traversent la matrice extracellulaire.
• Expérience 2 : Zymographie
1. Séparation des protéines en fonction des masses molaires
2. Mise en évidence de l’activité enzymatique
Préparation des gels de concentration et de
séparation
Gel de concentration : Acrylamide
Gel de séparation : Acrylamide et gélatine
Gel de concentration
Gel de séparation
Électrophorèse
Légende :
1. Marqueurs masse molaire.
2. Test positif MMP-2.
3. Test négatif milieu seul.
4. Sn cellules non tumorales.
5. Sn cellules tumorales invasives.
6. Sn cellules CDX1.
7. Surnageant (sn) cellules
contrôles.
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7
Gel de concentration
Gel de séparation
Traitement des gels
• Séparation des gels de concentration et de
séparation .
• Lavages du gel de séparation avec une solution de
triton/CaCl2.
• Incubation 18h à 37°C avec une solution de travail
dont la concentration en triton est inférieure à la
première.
• Coloration des gels pour observer la gélatine
consommée par les enzymes (noir amido et rouge
ponceau).
Résultat après coloration
1
2
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5
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1. Marqueurs masse molaire.
2. Test + MMP-2.
3. Test - milieu seul.
4. Sn cellules non tumorales.
5. Sn cellules tumorales invasives.
6. Sn cellules CDX1.
7. Sn cellules contrôles.
Interprétation des résultats
• Apparition d’une décoloration pour l’enzyme MMP-2
=> Dégradation de la gélatine.
• Apparition de deux taches blanches pour les cellules
tumorales => Deux enzymes différentes
• Cellules CDX1, absence de trace => Quantité
d’enzymes insuffisante.
Conclusion
1. Sous l’influence d’un gène modifié => accélération de la migration.
2. Production de différentes enzymes pour dégrader la matrice extracellulaire
dans les cellules tumorales invasives (mais pas de mise en évidence pour les
CDX1).
3. Perspectives : pourrions nous supprimer ces enzymes pour limiter l’invasion
des cellules cancéreuses ? Comment le mettre en œuvre ?