Transcript presentation - Réseau Français pour la Santé Animale

Journée FCO - Mars 2010
Diagnostic sérologique de la
FCO (ELISA, SN) :
état des lieux
E Albina, C Cêtre-Sossah, C Grillet,
R Lancelot, A Pédarrieu
Les bases immunologiques
• Infection ou vaccination (atténué/inactivé)
 production d’anticorps
• Différentes spécificités :
 Anticorps anti-orbivirus (FCO – EHDV)
 Anticorps anti-sérogroupe (FCO)
 Anticorps anti-sérotype
Anticorps
neutralisants
VP2 – VP5
Anticorps de
groupe FCO
VP7 – VP3
VP1, VP4 and VP6
Tests recommandés par l’Organisation
Mondiale de la Santé Animale (OIE)
• Fixation du complément (désuet)
• Immunodiffusion en gélose
(croise avec EHDV)
• ELISA de compétition
(prescrit dans les
= meilleure
sensibilité, robustesse, spécifique
du sérogroupe FCO
échanges internationaux)
 Détection de sérogroupe FCO
 pas de différenciation animal
vacciné/infecté
Tests ELISA
• En France, cinq tests sont agréés par la
DGAl sur la base d’un contrôle par le
LNR sérologie (CIRAD)
• Ils sont tous basés sur une réponse
anticorps dirigée contre la VP7
Anticorps
neutralisants
VP2 – VP5
Anticorps de
groupe FCO
VP7 – VP3
VP1, VP4 and VP6
Tests ELISA
• Deux principes :
ELISA de compétition
ELISA sandwich
Plaque
Plaque
Ag
Ag
Test sérum
+ Mab
B
A
Test sérum
A
Substrat
Pas de coloration
POSITIF
B
Substrat
Coloration
Coloration
NEGATIF
POSITIF
Pas de coloration
NEGATIF
Tests ELISA
• 3 tests de compétition :
 détection des anticorps à 14-21 jours postinfection
• 2 tests sandwich :
 détection plus précoce 7 jours post-infection en
particulier après vaccination avec vaccin inactivé,
 meilleure détectabilité (entre 1 et 2 dilutions base 2)
 aucun test DIVA
 pratiquement plus de sérologie en France
Evolution des tests ELISA au CIRAD
Evolution des analyses ELISA FCO
13822
Nombre d'analyses ELISA
14000
11014 11147
12000
10000
7185
8000
5642
6000
4843
4000
1927 1509
2000
1809
460
0
2000
2001
2002
FCO Corse
2003
2004 2005
Année
2006
2007
2008
2009
FCO Continent
Dispositif diagnostic sérologique en France
• LNR Sérologie CIRAD  EILA Européen annuel
• Laboratoires départementaux d’analyse
vétérinaire

EILA national (pas en 2009 et 2010)
Evolution des EILA FCO nationaux
90
81
80
72
Pourcentage
70
60
50
45
42
40
30
20
10
21
13
11 11
9
3
1
15
14 13
0
1
0
15
9
5
0
1
5
9
1
3
0
0
0
2002
2003
2004
2005
2006
2007
Année
Nombre de participants
Admis 1ére session
Admis 2ème session
Recalé
2008
Le test de séroneutralisation
• Test spécifique du type
(24 sérotypes)
• Basé sur l’interaction
anticorps - VP2 & VP5
• Test non décrit dans le
manuel OIE (!)
•  réactions croisées
entre sérotypes
Principe
Plaque
virus
Test sérum
Cellules sensibles
A
B
Substrat
Pas de lyse
POSITIF
Lyse
NEGATIF
Réactions croisées entre sérotypes
Neutralisation croisée in vitro
Protection partielle croisée
Faible communauté antigénique
Application pratique : le cas de la
surveillance sentinelle en Corse
• Prélèvements mensuels de 150 veaux de
6 à 12 mois dans chaque département
depuis 2005
• Analyse ELISA aux LVD
• Envoi positifs et douteux CIRAD pour
séroneutralisation
2008 : 119 positifs sur 6400 (1,86%)
2009 : 228 positifs sur 4000 (5,7%)
Résultats SN Corse
• Analyse de 55 résultats « complets » pour
les 6 sérotypes identifiés en Corse:
BTV-1, 2, 4, 8, 9 et 16
Analyse en composantes principales
Variance
0.8
1.0
BTV1
Cercle des corrélation des sérotypes
BTV1
BTV8
BTV8
BTV9
BTV2
BTV16
BTV4
BTV9
BTV2
BTV4
BTV16
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
Hypothèses
• Fiabilité de la SN ?
• Réactions sérologiques croisées hors
cadre?
• Vaccination/infection sérotypes 1 et 8?
•…?
Performances des tests : EILA européen
• 100 % de résultats conformes en
ELISA avec tous les kits représentés
(36 laboratoires participants)
• 0% de résultats conformes en SN
(8 laboratoires participants)
Résultats détaillés SN, EILA européen
Type
sérum
BTV8
BTV11
Lab ref
Cirad
Lab 1
Lab 2
Lab 3
Lab 4
Lab5
Lab 7
20
Neg
Neg
23
Neg
20
Neg
+
80
NT
512
NT
8 (BT8)
NT
NT
20 (BT4)
NT
NT
60
NT
256
64 (BT8)
NT
11 (BT8)
80
NT
10 (BT4)
40 (BT8)
160
120
+ (BT8)
30 (BT1
80 (BT8)
Neg
120 (BT 4)
60 (BT8)
64
128
256 (BT8)
20
40 (BT8)
640
40 (BT4)
320 (BT8)
320
80 (BT8)
+
+ (BT6)
80 (BT8)
Neg
Neg
Neg
Neg
Neg
Neg
Neg
Neg
10
40
64
128
23 (BT8)
20
1000
20 (BT8)
160
15
60
40
128
91
80
160
20 (BT1)
160
30
Neg
Neg
Neg
6
Neg
40
40
Neg
BTV6
EHDV/BTV1
negative
BTV1
BTV8
BTV1
Perspectives
• Epilogue sur la séroneutralisation :
 Standardisation du test à l’échelle
européenne
 Apprentissage des réactions croisées
entre sérotypes européens
• Perspectives ELISA : ELISA DIVA ?
• Merci pour votre attention