Transcript lacremed

The project is co-financed by the
European Union
Projekat sufinansira
Evropska Unija
A projekt az Európai Unió
társfinszírozásával valósul meg
www.hu-srb-ipa.com
LACREMED
Development of an enzymological (laccase-based)
remediation product and technology
Razvoj proizvoda i tehnologije za remedijaciju na
bazi primene enzima (lakaze)
Enzim- (lakkáz-) alapú bioremediációs termék és
technológia kifejlesztése
HUSRB/1002/214/147
Analytical methods for xenobiotics determination
developed within the LACREMED project
Guideline
Analitičke metode za određivanje ksenobiotika
razvijene u okviru LACREMED projektu
Smernice
A LACREMED projekten belül kifejlesztett, xenobiotikumok
meghatározására szolgáló analitikai módszerek
Útmutató
University of Novi Sad, Faculty of Technology Novi Sad, Serbia
Univerzitet u Novom Sadu, Tehnološki fakultet Novi Sad, Srbija
Újvidéki Egyetem, Technológiai Kar
Guideline on analytical methods developed in
LACREMED
The extensive use of pesticides in the agriculture and the additional environmental pollution caused by industrial emission during
their production has resulted in the occurrence of residues of these chemicals and their metabolites in food commodities, water
and soil. In order to be able to monitor their presence, there is a need for highly specific, selective and sensitive multiresidue
analytical method that can ensure the reliable data on the occurrence of the parent components and their metabolites in various
kind of samples. In the very core of the IPA CBC HU-SRB LACREMED project (HUSRB/1002/214/147), aiming to develop the
innovative approach for remediation of soils and water polluted with pesticides and their metabolites, is development of a robust
analytical method for simultaneous determination of derivates of phenoligenic and anilogenic pesticides, known for their toxicity
and wide spread. This guideline summarizes the parameters of the method developed in the LACREMED project based on the
advanced instrumental technique available at the Faculty of Technology Novi Sad, Serbia, giving also a brief intro on the pesticides
presence in the environment and the available analytical methodologies.
Despite the good results of using pesticides in agriculture, their use in
the environment is usually accompanied by deleterious environmental
and public health effects. Pesticides hold a unique position among
environmental contaminants due to their high biological activity and
toxicity (acute or chronic). They are usually capable of harming all forms
of life other than the targeted pest. The contamination by pesticides
should be prevented as far as possible not only because of their direct
toxicity to man, but also because of their influence on the water
biocenosis and their potential accumulation in the food-chain. Moreover,
due to the degradation of some herbicides, fungicides and insecticides
used in the intensive agricultural fields that occurs in soils, surface and
groundwater, the environment could be contaminated with different
degradation products that are usually much more harmful than the
parent molecules; however some of them could enter into the food
chain through the water uptake by the plants.
The microbial degradation of the permitted and widely used anilinogenic
and phenoligenic pesticides such as 2,4-dichlorophenoxyacetic acid,
(2,4-D), 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid (2,4,5-T), phenylcarbamate,
phenylurea, diuron, linuron and propanil results in chlorophenols and
chloroanilines, two groups of highly toxic organochlorinated xenobiotics
(Pandiyanet et al., 2002; Claver et al., 2006). They have high
ecotoxicological effects and also are dangerous to humans as some of
them have immunomodulating, endocrine-disrupting, mutagenic and
carcinogenic effects.
All these facts have therefore attracted the attention of environmental
chemists to investigate the chemodynamics and fate of pesticides in
the environment. Analytical methodologies employed have to be
capable of residue measurement at very low levels and must also
provide unambiguous evidence to confirm both the identity and the
concentration of any residues detected. In the literature a number of
published papers dealing with the analysis of pesticides, some of their
degradation and transformation products, by gas chromatography
(GC) coupled to tandem mass spectrometry (MS/MS) and liquid
chromatography (LC)-MS/MS. Nowadays, particularly LC has
emerged as an excellent alternative technique, especially for the
analyses of polar and thermo labile pesticides that are not readily
amenable to GC or require derivatization before GC analysis; thus, it
has been accepted as a routine technique for regulatory monitoring
purposes in pesticide residue analysis.
At the Faculty of Technology Novi Sad, the Project
Partner in the LACREMED project, a rapid analytical
method based on ultra-high performance liquid
chromatography with tandem mass spectrometry coupled
to heated electrospray ionization source (UHPLC-HESIMS/MS) was developed for analysis of selected
anilinogenic and phenoligenic compounds that have been
targeted during the LACREMED:
3-chloroaniline (3-CA),
4-chloroaniline (4-CA),
3,4-dichloroaniline (34-DCA),
2,6-dimethylaniline (2,6-DMA),
3-chloro-4-methylaniline (3-C-4-MA),
2,4-dichlorophenol (2,4-DCP), and
4-chloro-2-methylphenol (4-C-2MP).
Samples used for the method development were:
Liquid media (aqueous solutions of glucose, Lasparagine, D, L-phenylalanine, adenine, thiamine and
various salts) fortified with the selected xenobiotic diluted
with initial mobile phase in order to get final solution with
concentration within the calibration curve range.
Aqueous extract of soil samples fortified with the
selected xenobiotic obtained after shaking of different
types soils with ultra pure water and the centrifugation.
All the samples were jointly prepared with the colleagues
from the University of Szeged, a Lead Beneficiary in the
LACREMED.
2
Smernice o analitickoj metodi razvijenoj u
LACREMED
Široka upotreba pesticida u poljoprivredi i dodatno zagađenje životne sredine prouzrokovano emisijom tokom njihove industrijske
proizvodnje dovelo je do široke rasprostranjenosti ovih hemikalija i njihovih metabolita u životnim namirnicama, vodi i zemljištu.
Da bi se moglo pratiti njihovo prisustvo potrebno je razviti specifičnu, selektivnu i veoma osetljivu analitičku metodu, kojom je
moguće obezbediti pouzdane podatke o prisustvu osnovnih jedinjenja i nastalih degradacionih proizvoda u različitim vrstama
uzoraka. U samoj osnovi IPA CBC HUSRB projekta LACREMED, koji ima za cilj razvoj inovativnog pristupa u remedijaciji zemljišta i
vode zagađenih pesticidima i njihovim metabolitima, nalazi se razvoj robustne analitičke metode za istovremeno određivanje
anilinskih i fenolnih derivata pesticida, poznatih po toksičnosti i širokoj rasprostranjenosti.
Uprkos dobrim rezultatima primene pesticida u poljoprivredi, njihovo
korišćenje je često praćeno negativnim uticajem na životnu sredinu i
zdravlje ljudi i životinja. U odnosu na druge zagađujuće materije u životnoj
sredini, pesticidi imaju jedinstvenu poziciju zbog njihove visoke biološke
aktivnosti i toksičnosti (akutne ili hronične). Pored uništavanja ciljanih
štetočina, ova jedinjenja mogu da oštete i sve druge oblike života.
Zagađenje pesticidima je potrebno sprečiti ne samo zbog njihove direktne
toksičnosti po čoveka, već takođe i zbog njihovog negativnog uticaja na
vodenu biocenozu i potencijalne akumulacije u lancu ishrane. Usled
degradacije herbicida, fungicida i insekticida koji se koriste u intenzivnoj
poljoprivredi i koji mogu biti prisutni u zemljištu, površinskoj i podzemnoj
vodi, životna sredina može biti kontaminirana različitim degradacionim
proizvodima koji su često štetniji od polaznih pesticida; takođe, neki od njih
mogu se uneti u lanac ishrane putem uzimanja vode od strane biljaka.
Mikrobiološka degradacija dozvoljenih i široko korištenih anilinskih i
fenolnih pesticida kao što su 2,4-dihlorofenoksiacetatna kiselina, (2,4-D),
2,4,5-trihlorofenoksiacetatna kiselina (2,4,5-T), fenilkarbamat, fenilurea,
diuron, linuron i propanil dovodi do pojave hlorfenola i hloranilina u životnoj
sredini, dve grupe veoma toksičnih organohlornih ksenobiotika. Ova
jedinjenja imaju izraženo ekotoksikološko dejstvo i takođe su opasni po
zdravlje ljudi, pokazujući imunomodularne, mutagene, karcinogene efekte
kao i štetno dejstvo na rad endokrinih žlezda.
Sve ove činjenice privlače pažnju istraživača u oblasti zaštite životne
sredine namećući potrebu ispitivanja hemodinamike i sudbine pesticida
u životnoj sredini. Analitičke metode koje se koriste u ovaj oblasti
moraju omogućiti detekciju ksenobiotika u veoma niskim
koncentracionim nivoima i nedvosmislenu potrvdu identiteta i
koncentracija detektovanih jedinjenja. U literaturi su dostupni brojni
radovi koji se bave analizom pesticida, njihovih degradacionih i
transformacionih proizvoda gasnom (GC) i tečnom hromatografijom
(LC) u kombinaciji sa masenom spektrometrijom (MS/MS). Ipak, LC je u
današnje vreme često korišćena tehnika, posebno u analizi polarnih i
termo labilnih pesticida, koji se ne mogu analizirati primenom GC bez
prethodnog koraka derivatizacije; stoga, LC se smatra rutinskom
tehnikom u analizi pesticida pri njihovom monitoringu u životnoj sredini.
Na Tehnološkom fakultetu Novi Sad, projektnom partneru
u projektu LACREMED, razvijen je brz analitički metod
baziran na ultra-visoko pritisnoj hromatografiji saa
zagrevajućim elektosprej jonizacijonim izvorom i tripl
kvadrupolnim masenim detektorom (UHPLC-HESIMS/MS) za analizu anilinskih i fenolnih jedinjenja
odabranihu okviru projekta LACREMED:
3-hloroanilin (3-CA),
4-hloroanilin (4-CA),
3,4-dihloroanilin (34-DCA),
2,6-dimetilanilin (2,6-DMA),
3-hloro-4-metilanilin (3-C-4-MA),
2,4-dihlorofenol (2,4-DCP), i
4-hloro-2-metilfenol (4-C-2MP).
Uzorci korišćeni za razvijanje i primenu metode bili sledeće
prirode:
Tečni medijum (vodeni rastvor glukoze, L-asparagin, D,L
– fenilalanin, adenin, tiamin i razne soli) u koji su dodati
odabrani ksenobioticima, a koji je zatim razblažen sa
polaznom UHPLC mobilnom fazom u cilju dobijanja
rastvora sa koncentracijom u opsegu kalibracione krive;
Vodeni ekstrakt različitih tipova zemljišta u koje su dodati
odabrani ksenobiotici; ekstrakti su dobijeni posle mućkanja
zemljišta sa ultra čistom vodom i naknadnim
centrifugiranja.
Svi uzorci su pripremljeni zajednički sa kolegama sa
Univerziteta u Segedinu, glavnim korisnikom u projektu
LACREMED.
3
Kifejlesztett analitikai módszerek útmutatója
LACREMED
A peszticidek mezőgazdaságban történő kiterjedt alkalmazása, továbbá a gyártásuk során ipari kibocsátás útján okozott további
környezetszennyezés az élelmiszerárukban, vizekben és talajokban ezen vegyületek maradványainak és metabolitjainak a
megjelenéséhez vezetett. Jelenlétük nyomon követésének érdekében specifikus, szelektív és szenzitív, több maradvány
kimutatására alkalmas analitikai módszerekre van szükség, melyek megbízható adatokat nyújtanak az alapvegyületek és
metabolitjaik jelenlétéről a különböző típusú mintákban. A peszticidekkel és metabolitjaikkal szennyezett talajok és vizek
remediációjára szolgáló innovatív eljárás kifejlesztésére irányuló IPA CBC HU-SRB LACREMED projekt (HUSRB/1002/214/147) fő
célja egy olyan megbízható analitikai módszer kidolgozása, mely lehetővé teszi a széles körben elterjedt és toxicitásukról ismert,
fenolt és anilint generáló peszticidek származékainak egyidejű meghatározását. Ez az útmutató összefoglalja a LACREMED projekt
keretein belül, az Újvidéki Egyetem Technológiai Karán rendelkezésre álló magas színvonalú műszerállomány segítségével
kifejlesztett módszer jellemzőit, egyben rövid áttekintést nyújt a peszticidek környezetben történő előfordulásáról és a
rendelkezésre álló analitikai módszerekről.
Bár a peszticidek mezőgazdaságban történő felhasználása eredményes, a
környezetben történő alkalmazásuk általában hátrányos környezeti és
közegészségügyi hatásokkal jár. Jelentős biológiai aktivitásuk és akut vagy
krónikus toxicitásuk miatt a peszticidek különleges helyzetet foglalnak el a
környezetszennyező anyagok között. Általában képesek a megcélzott
kártevő/kórokozó mellett más életformákat is károsítani. A peszticidek általi
szennyeződést amennyire csak lehet, meg kell akadályozni, és nem csak
az emberre gyakorolt közvetlen toxicitásuk miatt, hanem a vízi
életközösségekre gyakorolt hatásuk és a táplálékláncban történő
feldúsulásra való képességük miatt is. Ezen túl az intenzív művelésbe vont
mezőgazdasági termőterületeken alkalmazott herbicidek, fungicidek és
inszekticidek talajban, felszíni- és talajvizekben zajló lebomlása miatt a
környezet különböző bomlástermékekkel szennyeződhet, melyek az
alapvegyületeknél gyakran sokkal károsabbak; némelyikük a növények
tápanyagfelvétele útján be is kerülhet a táplálékláncba.
Az engedélyezett és széles körben alkalmazott, anilint és fenolt generáló
peszticidek, mint a 2,4-diklórfenoxiecetsav (2,4-D), a 2,4,5trikórfenoxiecetsav (2,4,5-T), a fenilkarbamát, a fenilurea, a diuron, a
linuron és a propanil bomlása során klórfenolok és klóranilineket
keletkeznek, melyek a klórozott szerves xenobiotikumok két erősen toxikus
csoportját alkotják (Pandiyanet et al., 2002; Claver et al., 2006). Magas
ökotoxikológiai hatásaik mellett az emberre is veszélyesek, mert
némelyikük immunrendszert moduláló, endokrin rendszert romboló,
mutagén és karcinogén hatású.
Mindezen tények a környezeti kémikusokat a peszticidek
kemodinamikájának és környezetbeli sorsának a vizsgálatára sarkallták.
Az alkalmazott analitikai módszereknek képesnek kell lenni a
származékok kis mennyiségeinek mérésére és egyértelmű bizonyítékot
kell szolgáltatniuk bármilyen detektált vegyület azonosságának és
koncentrációjának megerősítésére. A szakirodalomban számos
publikáció foglalkozik a peszticidek, bizonyos bomlástermékeik és
transzformált származékaik tandem tömegspektrometriával (MS/MS)
kapcsolt
gázkromatográfiával
(GC)
és
(LC)-MS/MS
folyadékkromatográfiával történő elemzésével. Napjainkban kiváló
alternatív technikaként különösen az LC jelentősége növekszik, főként a
poláris és hőlabilis peszticidek vizsgálatára, melyek nem, vagy csak
származékképzés után alkalmasak GC elemzésre, ezért a
peszticidszármazékok vizsgálata során rutin technikaként fogadták el
nyomon követési célokra.
A LACREMED projekt partnereként szereplő Újvidéki
Egyetem Technológiai Tanszékén kifejlesztettek egy UHPLCHESI-MS/MS-alapú
(ultra-high
performance
liquid
chromatography with tandem mass spectrometry coupled to
heated electrospray ionization source) gyors analitikai
módszert, amely alkalmas a LACREMED projektben vizsgált,
anilin- és fenol-származékokat generáló peszticidek és
származékaik kimutatására:
3-klóranilin (3-CA),
4-klóranilin (4-CA),
3,4-diklóranilin (34-DCA),
2,6-dimetilanilin (2,6-DMA),
3-klór-4-metilanilin (3-C-4-MA),
2,4-diklórfenol (2,4-DCP), és
4-klór-2-metilfenol (4-C-2MP).
A módszerfejlesztésre felhasznált minták a következők
voltak:
Folyékony tápoldatok (glükóz, L-aszparagin, D, L-fenilalanin,
adenin, thiamin és különböző sók vizes oldatai) a kiválasztott
xenobiotikummal adalékolva, melyek hígítása a kezdeti mobil
fázissal történt annak érdekében, hogy a kalibrációs görbe
tartományába eső koncentrációjú oldatok jöjjenek létre.
Különböző típusú, a kiválasztott xenobiotikummal
kiegészített talajok ultratiszta vízzel történő rázásával és
centrifugálással nyert vizes talajminta-extraktumok.
Valamennyi minta előkészítése a LACREMED projekt Vezető
Kedvezményezettjeként
szereplő
Szegedi
Tudományegyetem munkatársaival közösen történt.
4
LACREMED
Experimental conditions
Eksperimentalni uslovi
Kísérleti körülmények
Mass spectrometry – MS/MS
UHPLC
MS/MS analysis was carried out on the triple quadrupole mass
spectrometer TSQ Vantage (Thermo Fisher Scientific, USA) with heatedelectrospray ionization probe (HESI-II, Thermo Fisher Scientific, USA,).
UHPLC analysis was performed by AccelaTM (Thermo Fisher
Scientific, USA). Each 10 µL samples was injected directly onto a
Hypersil GOLDTM column, 50 x 2.1 mm i.d., 1.9 µm (Thermo Fisher
Scientific, USA). A gradient UHPLC method used mobile phase A
(water with 1% acetic acid and 5mM ammonium acetate) and B
(methanol) at flow rate of 0.3 mL/min. The gradient is described in
Figure 1.
The MS conditions were as follows (Figure 1):
• Ion source polarity: positive/negative ion mode
• Spray voltage: 3.4 kV
• Vaporizer temperature:350°C
• Sheath gas pressure (N2): 35 arbitrary units
• Auxiliary gas pressure: 10 arbitrary units
• Capillary temperature: 240°C
UHPLC
Analiza se zasniva na UHPLC sistemu - AccelaTM (Thermo Fisher
Scientific, USA). 10 µL svakog uzorka direktno je injektirano na
Hypersil GOLDTM kolonu (Thermo Fisher Scientific, USA), dužine 50
mm, unutrašnjeg prečnika 2,1 mm, sa četicama 1,9 µm. Gradijent
UHPLC metode sa mobilnom fazom A (voda sa 1% sirćetne kiseline i
5 mm amonijum acetata) i mobilnom fazom B (metanol) primenjen je
sa protokom od 3 ml/min. UHPLC gradijent je prikazan na slici 1.
Masena spektrometrija – MS/MS
MS/MS analiza vršena je sa tripl kvadrupolnim detektorom TSQ Vantage
(Thermo Fisher Scientific, USA) sa zagrevajućim elektrosprej
jonizacijonim izvorom (HESI-II, Thermo Fisher Scientific, USA).
Optimizovani MS uslovi (Slika 1):
• Polarnost jonskog izvora: pozitivan/negativan jonski mod
• Napon spreja: 3,4 kV
• Temperatura isparivača (vaporizer): 350 oC
• Protok azota kao „sheath“ gasa (N2): 35 arbitarnih jedinica
• Protok azota kao „auxiliary“ gasa (N2): 10 arbitarnih jedinica
• Temperatura kapilare: 240 oC
UHPLC
Az UHPLC analízist AccelaTM (Thermo Fisher Scientific, USA)
rendszeren végeztük. Minden mintánál 10 µL-t injektáltunk
közvetlenül egy Hypersil GOLDTM (Thermo Fisher Scientific, USA)
oszlopra (50 x 2,1 mm i.d., 1,9 µm). Az elválasztás grádiens elúcióval
történt, ahol a mozgó fázis A (víz 1% ecetsavval és 5 mM
ammónium-acetáttal) és B (metanol) eluensének áramlási sebessége
0,3 mL/min volt. A grádienst az 1. ábra mutatja be.
Tömegspektrometria – MS/MS
Az MS/MS analízist fűtött-elektrospray ionizációs próbával (HESI-II,
Thermo Fisher Scientific, USA) kapcsolt TSQ Vantage (Thermo Fisher
Scientific, USA) tripla-kvadrupól tömegspektrométerrel (MS) végeztük.
Az MS paraméterek a következők voltak (1. ábra):
• Ionforrás polaritás: pozitív/negatív ionmód
• Spray-feszültség: 3,4 kV
• Porlasztó hőmérséklet: 350 °C
• Szárító gáz nyomása (N2): 35 egyedi egység
• Segédgáz nyomása: 10 egyedi egység
• Kapilláris hőmérséklet: 240 °C
(a)
(b)
Figure 1 UHPLC-MS/MS conditions
Figure 2 Optimization of collision energies of 2,4 DCP (a) and 3 CA (b)
Slika 1. Optimizovani uslovi za UHPLC-MS/MS
Slika 2. Optimizacija kolizione energije za 2,4 DCP (a) i 3 CA (b)
1. ábra: UHPLC-MS/MS körülmények
2. ábra. Az ütközési energia optimalizálása a 2,4 DCP (a) és a 3 CA (b)
esetében
5
LACREMED
3C-4MA
R2=0.9908
W:1/X
3,4-DCA
R2=0.9918
W:1/X
3CA
R2=0.9961
W:1/X
Figure 3 Calibration
curves for some of
xenobiotic
Slika 3. Kalibracione
krive za izabrane
ksenobiotike
2,4-DCP
R2=0.9938
W:1/X
4 CA
R2=0.9937
W:1/X
4C-2MP
R2=0.9901
W:1/X
3. ábra: Néhány
xenobiotikum
kalibrációs görbéje
Table 1. Optimized UHPLC-HESI-MS/MS parameters for selected xenobiotics
Tabela 1. Optimizovani parametri UHPLC-HESI-MS/MS metode za ispitivane ksenobiotike
1. táblázat: A szelektált xenobiotikumokra optimalizált UHPLC-HESI-MS/MS paraméterek
Compounds
Ksenobiotici
Xenobiotikumok
tRa,
min.
Ionization mod
Jonizacioni mod
Ionizációs mód
Precursor ion (m/z)
Prekursor jon (m/z)
Prekurzor ion (m/z)
Product ionsb (m/z)
Produkt jonib (m/z)
Termék ionokb (m/z)
CIDc (eV)
3-CA
4.58
+
128.015
66.1/75.1
31/33
4-CA
4.04
+
128.015
66.1/75.1
31/33
3,4-DCA
5.64
+
161.992
65.1/74.1
21/49
2,6-DMA
4.57
+
122.076
77.1/79.1
29/21
3-C-4-MA
5.19
+
142.033
89.1/107.1
32/17
2,4-DCP
6.01
-
160.922
35.3/105.1
20/19
4-C-2MP
5.95
-
141.012
35.2/105.1
18/19
aRetention
bNumerical
time
values are\ given in the order quantifier/qualifier
ion.
cCollision-induced
dissociation
quantifier/qualifier ion.
energy
for
aRetenciono vreme
bJon
korišten za kvantifikaciju („quantifier“) /jon korišten za
identifikaciju („qualifier“) jon.
cOptimizovana
koliziona
energija
za
dobijeni
„quantifier“/„qualifier“ jon pri cepanju prekursor jona.
aRetenciós idő
bA
számértékek a mennyiségi/minőségi meghatározásban
résztvevő ionok szerint vannak megadva.
cAz
ütközés indukálta disszociációs energiák a
mennyiségi/minőségi meghatározásban résztvevő ionok
szerint
References/Literatura/Irodalom
Botitsi, H., Economou, A., Tsipi, D. 2007. Anal. Bioanal. Chem. 389,1685-1695.
Claver, A., Ormad, P., Rodriguez, L., Ovelleiro, J. L. 2006. Chemosphere, 64, 1437–1443.
Frenich, G. A., Martínez Salvador, I., MartínezVidal, J. L., López-López, T. 2005. Anal. Bioanal. Chem. 383, 1106–1118.
Hiemstra, M. and Kok, A. 2007J. Chromatogr. A. 1154, 3-25.
Kampioti, A. A., Borba da Cunha, A. C., López de Alda, M., Barceló, D. 2005. Anal. Bioanal. Chem. 382, 1815–1825.
Pandiyan, T., Rivas, O. M., Martinez, J. O., Amezcua, G.B., Martinez-Carrillo, M.A. 2002. J. Photoch. Photobio. A. 146 (3), 149–155.
Sajben-Nagy, E., Manczinger, L., Škrbić, B., Živančev, J., Antić, I., Krisch, J., Vágvölgyi, Cs. 2013. Proceedings of 15th Danube-Kris-Mures-Tisa
(DKMT) Euroregion Conference on Environment and Health with satellite event LACREMED Conference “Sustainable agricultural production:
restoration of agricultural soil quality by remediation“, p. 21-26, Novi Sad, Serbia, May,16-17.
 Sannino, A. and Bandini, M. 2005. Rapid Commun. Mass Spectrom. 19, 2729–2733.







This document has been produced with the financial assistance of the European Union. The content of the document is the sole responsibility of the Faculty of Technology, University of Novi Sad,
Serbia and can under no circumstances be regarded as reflecting the position of the European Union and/or the Managing Authority.
Ovaj dokument je odštampan uz finansijsku podršku Evropske unije. Za sadržaj ovog dokumenta je odgovoran isključivo Tehnološki fakultet Univerzitet u Novom Sadu i sadržaj ovog dokumenta
ne odražava zvanično mišljenje Evropske unije i/ili Direktorata.
Ez a dokumentum az Európai Unió pénzügyi támogatásával valósult meg. A dokumentum tartalmáért teljes mértékben a Technológia Kar, Újvidéki Egyetem, Szerbia vállalja a felelősséget, és az
semmilyen körülmények között nem tekinthető az Európai Unió és/vagy az Irányító Hatóság állásfoglalását tükröző tartalomnak.
6