Transcript Granulopoïèse, Monocytes-macrophages

3e Pharmacie
2011
Janvier 2011
Pr Abderraouf Oueslati
La moelle rouge chez l’adulte
1. Extrêmités supérieures du fémur et de
l’humérus
2. Les cavités des os courts et des os plats
Vertèbres, côtes
sacrum, sternum
clavicules , os iliaque
os du crâne
Humérus
Fémur
Péroné
Tibia
Homing
Diabase
Stroma médullaire
Sinus central
Le réseau vasculaire
médullaire
Fibroblastes
Adipocytes
Cellules endothéliales
Ostéoblastes
Macrophages
Cellule souche
totipotente
Cellule souche
myéloïde pluripotente
CFU-GEMM
Cellule souche lymphoïde
pluripotente
GB
GR
Plaquettes
Lymphocytes
T, B, NK
CFU-GEMM
Cellule souche
totipotente
Progéniteurs spécifiques
CFU-GM
CFU-E0
La granulopoïèse
CFU-G
CFU-M
CFU-B
Progéniteur spécifique
Granulopoïèse
(CFU-G Granulopoïèse
ou CFU-E0 ou CFU-B)
Myéloblaste
Promyélocyte
Index de
maturation
=1
PHASE
MITOTIQUE
Métamyélocyte
Myélocyte
Myéloblaste + Promyélocyte + myélocyte
Métamyélocyte
PHASE POST
MITOTIQUE
Granulocyte mür = Polynucléaire
Sang
RÉGULATION POSITIVE
CFU-GM
IL-3
GM-CSF
G-CSF
CFU-B
IL-3
IL-4
CFU-G
IL-3
GM-CSF
G-CSF
Myéloblaste
IL-4
IL-5
PNB
PNN
IL-3
GM-CSF
IL-5
Myéloblaste
Myéloblaste
G-CSF
CFU-E
PNE
RÉGULATION NÉGATIVE
Les inhibiteurs de la
granulopoïèse
Prostaglandines E
Interférons
Isoferritines acides
Lactotransferrine
TNF
TGF-b
MIP-a
ÉTUDE DE LA
GRANULOPOÏÈSE
NFS
Étude des
granulations
cytoplasmiques
Immunologie
Cytochimie
..
Culture des
cellules
médullaires
Dosage du
lysozyme
Formule sanguine
PNN
40 à 75 %
PNE
0à5%
PNB
< 0,5 %
Lymphocytes
20 à 40 %
2 à 10 %
Monocytes
Nombre de globules blancs
chez l’adulte
(> 15 ans)
4000 à 10 000/mm3
4 à 10.109/L
PNN
1700 à 7000/mm3
PNE
0 à 500/mm3
PNB
0 à 50/mm3
Les granulations cytoplasmiques
de la lignée neutrophile
Granulations
Granulations
secondaires
« spécifiques
primaires »
Beige rosé
ou marron
Rouges
ou rouge
violet
Lactotransferrine
+
Granulations
MPOsecondaires
+
Myélocyte
« spécifiques
»
Myéloblaste
Promyélocyte
Myélocyte
PNN: STOP
Métamyélocye(70-80 %)
PNN : 20-30 %
Le contenu des granulations
Granulations primaires
Myéloperoxydase
(MPO)
Mucopolysaccharides
acides
Lysozyme
Hydrolases acides
Protéases actives à pH
neutre
(collagénase, élastase…)
Protéines cationiques
Défensines...
Granulations spécifiques
Lactotransferrine
Transcobalamines I et III
Lysozyme
Gélatinase
Collagénase spécifique ...
Les granulations cytoplasmiques
de la lignée éosinophile
* Apparaissent à partir du promyélocyte
* Bleues puis bleu-violet
puis orangées
*Sphériques
*Contiennent de nombreuses enzymes
communes aux granulations primaires
des neutrophiles
Les granulations cytoplasmiques
de la lignée basophile
* violacée foncée
* Volumineuses
* Assez nombreuses
* Dispersées dans tout le PNB
CYTOCHIMIE
Pyronine
a naphtol
H 2 02
MPO
Rouge vif
G.N +
Monocytes + inconstamment
naphtol AS-D
acétate
naphtol AS-D
chloroacétate
Estérase
Grains bleus de
tailles diverse
G.N+ M +
Si + fluorure de
sodium
Estérase
Agrégats
brun-rouge
G.N +
seules GN +
Dosage du lysozyme
Dans le sérum ou les urines
Lecture
du
L’étalon
Lysosyme
résultat
Substrat
Enzyme
du
dosage
produite
par
L'hydrolyse
lemonocytes
lysozyme
les granuleuxpar
et les
Lysozyme
de
se traduit
par la clarification
de
blanc
d'oeuf
de
poule
la suspension
et donc
Suspension
bactérienne
par une diminution
« Micrococcus
lysodeikticus »
de l'absorbance à 550 nm.
Immunologie
Cellule souche
totipotente
:
CD34+
Immuno-cytochimie à l’aide
CFU-GEMM
: CD 34
+, CD33+
d’anticorps
spécifiques
CFU-GM : CD13+
MPO
CD34Lysozyme
et CD33
disparaîssent
avec l'avancée en maturation
Suspension
cellulaire
Culture des cellules médullaires
Colonie
5 % CO2
Milieu semi-solide
(1 % méthyl-cellulose)
37°C
Étuve humide
+
Milieu nutritif
(aa, vitamines)
+
30 % sérum de veau foetal
+
Cytokines recombinantes
.Interleukines
.GM-CSF
.G-CSF
.M-CSF
.EPO
.TPO …
5 à 21 jours
Les cellules matures
ou en maturation
terminale meurent.
Les progéniteurs
se divisent
Analyse d'une colonie
(Microscopie)
*Taille
*Composition cellulaire
*Temps nécessaire à
l'obtention d'une colonie mature
LES FONCTIONS
DU PNN
Puissant système de défense
Élimine les structures
étrangères
régulation
du
contre
les
cellules altérées
système
immunitaire
agents
pathogènes
molécules altérées
Surtout les
bactéries
Champignons
Parasites
virus
MIGRATION DU PNN
MO
1011 PNN/ j
0à5j
Pool marginal
Pool circulant
Pool marginal
Substances
chimioattractantes
Diapédèse
Tissus
ADHÉRENCE ET PHAGOCYTOSE
Bactérie
Fab
IgG
Fc
Opsonines :
IgG
IgA
C3
Phagosome
Phagolysosome
Bactérie
PNN phagocytant des bacilles
MÉCANISMES TUEURS
DU PNN
Explosion oxydative
« Bactéricidie
dépendante
de l’O2»
Bactéricidie
indépendante
de l’O2
L’EXPLOSION OXYDATIVE
FRO
NADPH oxydase
2O.2 + NADP+ + H+
2O2 + NADP
anion superoxyde
Superoxyde dismutase
O .2
+
H2O2 + 02
O.2 + 2H+
pH acide
H2O2/O.2 + Métal de transition
Radical hydroxyle (.OH)
MPO
H2O2 + ClH+ + OCl- + R-NH2
acide Hypochloreux (HOCl) + H2O
Chloramines (R-NHCl) + H20
BACTÉRICIDIE
INDÉPENDANTE DE L’O2
Molécules et enzymes
directement bactéricides
présentes dans
les granulations
surtout I
Lysozyme
Molécules et enzymes
directement bactéricides
présentes dans
Protéines
les granulations
du PNNProtéases
Cathepsine cationiques
actives à
(surtout les granulations
I
)
« BPI »
pH neutre
Défensines
Lactotransferrine
ACTIVITÉ DÉGRADATIVE
Activités :
Protéasique
Lipasique
RNAsique
DNAsique
Diminution du pH (≈ 5)
favorise l'action des
hydrolases acides
Bactéries tuées
Autres particules ou
cellules et molécules altérées
LES FONCTIONS DES
PN ÉOSINOPHILES
-
Amplification de la
Régulation
de la
réponse
inflammatoire
Réaction
d'hypersensibilité
réponse
Cytotoxicité
immunitaire
Faible
fonctions
de
Production
de cytokines
po-inflammatoires
Libération
d’histamine
Coopération
Défense contre les larves de parasites
(IL-1,
IL-6, TNFa)et
et
de prostaglandines
phagocytose
Production
de cytokines
cellulaire
de
bactéricidie
immuno-modulatrices
ADCC
: IgG et IgE
- Production de substances chimioattractantes
Protéines cationiques
amplifiant la réaction inflammatoire
(éotaxine, IL-16…)
LES FONCTIONS DU
PN BASOPHILE
Allergène
IgE
RHS
Libération
Dégranulation
d’histamine
du PNB
immédiate
LES LIGNÉES
LYMPHOCYTAIRES
Cellule souche totipotente
CFU-GEMM
Cellule souche
lymphoïde
Thymus
M.O
Lymphocytes
Lympocytes
B
T
Lymphocytes
NK
MIGRATION DES LYMPHOCYTES
T,B
Organes lymphoïdes
périphériques
Organes lymphoïdes
périphériques
Ganglions
Ganglions
Rate
MALT
Rate
MO
MALT
MALT :
MO
* Carrefour aéro-digestif
* Amygdales linguales, pharyngées, palatines
* végétations adénoïdes
* Bronches
* Plaques de peyer dans l'intestin.
Migration des Lymphocytes NK ?
Beaucoup
d'inconnues
Les ganglions
Certains
organes
comme
persistent
à
périphériques
le
foie etquant
l'utérus
localisationde
ne la
contienenent
des
contiennent
desnombreuses
cellules NK
Lymphocytes
NK
dansqu’en
l'organisme.
casNK
cellules
de situation
pathologique
Les récepteurs spécifiques de l’Ag
Lymphocytes
B
Lymphocytes
T
Ig de sur surface
« sIg »
« TCR »
associé à
L’Ag CD3
Reconnaissance
107 à 109
Ag et épitopes antigéniques différents
LA LYMPHOPOÏÈSE « T »
« Thymus »
Prothymocyte
CD4+, CD8+
Réarrangement des
gènes TCR
IL-1, IL-2, IL-7
GM-CSF
Stroma thymique
(cellules épithéliales,
macrophages,
cellules dentritiques)
Tymocyte immature
Sélection
> 90 %
autoréactifs
éliminés
Thymocyte mature CD3+, CD4+ ou CD3+, CD8+
Lymphocyte T
LA LYMPHOPOÏÈSE « B »
MO
Pro-lymphocyte B
(Pas d’Ig)
Réarrangement de gènes
Codant pour les Ig
Stroma médullaire, IL-4
Pré-lymphocyte B
(Ig cytosolique)
IL-4, IL-5, IL-6
Lymphocyte B
(sIg)
ACTIVATION
DES LYMPHOCYTES T
Fonction effectrice
Fonction
de régulation
de l'immunité
à
médiation
de la réponse
immunitaire
Apparition decellulaire
différents clones
Lym
T
lymphocytaires
Fonction
effectrice
de
Th1
(CD4+)
cytotoxiques
l'immunité
à
ayant
3Th1
fonctions
Th2
Th2
(CD4+)
médiation
impliquées
cellulaire
dans
Cytotoxicitérestreinte
spécifiques
impliquées dans l’imm
par le CMH
I’Imm à médiation
humoraleCellulaire
différentes
IL-2,
IFN-g,
TNF
IL-4,
5,
6,
10,
13
Lymphocytes
Cytotoxicité
dépendante
Fonctions deT
suppresseurs
d’Ac
(ADCC)
mémoire
(CD8+)
Activation
des lymphocytes
B
Certains
lymphocytes
B gardent
la mémoire de l'Ag.
Lymphocyte B
Cette mémoire antigénique B
est entretenue dans
la circulation par
les complexes immuns
circulants
Plasmocyte
LES LYMPHOCYTES
NK
Lymphocytesdes
NK
produisent
Capables
de tuer
NK
granuleux
cytokines
des cellules
tumorales
reconnaît
un étatou
dedes
stress ou
*Acteurs
de
cellules
infectées parcellulaire
des virus
de transformation
la CD56+,
coopération
cellulaire
CD16+,
CD3-.
*Pontclasse
entre I
CMH
l'immunité
innée
et
acquise
Composantes
de
l'immunité
déficientes
innée cellulaire
ÉTUDE DES LIGNÉES
LYMPHOCYTAIRES
Immunophénotypage
Nombre
de lymphocytes
et
numération
chez
l’adulte :
Frottis sanguin
en « cytométrie de flux » 3
1500 à 4000/mm
utilisant des AC monoclonaux
1,5 à
9
4.10 /L
Ly T (CD3+) : 70 à 80 %
2/3 CD4+, 1/3 CD8+
Ly B (CD19+) : 5 à 15 %
Ly NK (CD16+; CD3-) : 5 à 20 %
LES MONOCYTES - MACROPHAGES
G-CSF
CFU-GM
M-CSF
CFU-G
CFU-M
M-CSF, IL-3, GM-CSF
Monoblaste
Promonocyte
Monocyte
Monocyte : Sang
Macrophage
Tissus
Ex : Cellules de Kupffer du foie
Ostéoclaste de l’os
Astrocytes du cerveau
PNN
Les fonctions des
monocytes-macrophages
Activités
deet
synthèse
et de
Phagocytose
destrucion
des
Rôle
dans
l’immunité
sécrétion
Cytotoxicité
micro-organismes
adaptative
Subtances
Substances
Cytokines
Inhibiteurs
de Protéines
Enzymes
Cytokines
endogènes
de
exogènes
Déclenchement
detransport:
la réaction
protéases
lysosomiales
Présentation
Détermination
de l'antigène
du type aux
transferrine
inflammatoire
Fonctions
immunitaires
ferritine
lymphocytes
de réponse
T
régulatrices
transcobalamine
Tde
ou
B
Facteurs
Facteur
Interleukines
croissance
Composés du
Bactéries
GRTNFa
etINFα
plaquettes
Régulation
PNN
vieillisde
PDGF
TGFb
GR
Lipides
âgés
Poussières
d’hémostase
Virus
complément
(IL1,
hématopoïétiques
IL6,
IL-8,
IL-10, IL-12)
Sensibilisés
Monoxyde
d’azote
Corps
nécrotiques
l'hématopoïèse
Débrits
Parasites
Corps
apoptotiques
Par
des Ac M-CSFProstaglandines
(NO) (G-CSF,
GM-CSF,
)
Champignons
Rôle dans
Chimioattractants
l’hémostase
Paramètres biologiques
Nombre
* Myéloperoxydase
de cellulaire
monocytes
+
*Culture
(inconstamment)
dans
leCD33
sang+,
La +CFU-M
CD45
* Estérases + 3
100
àCD13
1000/mm
génère
en 7
+,jours
* Dosage du lysozyme
une
petite
colonie
CD14
+ 9/L de
0,1
à
1.10
* Phosphatase acide +
20 à 200
CD68
+ etcellules
CD61+
strictement monocytaires
LE MYÉLOGRAMME
Ponction sternale
Trocarts
Ponction à l'épine iliaque
postérosupérieure
Frottis médullaires
Lignée granuleuse
Érythroblastes
Lymphocytes
Plasmocytes
Monocytes
60 à 70 %
15 à 30 %
5 à 20 %
0à3%
0à2%
MERCI
DE
VOTRE
ATTENTION