Transcript 3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN

Tema 11
TÉCNICAS DE
MANIPULACIÓN
GENÉTICA
Licenciado en Química
Curso 1º
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Las enzimas de restricción. Aislamiento de ADN foráneo.
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector/ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Obtención de genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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Curso 1º
1. Introducción: la clonación molecular
Tema 11
La clonación consiste en la obtención de un clon, entendido como un conjunto
de elementos genéticamente iguales entre si e iguales a su precursor.
- Amplificación de moléculas de ADN por clonación célular
-Amplificación de moléculas de ADN por clonación acelular (PCR)
- Manipulación genética y clonación de organismos pluricelulares (animales y plantas)
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1. Introducción: la clonación molecular
Tema 11
... ¡¡ Dios mío, me
han clonado... !!
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1. Introducción: la clonación molecular
Estrategia general del proceso de clonación
Extraer el
gen de interés
insulina
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Tema 11
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Las enzimas de restricción. Aislamiento de ADN foráneo.
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector/ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Obtención de genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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Curso 1º
1. Introducción: la clonación molecular
Aislamiento y
digestión del ADN
Tema 11
• Herbert Boyer (Unversidad de Columbia)
Enzimas restricción
Inserción en
moléculas vectores
• Stanley Cohen (Universidad de Stanford)
.
Plásmidos
bacterianos
con capacidad autónoma de
replicación en la célula hospedadora
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2. Las enzimas de restricción
Tema 11
Los ácidos nucleicos son hidrolizados por
nucleasas
Fosfodiesterasa
de veneno de
serpiente
Exonucleasas: atacan por un extremo determinad
de la
cadena nucleotídica
• exonucleasa a o 3’
• exonucleasa b o 5’
Endonucleasas: atacan de forma selectiva una secuencia
nucleotídica
Enzimas de restricción
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2. Las enzimas de restricción
Tema 11
EcoRI actuando
sobre una
secuencia de
ADN
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1.
Aislamiento del la
ADN
1. Introducción:
clonación
foráneo y del ADN vector
molecular
Tema 11
Estrategia general del proceso de clonación
2. Unión del fragmento de
ADN foráneo a un vector
3.Introducción del vectorADN
foráneo
en
la célula hospedadora
4.
Selección
transformantes
de
5.
Estabilidad
de
información genética
Licenciado en Química
Curso 1º
los
la
Cortar el ADN foráneo y el vector
con las mismas enzimas de
restricción
2. Aislamiento del ADN foráneo. Endonucleasas
Tipo I y Tipo III
 Actividad restricción y modificación
 Precisan Mg 2+, ATP y S-adenosil-metionina
 Reconocen una secuencia específica
 Recorren un cierto número de bases y cortan
Tipo II
 Rompen por la secuencia de reconocimiento
 Precisan Mg 2+, pero no ATP
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Tema 11
2. Las enzimas de restricción
Tema 11
Los ácidos nucleicos son hidrolizados por nucleasas
Ejemplos de endonucleasa
extremos
cohesivos
5’
3’
G↓A A T T C
C T T A A↑G
3’
5’
C C G G
G G C C
extremos romos
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2. Aislamiento del ADN foráneo. Endonucleasas
Tema 11
Acción de endonucleasas de restricción Tipo II: corte ADN
EcoR 1 de E.coli
G AAT T C
C T TAA G
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Curso 1º
Secuencias
Palindrómicas
AA G C T T
Hind III de
T T C G AA
Haemophilus influenza
2. Aislamiento del ADN foráneo. Endonucleasas
Tema 11
Acción de endonucleasas de restricción Tipo II: corte ADN
EcoR 1 de E.coli
G AAT T C
C T TAA G
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Curso 1º
Secuencias
Palindrómicas
Extremos cohesivos
2. Aislamiento del ADN foráneo. Endonucleasas
Tema 11
Métodos de aislamiento de ADN foráneo
(a) Cortes:
• Endonucleasas de restricción (Tipos I, II, III)
• Fragmentación mecánica
(b) Síntesis
• Síntesis de DNA a partir de RNAm: Transcriptasa reversa
• Síntesis química directa
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2. Aislamiento del ADN foráneo. Endonucleasas
Síntesis de ADN a partir de ARNm
ADN
transcripción
Tema 11
Transcriptasa reversa
cDNA
ARN polimerasa
ARN
traducción
PROTEÍNA
RNA
La mayoría
de las células
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Transcriptasa
reversa
RNA
Retrovirus
2. Aislamiento del ADN foráneo. Endonucleasas
Síntesis de ADN a partir de ARNm
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Tema 11
Transcriptasa reversa
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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1.
Aislamiento del la
ADN
1. Introducción:
clonación
foráneo y del ADN vector
molecular
Tema 11
Estrategia general del proceso de clonación
2. Unión del fragmento de
ADN foráneo a un vector
3.Introducción del vectorADN
foráneo
en
la célula hospedadora
4.
Selección
transformantes
de
5.
Estabilidad
de
información genética
Licenciado en Química
Curso 1º
los
la
Vector de
clonación
Cortar el ADN foráneo y el vector
con las mismas enzimas de
restricción
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tema 11
Vectores de clonación
Son vehículos de ADN para ADN, capaces de recibir ADN
foráneo y replicarlo.
Características principales
• Se replican de forma autónoma (origen de replicación)
• Contienen regiones no esenciales para su multiplicación y
estabilidad
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3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tema 11
Tipos de vectores:
Plásmidos
• Permiten insertar hasta 20 kb de ADN pero son más
eficaces con insertos más pequeños (<10kb).
• Contienen genes de resistencia a antibióticos.
Virus
• Permiten insertar 15-20 kb.
• El sistema de infección del virus permite la entrada del
ADN en E. coli.
• Los virus de cadena sencilla tienen aplicaciones
especiales para secuenciar y realizar mutagénesis.
Vectores híbridos: cósmidos. Permiten insertar hasta 40 kb.
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3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tipos de vectores de clonación
• Plásmidos (bacterianos)
• Virus
• Cósmidos (laboratorio)
• YACs (levaduras)
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3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tema 11
• Plásmidos
ADN Plasmídico
ADN
pBR322
ADN Plasmídico
-Control relajado
-Fenotipo seleccionable
-Cierto Nº de sitios de restricción
-Bajo PM (4 363 bp) (transformación con plásmidos 10000bp es poco eficiente
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3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tipos de vectores de clonación
• Plásmidos (bacterianos)
• Virus
• Cósmidos (laboratorio)
• YACs (levaduras)
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Curso 1º
Tema 11
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tema 11
Virus: se emplea como vector, junto con la capacidad
que poseen para introducir el ADN foráneo en la
célula hospedadora
• Para bacterias: Fago l y derivados, Fago M13
• Para plantas: CaMV
• Para mamíferos: SV40
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3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
• Virus
-El corte por los sitios cos y el empaquetamiento en
la cápsida puede hacerse in vitro. La cápsida admite
entre 38 y 53 Kb (-20% y + 10% del DNA l).
-Se introduce en la bacteria hospedadora por
transducción
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Fago l
Tema 11
Adsorción de particulas virales a una bacteria
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Tema 11
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SIDA
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
Tema 11
Tipos de vectores de clonación
• Plásmidos (bacterianos)
• Virus
• Cósmidos (laboratorio)
V
Mezcla plásmido y virus
• YACs (levaduras), contienes sitios
característicos de la funcionalidad de los
cromosomas
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Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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1.
Aislamiento del la
ADN
1. Introducción:
clonación
foráneo y del ADN vector
molecular
Estrategia general del proceso de clonación
2. Unión del fragmento de
ADN foráneo a un vector
3.Introducción del vectorADN
foráneo
en
la célula hospedadora
4.
Selección
transformantes
de
5.
Estabilidad
de
información genética
Licenciado en Química
Curso 1º
los
la
Tema 11
3. Vectores de clonación y unión del framento de ADN
Enzimas de restricción
Vector
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ADN
Tema 11
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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Curso 1º
1.
Aislamiento del la
ADN
1. Introducción:
clonación
foráneo y del ADN vector
molecular
Estrategia general del proceso de clonación
2. Unión del fragmento de
ADN foráneo a un vector
3.Introducción del vectorADN foráneo en
la célula hospedadora
4.
Selección
transformantes
de
5.
Estabilidad
de
información genética
Licenciado en Química
Curso 1º
los
la
Tema 11
4. Hospedadores. Introducción del ADN foráneo
Tema 11
Métodos de inserción del ADN-vector en célula huesped
• Transformación: ADN plasmídico en célula. CaCl2 (mejora el proceso). Para
plásmidos < 20 Kb
• Infección: directa del virus empaquetado in vitro
• Transducción: ADN vírico sin cápsida (menor rendimiento)
• Microinyección: para células grandes (eucariotas) con micromanipulación.
• Pistola o Bombardeo de partículas: para transformar vegetales.
• Conjugación: celular del ADN de dos células
• Fusión de Protoplastos: intercambio ADN, dos células sin pared celularW, Au
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Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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Curso 1º
1.
Aislamiento del la
ADN
1. Introducción:
clonación
foráneo y del ADN vector
molecular
Estrategia general del proceso de clonación
2. Unión del fragmento de
ADN foráneo a un vector
3.Introducción del vectorADN
foráneo
en
la célula hospedadora
4. Selección
transformantes
de
5.
Estabilidad
de
información genética
Licenciado en Química
Curso 1º
los
la
Tema 11
5. Métodos de selección
MÉTODOS DE SELECCIÓN
 Resistencia a antibióticos
 Genes marcadores (gen b-galactosidasa)
 GFP (green fluorescent protein)
 Hibridación de colonias
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Tema 11
5. Métodos de selección
Tema 11
 Resistencia a antibióticos
La resistencia la confieren genes que porta el vector,
en este caso a ampicilina y a tetraciclina
El ADN
foráneo se
inserta en el
gen de
resistencia a
Ampicilina
Plásmido
pBR322
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Curso 1º
5. Métodos de selección
Tema 11
 Resistencia a antibióticos
La resistencia la confieren genes que porta el vector
Sin plásmido
Sin inserto
Con
tetraciclina
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Curso 1º
Con plásmido
Con inserto
Con plásmido
Sin inserto
Con ampicilina
y tetraciclina
5. Métodos de selección
MÉTODOS DE SELECCIÓN
 Resistencia a antibióticos
 Genes marcadores (gen b-galactosidasa)
 GFP (green fluorescent protein)
 Hibridación de colonias
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Tema 11
5. Métodos de selección
Tema 11
Gal
•
Genes marcadores (ej: gen b-galactosidasa)
Amp
pUC19
5-Br-4-Cl-3-indolil-b-galactósido  Br-Cl-indol + galactosa
(X-gal)

(Azul)
Ori
Inactivación insercional
(introducir el DNA foraneo en el medio del marcador)

Inserción génica positiva
(Unir el gen marcador al DNA foraneo)
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Curso 1º
5. Métodos de selección
Tema 11
• Genes marcadores (gen b-galactosidasa)
Gal + inserto
Amp
Gal
Amp
Ori
Plasmido pUC19
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Curso 1º
Ori
Plasmido pUC19
5. Métodos de selección
b-galactosidasa
b-galactosidasa
+ ADN foráneo
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Tema 11
pUC19 = plásmido
X
5. Métodos de selección
MÉTODOS DE SELECCIÓN
 Resistencia a antibióticos
 Genes marcadores (gen b-galactosidasa)
 GFP (green fluorescent protein)
 Hibridación de colonias
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Curso 1º
Tema 11
5. Métodos de selección
 GFP (green fluorescent protein)
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Curso 1º
Tema 11
5. Métodos de selección
Tema 11
 GFP (green fluorescent protein)
Licenciado en Química
Curso 1º
Excitación
(nm)
Emisión
(nm)
Actina
488
510
CFP-GOLGI
Ap. De Golgi
420
475
GFP-ENDO
Endosomas
488
510
M-GFP
Membrana
488
510
RFP-MITO
Mitocondria
550
600
CFP-MITO
Mitocondria
420
475
YFP-NUC
Núcleo
515
530
GFPPEROXI
Peroxisomas
488
510
YFP-ER
Retículo
endoplásmico
515
530
GFP-TUB
Tubulina
488
510
Vector
Localización
GFP-ACTIN
1.
Aislamiento del la
ADN
1. Introducción:
clonación
foráneo y del ADN vector
molecular
Estrategia general del proceso de clonación
2. Unión del fragmento de
ADN foráneo a un vector
3.Introducción del vectorADN
foráneo
en
la célula hospedadora
4. Selección
transformantes
de
5. Estabilidad de
información genética
Licenciado en Química
Curso 1º
los
la
Tema 11
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
Licenciado en Química
Curso 1º
Genotecas
Tema 11
Genoteca: colección de clones que contiene todo el
genoma de un organismo.
Tipos de genotecas:
• Genómicas
• Parciales
• ADNc. Colección de ARNm
Tipos de vectores:
• Plásmidos (Genotecas parciales)
• Fagos (Genotecas genómicas pequeñas y de ADNc)
• Cósmidos, BAC (genotecas genómicas complejas)
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Curso 1º
6. Obtención de genotecas
Utilizando un virus
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Curso 1º
Utilizando un plásmido
Tema 11
5. Métodos de selección
• Hibridación de colonias
Consiste en detectar secuencias
de DNA en colonias transformadas
mediante hidridación “in situ” con
sondas marcadas
• Obtención de la sonda
marcada:
• marcaje radioactivo: (32P)
• marcaje desoxinucleótidos
fluorescentes
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Curso 1º
Tema 11
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
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Curso 1º
7. Electroforesis en geles de agarosa
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS
Tema 11
 Se basan en la migración diferencial de las moléculas a separar en un
campo eléctrico.
 Generalmente se lleva a cabo en un soporte inerte. (AGAROSA)
 En la electroforesis en gel la fuerza que provoca la migración de las
moléculas es el campo electrico, pero el gel actúa como filtro molecular,
relentizando la migración su migración en función de su tamaño
Licenciado en Química
Curso 1º
7. Electroforesis en geles de agarosa
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
Tema 11
ELECTROFORESIS. SOPORTES
- Geles de acrilamida (proteínas, geles de secuenciación de ADN)
O
C
CH2
CH
Acrilamida
O
NH2
CH2
CH
C
O
NH
CH2
NH
C
CH
CH2
Gelificación
química
N,N`-Metilenbisacrilamida
- Geles de agarosa (los más usuales para ADN)
Gelificación
térmica
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
ELECTROFORESIS DE ADN
 Disolver la agarosa a la concentración deseada en una solución
salina TAE (Tris-acetato-EDTA) o TBS mediante calentamiento
 Dejar enfriar hasta unos 50ºC y añadir Bromuro de Etidio
N
+
C2H5
Licenciado en Química
Curso 1º
Bromuro de Etidio
7. Electroforesis en geles de agarosa
La agarosa es el polímero usado para la separación.
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
7. Electroforesis en geles de agarosa
La agarosa se mezcla con un tampón.
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
7. Electroforesis en geles de agarosa
La agarosa se disuelve en el microondas.
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
7. Electroforesis en geles de agarosa
Se preparan la cubeta y el peine.
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
7. Electroforesis en geles de agarosa
Tema 11
Se añade el polímero disuelto a la cubeta y se espera hasta su gelificación.
Licenciado en Química
Curso 1º
7. Electroforesis en geles de agarosa
Tema 11
 El gel se coloca en una cubeta de electroforesis y se cubre con solución
TAE
Se procede a cargar los
pocillos con las muestras
Licenciado en Química
Curso 1º
Se procede a conectar a una
fuente de electroforesis
7. Electroforesis en geles de agarosa
Formados los “pocillos”, se
coloca en ellos cada muestra,
incluidos los patrones.
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
7. Electroforesis en geles de agarosa
Cada muestra forma
una banda azul que
“correrá” en la agarosa
dependiendo
de
su
tamaño.
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
7. Electroforesis en geles de agarosa
Tema 11
 El gel se coloca en una cubeta de electroforesis y se cubre con solución
TAE
Licenciado en Química
Curso 1º
7. Electroforesis en geles de agarosa
Tema 11
El gel se retira y el bromuro de etidio ligado al ADN se visualiza con
transiluminador de UV, apareciendo bandas fluorescentes.
Se coloca el gel en un
transiluminador de luz UV
Licenciado en Química
Curso 1º
Se visualizan las bandas de ADN
teñidas con el bromuro de etidio.
7. Electroforesis en geles de agarosa
 La movilidad electroforética del ADN en los geles de agarosa es
inversa a su tamaño
1Kb
3.0
2.0
1.6
1.0
0.5
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Curso 1º
A
B
BKTBKT-O de H. pluvialis
Tema 11
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 11
Kary Mullis. Premio Nobel de
Química en 1993
Descrubrió la PCR en 1985, cuando trabajaba para Cetus Corp.
”Beginning with a single molecule of the genetic material
DNA, the PCR can generate 100 billion similar molecules in an
afternoon”
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 11
PCR es básicamente una técnica de amplificación del DNA.
DNA
(molécula sencilla)
Licenciado en Química
Curso 1º
PCR
amplificación
Muchas
moleculas
del mismo
ADN
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 11
PCR es básicamente una técnica de amplificación del DNA.
Controlando la temperatura
DNA
(doble hélice)
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G
• -A T G C A T G C A T G C * *
• Cortos primers de DNA específicos que hibridan con
la cadena que tiene que ser copiada
• los dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G T
• -A T G C A T G C A T G C * *
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G T A
• -A T G C A T G C A T G C * *
Tema 9
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G T A C
• -A T G C A T G C A T G C * *
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G T A C G
• -A T G C A T G C A T G C * *
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G T A C G T
• -A T G C A T G C A T G C * *
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
• Síntesis por DNA polimerasa
5’
3’
• -T A C G T A C G T A
• -A T G C A T G C A T G C * *
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 9
Después del primer periodo de síntesis de
DNA, tenemos copiada una cadena de DNA
Primer 1
Extensión de la cadena
Cadena original de DNA
¿Cómo produce este proceso una AMPLIFICACIÓN?
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema
Tema119
• Primero, la fusión separa las dos cadenas de DNA
a alta temperatura (90 ~ 100°C)
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema
Tema119
• Primero, la fusión separa las dos cadenas de DNA
a alta temperatura (90 ~ 100°C)
• Luego, usando un segundo primer, se copia la nueva
cadena con la DNA polimerasa
2
1
• Al mismo tiempo, la cadena original se copia
nuevamente, dado que hay un exceso de Primer 1
• Ahora tenemos dos copias de la molécula original
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema
Tema119
Para controlar el proceso, necesitamos controlar la temperatura
Fusión
95°C
Hibridización
50-60ºC
Extensión de
La cadena
75ºC
Primer Ciclo
2do Ciclo
95ºC
50 - 60ºC
75ºC
Si repetimos el ciclo, tendremos cuatro copias
Múltiples ciclos darán un incremento exponencial de copias
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 11
ADN-polimerasa de Thermus aquaticus
(Taq –polimerasa)
Parque Nacional de Yellowstone
Hey, Boo Boo
¿pescamos lasTap
para amplificar los
sandwiches?
Ok Yogy
Licenciado en Química
Curso 1º
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
8. PCR (Polymerase Chain Reaction)
Tema 11
Pelo humano
Licenciado en Química
Curso 1º
Indice
Tema 11
1. Introducción: la clonación molecular
2. Aislamiento de ADN foráneo. Endonucleasas
3. Vectores de clonación y unión del fragmento de ADN
4. Hospedadores. Introducción del vector-ADN foráneo
5. Métodos de selección
6. Genotecas
7. Electroforesis en geles de agarosa
8. PCR
Licenciado en Química
Curso 1º
8. Métodos de secuenciación del ADN
Tema 11
METODO DE
SANGER PARA LA
SECUENCIACIÓN
DE DNA
U
K
J
K
K
Licenciado en Química
Curso 1º
Tema 11
TÉCNICAS DE
MANIPULACIÓN
GENÉTICA
Licenciado en Química
Curso 1º