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中華大學生物資訊學系專題報告
定點突變 pUC19 vector建構High efficiency TA克隆之DNA複製載體
SDM pUC19 vector construct High efficiency TA cloning vector
專題組員:吳易庭、林庭聿
指導老師：張慧玫老師
一.摘要
三.成果
使用TA cloning vector是對於PCR聚合酶連鎖反應的
經過本團隊研究後pUC19-3型成功，定序結果(如圖一)經
過我們自行比對後(如圖二)確認為pUC19 TA cloning vector，
反應產物，要清楚讀序的必經步驟。
使用藍白篩再次的確認結果(如圖三)
TA cloning vector 是利用Taq DNA
圖一
polymerase(Thermus aquaticus)有對PCR產物會額外
在3’端突出多做一個腺嘌呤(A鹼基)的特性，與TA
cloning vector 於5’端多一個為胸腺嘧啶(T鹼基)能
有效的在連接酶的作用下連接在一起。
市面上所販售的TA cloning vector價格昂貴充滿無
限的商機。我們研究的目標是自製改版的DNA複製用的
載體，是將來到業界低本錢高獲利的技術。
二.簡介
三.(一) TA cloning vector介紹
Taq DNA polymerase會有一個習慣在產物3'端多一個突出
的A鹼基，所以如果載體在5'末端带有一個突出的T鹼基，
在DNA連接酶的作用下，就可將PCR產物輕鬆直接的克隆
到載體上，這種載體稱之為TA cloning vector。這種把
PCR產物克隆到載體的方法是目前很普遍的技術，可以大
大提高PCR產物的連接效率，連接到載體的PCR產物才能
毫無雜訊的清楚讀序。
(二)pUC19的介紹
pUC19載體是專供DNA複製保存用載體，帶有篩選標記
beta-galactosidase,及抗生素抗藥性(Ampicillin resistance)
等可供迅速篩選重組DNA片段。
其具有MCS(multi-cloning site)， 可供限制酵素(restriction
enzyme)切開，嵌入外來DNA片段，再以接合酶(ligase)接
入， MCS 位於Lac Z 基因中，利用IPTG & X-gal 的反應
來篩選，藍白篩選篩出具有ligation成功的白色菌落
colony。
(三)目標
將實驗室原版載體(pUC19)改版成為TA cloning
vector(pUC19 -3型)，以便聚合酶連鎖反應的產物可以直接
利用連接酶接入載體裡，一般克隆聚合酶連鎖反應產物兩
種方式:
1.利用限制酶切點和連接酶接入2.利用Taq DNA polymerase
聚合酶在產物的3'端加一個A，如果載體5'端,也多一個T以
T/A 配對接合。
第一種限制酶方式，片段末端，限制酶效率差，較不易成
功。第二種T/A方式，只需載體在5'端突出一個T，即可直
接使用。此次專題就是在將一般克隆載體製造成TA cloning
vector。本研究分五個階段進行，第一階段為去除Amp上
的AhdI，第二階段為點突變功能檢測，第三階段為點突變
序列檢測，第四階段為裝入AhdI做T/A接點，第五階段為是
否接入pUC19-AhdI-WYB檢測
實驗流程圖
圖二
圖三