Transcript Diapozitiv 1

Roman Štukelj
Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani
Mikrovezikli izolirani iz periferne krvi – klinično
pomemben artefakt izolacije
Mentorica: izr. prof. dr. Veronika Kralj-Iglič
Somentorica: doc. dr. Helena Abramovič
www.krkinenagrade.si
Namen dela
• izboljšanje razumevanja mehanizmov vezikulacije membran
• izboljšanje razumevanja presnove holesterola (hol)
• primerjava koncentracije mikroveziklov (MV) v izolatih iz periferne
krvi pri zdravih prostovoljcih in bolnikih z rakavimi obolenji
• povezava med koncentracijo holesterola v krvi in koncentracijo MV
v izolatih
• vpliv temperature med izolacijo na koncentracijo in velikost
mikroveziklov
2www.krkinenagrade.si
Mikrovezikli (MV)
• z membrano obdani nanodelci (< 1 µm)
• odcepijo se od membrane v zadnji fazi
brstenja in so več ali manj prosto gibljivi s
cirkulacijo (kri,limfa)
• prenašajo genetski material, receptorje,
infektivne delce, holesterol, ...
• predstavljajo dodatno zalogo holeterola v
krvi
Slika: prikazuje brstenje membrane eritrocita (A) in mikrovezikle (B), slikano z vrstičnim el. mikroskopom.
3www.krkinenagrade.si
Materiali in metode
•
IZOLACIJA MV IZ PERIFERNE KRVI
(modificirana metoda po Diamant in sod. 2002)
 merjenje št. MV s pretočnim citometrom
•
MERJENJE KRVNEGA HOLESTEROLA
(encimski kolorimetrični test - standardna metoda)
 statistična obdelava podatkov
•
STATISTIČNA OBDELAVA PODATKOV
•
SLIKANJE Z VRSTIČNIM ELEKTR. MIKROSKOPOM
4www.krkinenagrade.si
Rezultati
I.
MIKROVEZIKLI IN PRESNOVA
• Povprečna koncentracija MV je za 50 % večja po uživanju hrane
kot po postu (p = 0,0010).
• Koncentracije skupnega Hol, LDL-hol in HDL-hol so po obroku
ostale v okviru 2 % od prvotnega stanja.
• Koncentracija MV po obroku je negativno korelirala s
koncentracijo skupnega holesterola, oz. koncentracijo LDL-hol
po postu (p = 0,03 in p = 0,05).
5www.krkinenagrade.si
Rezultati
II. VPLIV TEMP. NA KONC. MV V IZOLATIH IZ PERIFERNE KRVI
Graf: Povprečna vrednost števila mikroveziklov izoliranih iz vzorcev krvi pri različnih temperaturah.
6www.krkinenagrade.si
Rezultati
III. PRIMERJAVA KONC. MIKROVEZIKLOV V IZOLATIH IZ PERIF. KRVI
PRI ZDRAVIH PROSTOVOLJCIH IN BOLNIKIH Z RAKAVIMI OBOLENJI
Graf: Povprečne koncentracije MV v različnih skupinah bolnikov. Povprečne koncentracije MV v izolatih (s standardnimi deviacijami) v
populacijah bolnikov z rakom prebavnih organov, bolnikov z drugimi boleznimi prebavnih organov in zdravih prostovoljcev.
7www.krkinenagrade.si
Sklepi
• Po jedi se znatno in statistično pomembno poveča koncentracija
mikroveziklov v izolatih iz periferne krvi.
• V okviru obstoječih možnosti predlagamo izboljšavo protokola.
Postopek izolacije mikroveziklov daje manj artefakta pri
temperaturi 37 ºC kot pri sobni temperaturi.
• Bolniki z rakom prebavnih organov imajo v izolatih iz krvi
statistično pomembno več mikroveziklov kot osebe z drugimi
boleznimi prebavnih organov in več kot zdrave osebe.
8www.krkinenagrade.si