Transcript Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO

Transgene, Keimbahn- und
konditionelle KO-Mäuse
Gliederung
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Überblick
Transgene Mäuse
Rückkreuzungen
Keimbahn-„Knockout“-Mäuse
Konditionelle „Knockout“-Mäuse
Zusammenfassung
Überblick
Ziel: Charakterisierung bestimmter Gene
aufgrund von Genveränderungen
 Transgene Mäuse: zusätzliche oder
veränderte Gene im Genom
 „knockout“ Mäuse: ein Gen wird komplett
deletiert
Aufteilung in Keimbahn- und konditioneller
Knockout

Erstellung transgener Mäuse
Auslösung einer
Superovulation
und Paarung
Übertragung der
behandelten Eier in
eine scheinträchtige
Maus
Entnahme der
befruchteten
Eizelle und
Injektion der DNA
Integration des
Gens in einige
Nachkommen
Quelle: Janeway
Rückkreuzungen
Einschleusen
der
Transgene
Rückkreuzung mit
gewünschtem
Stamm
Nachkommen
sind genetisch
heterogen
Fortgesetzte
Rückkreuzung
Quelle: Janeway
„Knockout“-Mäuse
Gen
Einbau ABResistenz
Einbau HSV-tk an
den Enden
Quelle: Janeway
Keine
IntegrationAbtöten
der Zelle durch AB
Integration an beliebiger Einbau an der richtigen
StelleAbtöten durch Stelle durch homologe
Ganciclovir
RekombinationResistenz
Züchtung „Knockout“-Mäuse
Transfektion von
ES-Zellen mit
KnockoutKonstrukt
Injektion der
ES-Zellen in
Blastocysten
Reimplantation in
eine
scheinträchtige
Maus
Enstehung einiger
chimärer Mäuse
Quelle: Janeway
Konditionelle „Knockout“Mäuse
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
Problem: Deletion eines Gens, das
fürs Überleben essentiell ist (rezessiv
letales Gen)
Erstellung homozygoter Tiere nicht
möglich
Verwendung RAG--Mäuse
Nutzung Cre-loxP-System
Verwendung von RAGdefekten Mäusen
RAG--Maus: keine B- und T-Zellen
Injektion der ES-Zellen in
RAG--Blastocyste
Chimäre Maus, deren
Lymphozyten von den ESZellen abstammen
Quelle: Janeway
Cre-loxP-System
Gen wird von loxP
flankiert
Cre-Rekombinase
schneidet das Gen raus
Quelle: Janeway
Zusammenfassung
Transgene Mäuse:
-zusätzliches oder verändertes Gen
-Injektion in Eizelle, Einbau unspezifisch
 Knockout Mäuse:
-Keimbahn: Deletion eines Gens in allen
Zellen, Einbau über homologe
Rekombination (AB-Resistenz, HSV-tk)
-Konditionell: Gewebespezifisch oder induziert,
RAG-, Cre-loxP

Vielen Dank für die
Aufmerksamkeit