Transcript lklwrfyl.pptx

‫استخالص الكلوروفيل وتقديره‬
‫باستخدام جهاز الطيف الضوئي‬
‫البالستيدات ‪CHLOROPLASTS‬‬
‫‪ ‬عضيات محدودة بغشاء بها نظام غشائي‬
‫داخلي يعرف بالثايالكويدات التي توجد في‬
‫حشوة بروتينية ‪.‬‬
‫‪ ‬توجد الثايالكويدات في الطحالب الخضراء‬
‫المزرقة فقط حرة في سيتوبالزم شبه هالمي‬
‫وتحمل الصبغات ‪.‬‬
‫‪ ‬تصطاد البالستيدات الضوء تحت سطح الماء‬
‫و تستخدمه لتثبيت الكربون في شكل‬
‫كربوهيدرات‪.‬‬
‫الصبغات المرتبطة باقتناص الطاقة‬
‫الضوئية الالزمة للبناء الضوئي هي‪:‬‬
‫الكلوروفيل‬
‫‪a,b,c,d‬‬
‫الكاروتينويدات‬
‫البيليبروتينات‬
‫أنواع الصبغات الموجودة في العوالق‬
‫الطحالب الخضراء‪:‬‬
‫‪ ‬يوجد بها كلوروفيل ‪ a‬باالضافة الى الصبغات المساعدة مثل كلوروفيل ‪ b‬و‬
‫الكاروتينويدات مثل الكاروتينات و الزانثوفيالت‪.‬‬
‫‪ ‬يوجد كلوروفيل ‪ c , d‬في الطحالب البنية و الدياتومات والداينوفالجيالت‬
‫‪ ‬ويختلف كلوروفيل ‪ c and d‬بعضهما عن كلوروفيل ‪ a‬في ‪:‬‬
‫• تركيبهما الجزيئي‬
‫• مدى االمتصاص عندما استخلصت في مذيبات عضوية وفحصت‬
‫باالسبكتروفوتوميتر‪.‬‬
‫الطحالب الخضراء المزرقة و الحمراء ‪:‬‬
‫‪ ‬وتتركز الصبغات منتشرة في منطقة‬
‫تسمى الكروموبالزم‪ .‬وتحتوي باإلضافة الى‬
‫الكلوروفيل ‪ a‬بعض الكاروتينويدات الى‬
‫الصبغات المساعدة مثل البيليبروتينات‬
‫(فيكوبيلينات) التي توجد كحبيبات تحت‬
‫المجهر وهي االجسام الفايكوبيلية التي‬
‫تتصل بسطح الثايالكويد‪ ,‬مثل فيكواريثرين‬
‫في الطحالب الحمراء و الفيكوسيانين في‬
‫الطحالب الخضراء المزرقة‪.‬‬
‫قياس مجاميع العوالق النباتية و‬
‫االنتاج االولي‬
‫قياسات الكلوروفيل ‪Chlorophyll Measurements‬‬
‫من الممكن تقدير غزارة الطحالب باستخالص الكلوروفيالت و‬
‫الكاروتينيدات باستعمال مذيبات عضوية(‪ %80‬او ‪ %90‬اسيتون او‬
‫‪ %100‬ميثانول)‬
‫•طريقة منحنى النمو وتستخدم للطحالب البحرية الكبيرة مثل‪Ulva, Gelidium, :‬‬
‫‪Sargassum‬‬
‫• طريقة الفصل الكروماتوغرفي‪:‬تستخدم للطحالب الملونة مثل البنية والحمراء و الذهبية‪.‬‬
‫ط ر ي ق ة ا س ت خ ال ص ا ل ك ل و ر و ف ي ل ل ل ع ي ن ا ت‬
‫الكبيرة‪:‬‬
‫‪ ‬يرشح الماء عبر شبكة ذات فتحات واسعة للتخلص من العوالق الحيوانية‪.‬‬
‫‪ ‬يرشح عبر مرشح ليفي زجاجي قطره ‪ 7‬سم سبق ان عومل بكربونات‬
‫المغنيسيوم‪(.‬عللي) وذلك البطال مفعول اي حموضة تتكون خالل عملية االستخالص‪.‬‬
‫حيث ان االصباغ تتحلل بوجود الحموض‬
‫‪ ‬وتستغرق عملية االستخالص ‪ 24‬ساعة في الظالم‪ ,‬قد تستغرق فترة اقل عند طحن‬
‫الراسب في مطحنة مناسبة وتزال الشوائب بالطرد المركزي وتحفظ عند درجة حرارة‬
‫‪°1‬م‪.‬‬
‫ت ق د ي ر ا ل ن م و ا ل ط ح ل ب ي ب ا س ت خ ال ص‬
‫الكلوروفيل وتقديره باستخدام جهاز الطيف‬
‫تستخدم هذه الطريقة للطحالب الخيطية مثل‪:‬‬
‫‪Nodularia, Nostoc, Desmedium ,Anabaena,‬‬
‫‪Oscillatori‬‬
‫الطحالب الخضراء المزرقة‬
‫طحالب خضراء من الدزميدات‬
‫الغرض من التجربة‬
‫تقدير معدل النمو بتقدير‬
‫كمية الكلورفيل بأستخدام‬
‫جهاز االسبكتوميتر‬
‫األدوات وطريقة العمل‬
‫االدوات المطلوبة‪:‬‬
‫العينة المراد تقدير الكلوروفيل بها‬
‫اسيتون ‪ %80‬او ميثانول‪.‬‬
‫هاون للطحن‬
‫االجهزة المستخدمة‪:‬‬
‫جهاز طرد مركزي‬
‫جهاز الطيف ‪Spectrophotometer‬‬
‫طريقة العمل ‪:‬‬
‫‪ ‬خذ ‪ 50‬مل من الطحالب الخيطية بالمخبار المدرج‬
‫‪ ‬رشح الطحالب من الماء و اغسلها بالماء المقطر للتخلص من االمالح التي عليها‪.‬‬
‫‪ ‬تتم عملية الهرس بالهاون حتى استخالص الكلورفيل‬
‫‪ ‬تنقل محتويات العينة و االسيتون من الهاون الى انابيب الطرد المركزي‬
‫‪ ‬توضع في جهاز الطرد المركزي لمدة ‪ 5‬دقائق‬
‫‪ ‬ننقل محتويات انابيب جهاز الطرد المركزي السائلة الى انابيب جهاز الطيف‬
‫‪ ‬تقرا العينة عند ثالث اطوال موجية مختلفة ثم التعويض في القانون وحساب كمية الكلوروفيل‬
‫( ‪) 664 – 647 – 630 nm‬‬
‫القانون‬
1)
Chlorophyll a =11.85 E664 -1.54 E647 -0.08 E630
2)
Chlorophyll /m³ = C x v/V x 10 mg/m³
3)
When V = ‫حجم العينة‬
4)
v = ‫حجم االسيتون‬