Transcript PGD

CORSO INTEGRATO DI GENETICA E
BIOLOGIA MOLECOLARE
AA 2014/15
Prof Alberto Turco
Lezioni 49 e 50
Ma 02.12.14
Diagnosi Prenatale
(Test genetici preconcezionali,
preimpianto e prenatali. Legge 40)
Definizione
Diagnosi prenatale (DP): peculiarità
Tempi ristretti
Unico esame
Spesso difficile se non impossibile prevedere le conseguenze
relative al fenotipo clinico (impossibile correlazione genotipo/fenotipo)
Limite più grande della DP: diagnosi fatta in virtuale
assenza del paziente
Il feto è visibile solo indirettamente (ecograficamente), e
non è possibile visitarlo né valutarne il grado di intelligenza
NB Consenso informato
TEST GENETICI PRECONCEZIONALI E PRENATALI
Sperm selection. Citometria a flusso. X- o Y-bearing sperm (es.selezione spermatozoi per X-linked disease
PGD (Preimplantation Genetic Diagnosis). Malattie monogeniche, cromosomiche. HLA-typing.
PGS (Preimplantation Genetic Screening). Screening di aberrazioni cromosomiche (es infertilità).
Villocentesi (CVS,Chorionic Villus Sampling). DP invasiva, 11-13° s.g. Su villi coriali (trofoblasto).
«Rescue Karyotyping». Tessuti archiviati dopo IVG (ricerca anomalie cromosomiche).
NIPT (Non Invasive Prenatal Testing). cffDNA (cell-free fetal DNA) su sangue materno.
Test Combinato. Ecografia (NT: Traslucenza Nucale) + duo test su sangue materno.
Amniocentesi. 15-17° s.g.
Amniociti (cc.sfaldamento fetali)
Funicolocentesi o Cordocentesi. Sangue fetale. >18° sg. Rischio bradicardia fetale. Non di routine.
Fetoscopia. Cute fetale. Non routine.
(R.Lewis, 11th Ed., 2015)
DIAGNOSI PRENATALE
DP NON INVASIVA (NIPD)
Ecografia (OK x circa 300 malformazioni,vitalità fetale,gemellarità,crescita,
posizione placenta, volume LA, test combinato-vd sotto)
Radiografia (!! Talvolta x displasie scheletriche fetali)
RMN (malformazioni cerebrali es.Dandy Walker=anomalie cervelletto)
Sangue materno:
Test Combinato (Tritest, duotest + NT=translucenza nucale)
Cellule fetali (?) (rarissime nel s.m., persistenza x anni)
DNA fetale (cffDNA*, NIPT=NonInvasive Prenatal Testing)
RNA fetale
* = circulating free fetal DNA
DP INVASIVA (IPD) (rischio di anomalia grave >o= rischio procedura)
Villocentesi (CVS) (11-12 s.g., 1-2% rischio aborto)
Amniocentesi (16-18 s.g., 0.5-1% rischio aborto)
Cordocentesi o Funicolocentesi (PUBS=Percutaneous
Umbilical Blood Sampling) (>18s.g, 3% rischio aborto)
Fetoscopia (18-20 s.g, rischio 3%, cute, fegato, ostruzione vie
urinarie, es sequenza di Potter)
PGD/PGS – Diagnosi/Screening Genetico Preimpianto vd oltre
DP non invasiva: ecografia
3D US
US = Ultrasound (Eco)
Screening biochimici in gravidanza (su sangue materno)
NTD = Neural Tube Defects
AFP = Alfa FetoProteina
DP Non Invasiva: Screening su sangue materno + ecografia.
Test combinato: “combina” diversi parametri: età, ecografia e analisi biochimica
su sangue materno
NT: Nuchal Translucency (translucenza nucale)
NIPD – Sangue Materno: cffDNA
NIPD = Non Invasive Prenatal Diagnosis
NIPT = Non Invasive Prenatal Testing/ NIPDT = Non Invasive Prenatal DNA Testing
cffDNA = circulating free fetal DNA
NIPT con cffDNA
NIPT LINEE GUIDA (2012)
…..In sintesi
Boston
DPN INVASIVA
AMNIOCENTESI
- 15/17 s.g. settimane di gestazione
- immunoprofilassi anti Rh (D) per donne Rh –
- 10/20 ml: urina + cellule fetali
- rischio di aborto: < 1% (0.5-0.8%)
- necessaria coltura cellulare (2-3 settimane)
- non rischio di “mosaicismo placentare” come
CVS
- NB IVG = travaglio abortivo
VILLOCENTESI
(CVS = Chorionic Villus Sampling)
- dopo 11a s.g. (no <9-10sg)
- immunoprofilassi antiD per femmine Rh –
- 1-2% mosaicismo (CPM=Confined Placental Mosaicism)
- precocità e rapidità diagnosi: analisi su DNA
e citogenetica (mitosi spontanee)
- evitare contaminazione materna
- rischio di aborto: circa 1%
- NB IVG = “semplice” raschiamento
Diagnosi prenatale
invasiva
per doppio rischio
mendeliano
(amniocentesi,
fetoscopia)
Biopsia cutanea - fetoscopia
Linkage analysis
PGD
Micromanipolatore (FIV, ICSI, PGD)
PGD – Biopsia blastomerica
PGD. Trasferimento dei pre-embrioni non affetti
PGD
1. Biopsia blastomerica (morula)
(1-2 cellule, 6-8cc, +3gg)
2. Biopsia blastocisti
(trofoectoderma, 100cc, +5gg)
3. Analisi del globulo polare
Early human preimplantation development in vitro
Pronuclear-stage embryo
First cleavage: 22-30h
MORULA
4-cell stage
8-cell stage
Compaction, 16-32 cells
Human blastocyst (day 4-5)
embryoblast
(inner cell mass)
trophoblast
blastocele
Biopsia blastomerica
PGD
Analisi GP2
GP = Globulo polare
Morula on a pin tip
ICSI = Intra Cytoplasmic Sperm Injection
Indicazioni: infertilità maschile (oligo/astenospermia),
PGD.
NB: leggero aumento di anomalie cromosomiche
e da imprinting nei figli ICSI.
FISH – Based Single-Cell
Preimplantation Sexing
(Severe X-linked Conditions)
PGS = Preimplantation Genetic Screening (aneuploidies)
5-color FISH – Single Interphase Blastomere Nucleus
aCGH PGD
Consenso Informato e Informativa – FIV, PGD, PGS
PRINCIPALI LIMITI DELLA PGD
•Complessità dell’intero iter diagnostico
• Rischi della tecnica analitica
• Rischio gravidanze multiple
• Costi elevati
ARGOMENTI A FAVORE DELLA
PGD
PREVENZIONE DI ANOMALIE GENETICHE GRAVI PRIMA
DELL’IMPIANTO E DELLA NASCITA DI BAMBINI MALATI
EVITARE L’ABORTO IN COPPIE A RISCHIO
SOTTOPOSTE A FIVET PER STERILITA’ DI COPPIA
EVITARE L’ABORTO IN COPPIE A RISCHIO CON RIPETUTE
ESPERIENZE DI DIAGNOSI PRENATALE SEGUITE DA INTERRUZIONI
SELETTIVE
TEST GENETICI/GENOMICI PRENATALI
PGD HLA
Matching
La undicenne Anna Fitzgerald è nata grazie alla fertilizzazione in vitro, con le caratteristiche genetiche
necessarie per poter salvare la vita alla sorella maggiore Kate, malata da tempo di leucemia.
Oltre ad assistere al calvario della sorella, Anna si è sottoposta a numerose analisi, trasfusioni e iniezioni,
il tutto per salvare Kate. Ma quando la sorella necessità di un rene, Anna si rifiuta, stanca di essere usata.
Sentendosi messa al mondo al solo scopo di salvare la sorella, Anna si rivolge ad un avvocato e fa
causa alla sua famiglia per avere l'emancipazione medica e il pieno controllo del proprio corpo.
Preimplantation HLA Testing (PHT)
NB Retinoblastoma
Una legge nefasta, crudele,
ideologica, antiscientifica,
incostituzionale,
e controversa…….
Sentenze a gogò……
PGD e Legge 40: alcune sentenze che hanno riammesso la PGD