Transcript Slide Headline - Agilent Technologies

Bienvenue au
séminaire
“Trucs et Astuces
sur la préparation
d‟échantillons”
Slide Headline
Agenda
Titre
Intervenant
Tout commence avec la préparation d‟analyse
Laure
BERTIN
30mins
Laure
BERTIN
30mins
- Revue des technologies et des techniques de préparation
d‟échantillons
- Nos solutions pour les matrices complexes
En route pour l‟extraction – Partie A
- Extraction de résidus de pesticides et toxines dans les matrices
alimentaires (de QuEChERS à la SPE)
- Solutions de préparation d‟échantillon pour l‟analyse de l‟eau et des
sols
Pause
15mins
En route pour l‟extraction – Partie B
- Nouveaux défis : contaminants et polluants dans le domaine
alimentaire et environnemental
- Trucs et astuces pour les matrices complexes
Laure
BERTIN
45mins
L‟analyse – sélection de la meilleure colonne
analytique
Katia LESFAR 30mins
HPLC UPLC, revue et performances
Laurent
Gouesclou
Page 2 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
30mins
Slide Headline
Page 3 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Page 4 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Agilent
Colonnes & Consommables-Portfolio
Les consommables
•Tous les consommables associés aux systèmes(LC & GC Supplies)
•Seringue
•Flaconnage
•…
Préparation d‟échantillon
•SPE
•BONDELUT VARIAN Portfolio
•96 well plate Captiva
Colonnes HPLC
•ZORBAX portfolio
•POROSHELL
•Rapid resolution and high Definition LC Columns
Colonnes CPG
• Colonnes Capillaires
• Fast GC Colonnes (0.18mm/0.15mm ID)
Page 5 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Cross Lab : une source unique pour vos instruments
Une source unique de consommables
pour vos instruments analytiques, quels
que soient le modèle ou la marque.
Discover www.ChromNews.com
- Agilent consumables current promotions
- Product launches
- Tips & tricks videos
- Webinars and more
Planet Agilent
Planet Agilent est une
destinations qui vous offrira les
dernières applications,
brochures et solutions produits
dans les domaines de tests
alimentaires et
environnementaux.
www.agilent.com/chem/PlanetAgilent
Scan View
www.agilent.com/chem/Scanview
Scanview Download:
http://www.chem.agilent.com/en-US/Support/Pages/scanview.aspx
Scanview vous permet de trouver facilement, en quelques secondes, la méthode de préparation
d‟échantillon et la méthode de séparation analytique que vous recherchez…
Slide Headline
Page 10 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Page 11 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Certificats
de présence & Feedback Form
NOUVEAU Certificat de présence
Nouveaux certificats de présence disponibles
Demandez le vôtre à la fin du séminaire
Feedback Form
Votre opinion est importante et nous aidera à
améliorer le concept de ce séminaire afin de vous
proposer des solutions au plus près de vos attentes.
S‟il vous plaît, complétez ce formulaire et laissez le à
un de nos experts Agilent.
Page 12 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
SlideRemplissez
Headline
le formulaire et obtenez...
Clés USB 2 Go
Contenant des informations sur la Préparation
d‟échantillon
Flyer 25% de remise
Page 13 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Laure BERTIN
Spécialiste Produits - Colonnes et SPE
France, Italie, Espagne et IDO
DUBAI
DURBAN
MOSCOU
Page 14 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
PRAGUE
Slide Headline
Pourquoi
Faire une Préparation d‟Echantillon?
1 litre
0,5 ml

Eliminer la matrice pour améliorer la limite de détection de l‟analyte

Concentrer l‟analyte pour augmenter la sensibilité

Modifier le solvant pour s‟assurer de la compatibilité avec l‟analyse
Page 15 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Effets
matrices
•
Chromatogramme inexploitable
•
Problème mécanique (bouchage, saturation de colonne)
•
Problème de durée de vie des colonnes LC
•
Suppression d‟ion en LC/MS
•
Perte de sensibilité
•
Maintenance des instruments
•
Augmentation du coût par analyse
•
Reports d‟analyses
Regardons le détails de quelques matrices courantes
Page 16 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Tissus
d‟origine animale, Viandes et Poissons
Composition








Eau
Graisses, Lipides, Protéines
Cellules
Collagène
Myosine + actine
Myoglobine
Sucres
Sels + électrolytes
Page 17 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Fruits
et Légumes / Boissons
Composition
Composition
















Sucres
Protéines, acides aminés
Vitamines
Enzymes
Graisses
Acides Organiques
Chlorophylle
Eau
Fibres
Page 18 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Sucres
Protéines
Graisses
Eau
Minéraux
Vitamines
Colorants
Slide Headline
Graines,
Noix, et Riz / Miel - Sucre
Composition







Protéines
Graisses
Cellulose
Sucres
Vitamines
Minéraux
Amidon
Page 19 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Composition






Eau
Sucres
Protéines
Acides Aminés
Vitamines
Minéraux
Slide/ Sol
Eau
Headline
Composition/Types



Potable
De surface
De mer
Challenges:



Volumes importants
Faibles limites de détections
Grandes quantités d‟analytes :
pesticides, médicaments…
Page 20 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Composition






Roches et minéraux
Silicates
Humus
Acides Humiques
Fibres de plantes
Micro-organismes
Slide
Headline Options de Préparation d‟Echantillon
Les Différentes
Extraction sur Phase Solide (Bond Elut)
Précipitation de Protéines (Captiva, Captiva NDLipids) Coût
Extraction Liquide Supportée (Chem Elut)
Complexité
Filtration
Pureté
Dilution
Page 21 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Dilution
La dilution de l‟échantillon est l‟approche la plus simple et la
plus largement utilisée
Avantages
• Rapide et Simple
Limitations
• Interférences non éliminées
• Concentration de l‟analyte diminuée
• Contamination de l‟instrument et de la colonne
• Suppression d‟ions
Page 22 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Extraction
Liquide-Liquide (LLE)
Technique mettant en oeuvre 2 solvants non miscibles
pour diviser les analytes de polarités différentes
Avantages
•
Technique peu coûteuse
•
Efficace pour éliminer sels et composés inorganiques
Limitations
•
Pas de concentration de l‟analyte, l‟échantillon doit être
reconstitué avant analyse
•
Utilisation de volumes de solvants importants (souvent chlorés)
•
Non sélectif pour les analytes solubles dans les solvants
organiques
•
Difficile à automatiser
•
Méthodes à adapter à chaque matrice (Urine vs Tissus) avec
solvants différents
Page 23 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Extraction
Liquide Supportée (SLE)
Technique mettant en oeuvre un adsorbant inorganique
hydrophile (terre de diatomée).
Avantages
•
Technique peu coûteuse
•
Efficace pour éliminer sels et composés inorganiques
•
Pas émulsion
Limitations
•
Pas de concentration de l‟analyte, l‟échantillon doit être
reconstitué avant analyse
•
Utilisation de volumes de solvants importants (souvent chlorés)
•
Non sélectif pour les analytes solubles dans les solvants
organiques
•
Méthode à adapter à chaque matrice (Urine vs Tissus) avec
solvants différents
Page 24 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Mécanisme
Headline
de la SLE
3-5‟
Page 25 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Extraction
sur Phase Solide (SPE)

Met en œuvre un adsorbant pré-rempli dans une cartouche
Avantages
•
•
•
•
Meilleure technique d‟élimination des interférences
Effet de concentration
Flexible et automatisable
Extraction de tout type de composés
Charge
Page 26 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Rinçage
Limitations
• Développement de méthode
nécessaire
• Difficile de séparer des analytes de
structure similaire
Elution
Slide Headline
Pour une extraction apolaire (C18)
 Echantillon doit être aqueux (100% idéalement)
1. Cartouche conditionnée avec solvant miscible à l‟eau (MeOH, EtOH,
AcCN, iPA, etc) puis eau ou tampon
2. Dépôt de l‟échantillon
3. Lavage à l‟eau ou tampon
4. Elution avec solvant organique (MeOH, MeCl, DCM, ACN, etc)
Page 27 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Etapes
de la Procédure SPE :
Slide
Headline
Exemple de l‟expérience du colorant vert
1&2 : conditionnement de la cartouche, puis
chargement de l‟échantillon
4 : Elution du colorant bleu
Page 28 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
3 : Rinçage – Elution de colorant Jaune
Slide Headline
Phase
Solide Dispersive (dSPE)
Homogénisation mécanique d‟un adsorbant avec un échantillon
solide suivie par une élution
Avantages
•
Excellente pour les échantillons solides
•
Differents adsorbants peuvent être utilisés
Limitations
•
Interférents souvent co-extraits
•
Peut nécessiter de larges quantités de solvants
•
Manipulation longue
•
Difficile à automatiser
•
Spécifique à chaque matrice (Solides,Tissus,Sang)
Page 29 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
QuEChERS
Procédure simple en deux étapes, idéale pour l‟extraction des matrices
alimentaires complexes
STEP1: Extraction (µextraction liq/liq : éch, solvant, sel)
STEP 2: SPE Dispersive (PSA + C18 ou C)
Avantages
•
Technique peu coûteuse et rapide
•
Excellente pour l‟élimination des pigments et chlorophylle
•
Bon niveau de pureté
•
Robuste et générique
Limitations
•
Préparation plus difficile pour les matrices très grasses (huiles)
•
Difficile à automatiser
Page 30 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Méthode
SPE – Par Où Commencer?
Quel type d‟analyte?
•
Polaire, non polaire?
•
Groupements fonctionnels, solubilité?
•
Groupe ionique présent dans l‟analyte,
pKa?
•
Composés instables en milieu acide
ou basique?
•
Méthode d‟analyse?
•
Concentration de l‟analyte dans
l‟échantillon?
Page 31 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Quel type de matrice?
•
Polaire, non polaire (huile d‟olive ou
urine?)
•
Dilution de l‟échantillon nécessaire?
(fortement organique ou ionique)
•
Taille de l‟échantillon?
•
Ajustement de pH nécessaire?
•
Filtration ou centrifugation nécessaire?
Slide
Le
Triangle
Headline
de la SPE
Considérations de la LC
•
•
Les mêmes processus physiques en
LC sont appliqués à la SPE
Analyte
La SPE est plus binaire :
– Analyte ON (rétention)
– Analyte OFF (élution)
•
Phase normale ou phase inverse?
•
Modificateur ionique?
Page 32 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Adsorbant
Matrice
Slide
BondHeadline
Elut SPE
Non-polaires
C18, C8, C2, C1
C18 avec différents taux de
carbone et traitements
EnvirElut
CH – cyclohexyl
CN-E – endcapped cyano
PH – phenyl
Polaires
Echange de Cations
PSA – amine primaire et
secondaire
NH2 - aminopropyl
DEA - diethylaminopropyl
2OH - diol
Si - silice
SCX – acide benzenesulfonique
PRS – acide propylsulfonique
CBA – acide carboxylique
Alumine – aluminum oxide
Florisil – magnesium-silice
Carbone
Carbone/NH2
Polymériques :
ENV, LMS, PPL, Focus, Nexus
Plexa
Echange d‟Anions
Mode Mixte RP/IEX
Phases spéciales
SAX – amine quaternaire
PSA – amine primaire et
secondaire
NH2 – aminopropyl
DEA – diethylaminopropyl
Certify – SCX/C8
Certify II – SAX/C8
Plexa PCX
Plexa PAX
AccuCAT
Atrazine
Mycotoxins
PAH
THC
...
Page 33 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Formats
Le plus large choix de configurations
Cartouches
Multi-Array
1mL à 60mL Straight Barrel (50mg –10g)
1mL, 2mL 96 Well
Bond Elut Jr (500mg –1g)
1.8mL Versaplate
OMIX 96
LRC (Reservoir Large Capacité)
(100-500mg)
SPEC 1mL, 2mL
Automatisation
Mega Bond Elut
Hamilton
12-150mL (2g-70g)
TomTEC
Gilson ASPEC
Gerstel
Spark Holland Prospekt
Page 34 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Dispositifs
SPE
VacElut 12, 20 and SPS 24
Manifold a vide pour cartouches SPE.
96 Puits
Manifold pour plaques Bond Elut 96 puits
1mL et pour la filtration Captiva
Page 35 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Accessoires
Adaptateurs Bond Elut
• Connection de cartouches en série
• S‟adaptent aux cartouches pour
appliquer une pression positive
Robinets de régulation du débit
• Stoppe le débit sur tout type de
cartouche “Luer”
Page 36 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide HeadlineMerci pour votre attention!
Questions?
Page 37 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Sample
Prep Tour 2011
Partie II : Applications,
Matrices Alimentaires et Environnementales
Page 38 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Applications
Agro-Alimentaire
QuEChERS: Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe
•
•
•
•
Méthode AOAC 2007.01
Méthode EN 15662
HAP et Surfactants dans le poisson
Pesticides dans le thé vert
Extraction Liquide/Liquide supportée sur solide (Chem Elut)
• Méthode Lutz-Alder
• Pesticides Acides
• Méthode d‟extraction multi-résidus de pesticides dans le miel
Page 39 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Applications
Agro-Alimentaire
SPE: Solid Phase Extraction
 Pesticides dans les produits de l‟agriculture
 Extraction de Mycotoxines
MSPD: Matrix Solid Phase Dispersion
 Résidus de pesticides dans l‟huile d‟olive
 Pesticides dans les agrumes
Page 40 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
QuEChERS
Quick, Easy, Cheap, Effective, Robust and Safe
•
Introduit en 2003: M. Anastassiades, S.J. Lehotay, D. Stajnbaher, and F.J.
Schenck, J. AOAC Int 86 (2003) 412
•
QuEChERS est une méthode simple et rapide de screening des analytes d‟intérêt
– Il ne s‟agit pas d‟une méthode de concentration
Luke method or GPC
QuEChERS
QuEChERS
Benefits!
Estimated Time to
process 6 samples
(min)
120
30
4x faster
Solvent Used (mL)
90 mL
10mL
9 x less solvent
Chlorinated Waste (mL) 30 mL
none
safer, greener,
less costly
Glassware/ specialized
equipment
None
No additional
supplies needed
Funnel, water bath,
200mL containers,
evaporator, etc.
Page 41
Page 41 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Première
Etape – Extraction/Partition
1) Echantillon
2) Standards
3) Vortex
4) ACN (1% AA)
5) Vortex
6) Sels
7) Agitation 1 min
8) Centrifugation
Page 42
Page 42 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Second
Etape – SPE Dispersive
1) Choisir d-SPE
2) Transférer
aliquot
3) Vortex 1 min
4) Centrifuge
5) Analyse
Page 43
Page 43 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Forces
des kits Agilent QuEChERS Kits
Sélection facile des kits en fonction des produits et de la matrice
Plus de 23 notes d‟application avec les QuEChERS sur www.agilent.com/sampliQ
• QuEChERS “Notebooks”: 5990-4977EN
Agilent Restricted
Page 44
Page 44 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Force
Ionique – Méthodes Tamponnées
• Méthode tamponnée AOAC
Tampon acétate fort (pH 4.8)*
• Méthode tamponnée EN
Tampon citrate de plus faible force ionique (pH 5-5.5)**
• L‟extraction tamponnée à pH 5 offre les meilleurs recouvrements
(> 70%) pour certains pesticides sensibles au pH ( e.g. pymetrozine,
imazalil, thiabendazole)
*S.J. Lehotay, K. Mastovska, A.R. Lightfield, J. AOAC Int. 88 (2005), 615-629 & 60A
** M. Anastassiades, E. Scherbaum, B. Tasdelen, D. Stajnbaher, in: H. Ohkawa, H. Miyagawa, P. W. Lee
(Eds.), Crop Protection, Public Health, Environmental Safety, Wiley-VCH, 2007, p.439.
Page 45 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Sélection
de Méthode : AOAC et EN
AOAC 2007.01
EN 15662
15 g homogenized sample, (spike)
10 gm homogenized sample, (spike)
Add 15 mL ACN (1% AA), vortex
Add 10 mL ACN, vortex
Add AOAC Extraction Salts, shake
Add EN Extraction Salts, shake
Centrifuge
Centrifuge
Transfer to 1 or 8 mL to
AOAC d-SPE tube,
Transfer 1 or 6 mL to
EN d-SPE tube
Vortex
Vortex
Centrifuge
Centrifuge
Transfer to Analysis vial
Transfer to Analysis vial
Analyse par GC/MS ou LC/MS/MS* * Requires a dilution prior to analysis
Page 46 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Choix
du kit de SPE Dispersive (d-SPE)
Quelques Bases
• MgSO4 présent dans tous les kits de SPE dispersive, pour éliminer les
traces d‟eau
• PSA* pour éliminer les acides organiques
• C18 pour éliminer les graisses et lipides
• GCB* pour éliminer pigments et chlorophylle
Le kit d-SPE universel
• 50 mg PSA, 50 mg C18, 7.5 mg GCB, 150 mg MgSO4 (2 mL)*
• 400 mg PSA, 400 mg C18, 60 mg GCB, 1200 mg MgSO4 (15 mL)*
• “Cleanest extract, for all matrices without unacceptably affecting
recoveries even for structurally planar pesticides”
(S. Lehotay: J. Chromatography A 1217 (2010), 2548-2560)
Page 47 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Qualité
du Packaging = Reproductibilité
Sels Pré-pesés dans un sachet séparé pour permettre l‟addition
des sels après le solvant d‟extraction
• Pas de réaction exothermique
• Pas de dégradation de l‟échantillon
• Meilleurs recouvrements
 Packaging résistant à l‟eau et aux UV
 Sels conditionnés sous N2 (pas sous vide)
 Facile transfert des sels dans le tube
 Informations imprimées sur le sachets
(ingrédients, référence, méthode)
Page 48
Page 48 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Astuce
: Minimiser La Réaction Exothermique
60
60
AOAC
40
30
AOAC Add Buffered Salts to
Sample
20
AOAC Sample Added to
Buffered Salt
10
EN
50
Temperature ºC
Temperature ºC
50
40
EN Add Buffer Salts to
Sample
30
20
EN Sample Added to
Bufferd Salt
10
0
0
0
10
20
30
40
50
60
0
10
Time (seconds)
20
30
40
50
60
Time (seconds)
 Augmentation de la température observée
 Environ 25 ºC pour la méthode AOAC et 10 ºC pour la méthode EN.
Page 49 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
SlideAméliorations
Les
Headline
Récentes
Homogéniseurs en Céramique SampliQ
 Réduction du temps d‟agitation à <20 secondes! (au lieu
d‟1min)
 Elimination des agglomérats de sels
 Facilite l‟homogénisation grâce à la coupe angulaire
 Contribue à l‟amélioration des recouvrements pour les
pesticides
 3 tailles : tube d‟extraction 50 mL et tube de dispersive 15 et
2 mL
Page 50
Page 50 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Astuce
: Améliorer l‟Efficacité de l‟Agitation
240
220
Réduisez le temps d‟agitation à
20 secondes
200
180
160
Percent Recovery
140
120
100
80
60
40
20
0
0
10
20
30
40
50
60
Time in Seconds of Shaking Extract with Ceramic Homogenizers
Organophosphates
Carbamates
Benzimidazoles
Neonicotinoids
Triazoles
Strobilurins
Page 51 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Anilinopyrimidines
70
QuEChERS
Extraction
Slide
Headline
Before Centrifuge
CH
no CH
Page 52 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
After Centrifuge
CH
no CH
Slidedans
Headline
HAP
le Poisson
25 ng/mL
Analytes
250 ng/mL
500 ng/mL
%Recovery
RSD (n=6)
%Recovery
RSD (n=6)
%Recovery
RSD (n=6)
80.35
3.29
96.77
4.23
98.64
1.88
95.28
2.30
103.36
2.80
101.02
2.27
92.28
2.51
101.18
2.87
100.69
2.34
95.98
2.99
105.94
2.82
105.00
1.28
100.51
3.46
104.93
2.71
103.25
1.70
107.38
3.51
105.95
3.45
105.38
1.74
113.27
3.87
105.76
3.33
103.64
1.81
113.55
3.51
103.99
3.24
102.29
1.94
129.79
3.41
101.45
3.91
100.61
3.24
116.75
4.01
98.55
4.17
95.95
5.61
131.20
3.70
98.77
4.08
98.08
3.24
139.45
2.52
99.13
3.98
95.31
4.54
125.30
3.68
95.33
3.89
96.82
1.80
Indeno[1,2,3-cd]pyrene
119.51
3.47
94.57
3.23
93.71
2.55
Dibenz[a,h]anthracene
126.35
3.54
98.55
3.50
98.85
2.24
Benzo[g,h,i]perylene
114.91
4.93
97.30
3.37
95.63
1.83
Naphthalene
Acenaphthylene
Acenaphthalene
Fluorene
Phenanthrene
Anthracene
Fluoranthene
Pyrene
Benz[a]anthracene
Chrysene
Benzo[b]fluoranthene
Benzo[k]fluoranthene
Benzo[a]pyrene
Page 53 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Pesticides
dans le Thé Vert par QuEChERS
10 ng/g
Analytes
%Recovery
RSD (n=6)
50 ng/g
250 ng/g
%Recovery
% RSD
(n=6)
%Recovery
% RSD
(n=6)
Acephate
80.5
5.4
91.7
2.9
88.9
8.2
Pymetrozine
43.1
3.0
42.2
3.4
43.4
9.8
Carbendazim
114.6
11.6
97.6
2.0
105.0
6.2
Thiabendazole
98.1
6.9
90.4
2.4
81.7
5.8
Imidacloprid
104.3
11.7
108.6
2.5
93.9
7.9
Imazalil
97.5
4.4
87.8
5.6
92.4
4.6
Propoxur
98.1
2.4
110.2
1.7
107.8
3.9
Carbaryl
89.7
11.2.14
104.9
3.3
108.1
5.2
Cyprodinil
84.9
2.1
92.5
3.7
93.9
5.5
Ethoprophos
103.4
3.1
111.2
3.2
104.9
5.7
Penconazole
108.7
2.9
94.3
4.5
89.8
3.3
Kresim-methyl
105.7
12.4
96.4
2.5
99.2
5.5
Page 54 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Pesticides
Slide
Headlinedans le Thé Vert : LC/MS/MS
MRM chromatograms of 50 ng/g fortified sample processed by EN method. Peak identification: 1. Acephate,
2. Pymetrozine, 3. Carbendazim, 4. Thiabendazole, 5. Imidacloprid, 6. Imazalil, 7. Propoxur, 8. Carbaryl, 9.
Cyprodinil, 10. Ethoprophos, 11. Penconazole, 12. Kresoxim-methyl, IS: TPP
Page 55 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline QuEChERS : Autres Matrices
Applications
Application
Literature
Veterinary Drugs (antibiotics) in animal tissues
5990-5085EN, 5990-5086EN, 59905395EN
PAHs in Fish
5990-5441EN, 5990-6668EN
Pesticides in Olive Oil
5990-5553EN
PAH‟s in Soil
5990-5452EN, 5990-6324EN
Acrylamides in Fried Food and Oil
5900-5940EN, 5990-5988EN
Pesticides in Baby Food
5990-5028EN
Pesticides in Green Tea
5990-6400EN
PCBs in Fish and Fish Oil Supplements
5990-6236EN
Universal d-SPE
5990-6558EN
Hormones in Shrimp
5990-6589EN
Pesticides in Essential Oils
5990-6432EN
Page 56 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Extraction
Liquide/Liquide sur Support Solide
Les Produits
Hydromatrix: Adsorbant à utiliser en dispersif ou pour des applications à
façon – Terre de diatomée
ChemElut: Cartouches pré-assemblées avec l‟adsorbant Hydromatrix
Avantages
• Génerale, méthode simple
• Pas d‟émulsions
• Pas besoin de verrerie
• Large type d‟analytes extraits
• Automatisable
Page 57 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Applications
Alimentaires (Lutz Alder)
Méthode Appliquée :
Matrices classiques : Concombre, citron, raisin, noix…
Page 58 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide analytes:
>100
Headline 23 Classes de Composés
Carbamates (incl. metabolites)
3,4,5-Trimethacarb (Landrin)
3-Hydroxycarbofuran
Bendiocarb
Carbaryl
Carbofuran
Desmethylformamido-pirimicarb
Desmethyl-pirimicarb
Ethiofencarb
Ethiofencarbsulfon
Ethiofencarbsulfoxid
Fenoxycarb
Furathiocarb
Methiocarb (Mercaptodimethur)
Pirimicarb
Promecarb
Propamocarb
Propoxur
Oxim-carbamates (incl. metabolites)
Aldicarb
Aldicarb-sulfoxid
Aldoxycarb (Aldicarb-sulfon)
Butocarboxim
Butocarboxim-sulfoxid
Butoxycarboxim
Methomyl
Oxamyl
Thiodicarb
Thiofanox
Thiofanox-sulfon
Thiofanox-sulfoxid
Sulfonyl ureas
Amidosulfuron
Bensulfuron-methyl
Chlorsulfuron
Cinosulfuron
Flazasulfuron
Iodosulfuron
Metsulfuron-methyl
Nicosulfuron
Primisulfuron-methyl
Prosulfuron
Rimsulfuron
Thifensulfuron-methyl
Triasulfuron
Tribenuron-methyl
Triflusulfuron-methyl
Benzoyl ureas
Flufenoxuron
Diflubenzuron
Teflubenzuron
Hexaflumuron
Triflumuron
Oxyalkanoic acids
2,4-D
MCPA
Mecoprop-P
Fluazifop-P-butyl
Haloxyfop-ethoxyethyl
Haloxyfop-methyl
Quizalofop-ethyl
Organophosphates
Acephate
Demeton-S-methyl
Demeton-S-methyl-sulfon
Dimethoat
Fosthiazate
Methamidophos
Monocrotophos
Omethoat
Oxydemeton-methyl
Vamidothion
Benzimidazoles
5-Hydroxythiabendazol
Carbendazim
Thiabendazol
Thiophanat-methyl
Urea herbicides
Diuron
Isoproturon
Linuron
Neonicotinoids
Imidacloprid
Thiacloprid
Work performed by Lutz Alder and Jeannette Klein, BgVV Berlin
Page 59 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Other (14 substance classes)
Atrazin
Azoxystrobin
Bromoxynil
Clethodim
Clethodim-imin-sulfon
Clethodim-imin-sulfoxid
Clethodim-sulfon
5-Hydroxy-clethodim-sulfon
Clethodim-sulfoxid
Cyprodinil
Daminozid
Desmedipham
Fenhexamid
Fenpropiomorph
Florasulam
Fludioxonil
Imazalil
Ioxynil
Iprovalicarb
Isoxaflutole
Metalaxyl
Metamitron
Metolachlor
Phenmedipham
Pymetrozin
Pyridat
Pyridat Metabolit
Pyrimethanil
Quinmerac
Spiroxamine
Tebuconazol
Tebufenozid
Slide
Headline
Recouvrements
>200%
180-200%
160-180%
140-160%
120-140%
100-120%
80-100%
60-80%
40-60%
20-40%
0-20%
0
 Excellents recouvrements et faibles RSD
 Seuls deux composés très acides ne sont pas extraits
Work performed by Lutz Alder and Jeannette Klein, BgVV Berlin
Page 60 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
2
1
2
0
1
>200%
0
180-200%
0
10
160-180%
0
8
140-160%
0
0
4
120-140%
2
1
10
100-120%
0
16
12
80-100%
9
10
21
20
60-80%
16
15
40-60%
20
30
20-40%
30
40
40
0-20%
33
n.m.
33
Recoveries of 109 pesticides Lemon with
ChemElut at 0.01 mg/kg
number of pesticides
40
n.m.
number of pesticides
Recoveries of 109 pesticides
Lemon without cleanup at 0.01mg/kg
Slide Headline
Analyse
Multi-résidus de Pesticides dans le Miel
Développement et validation de 17 pesticides et métabolites
de différentes classes chimiques
Insecticides:
Carbofuran (Ca), Methiocarb (Mh), Pirimicarb (Pi), Dimethoate (Dm), Fipronil
(Fi), Imidacloprid (Im)
Herbicides:
Amidosulfuron (Am), Rimsulfuron (Ri), Atrazine (At), Simazine (Si), Chloroturon
(Ch), Linuron (Li), Isoxaflutole (Is), Metosulam (Mo)
Fongicides: Diethofencarb (De)
Métabolites: Methiocarb sulfoxide (Mhs), 2-Hydroxytertbutylazine (TOH)
Page 61 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headlinede la LLE par la SLE
Amélioration
Application N° SI-01002
Comparison des
recouvrements de pesticides
SLE sur Chem Elut et LLE.
14 des 17 composés
présentent un meilleur
recouvrement avec la SLE.
3 composés sont détéctés
seulement en SLE
Page 62 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Mycotoxines
Mycotoxines :
Les mycotoxines sont des toxines produites par diverses espèces de
champignons microscopiques tel que les moisissures.
Les plus grandes classes de mycotoxines sont les suivantes:
 Aflatoxines B1,B2, G1 and G2 (Aspergillus)
 Ochratoxine A (Penicillium verrucosum)
 Patuline (autre Penicillium)
 Fumonisines
 Trichothecenes: (e.g. Deoxynivalenol, HT-2)
 Zearalenone et ses métabolites
Page 63 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Fusarium
Slide Headline
Extraction
des Mycotoxines
Techniques Classiques:
Colonnes d‟Immunoaffinité (IAC)
Extractions très sélectives avec de hauts recouvrements mais
chaque toxine est séparée par une colonne.
Cartouches Carbone-Alumine
Recouvrements des analytes polaires compromis avec cette
approche.
Page 64 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
BondHeadline
Elut Mycotoxin
Une approche SPE
• Adsorbant SPE pour l‟élimination de la toxine
Fusarium dans les céréales
• SPE basée sur le mécanisme d‟échange d‟ion
• Une cartouche une méthode pour 12 Trichothecenes
plus Zearalenone type A et B
• Excellente purification : les mycotoxines sont
éluées et les impuretés retenues sur l‟adsorbant.
Page 65 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Méthodes
Simples
Notes d‟Application 000295 et SI-01075

Céréales: 25g d‟échantillon broyé dans 100mL acetonitrile/Eau (80/20; v/v),
mixer 3 minutes. Filtrer.

Vin et Bière: Dégazer et Filtrer
Puis :
•
Charger 4 mL du Filtrat dans une cartouche Bond Elut Mycotoxin.
•
Evaporer 2 mL de l‟éluat à 50 C sous courant d‟azote.
•
Reconstituer dans 0.5mL acetonitrile/eau (20/80; v/v). Injecter 10µL en
LC/MS/MS.
Page 66 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline Bière et Vin
Recouvrements:
Page 67 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Matrix
Solid Phase Dispersion - MSPD
 Disperse la matrice solide (ex : aliments, tissus ou matrices biologiques)
et interagit directement avec l‟adsorbant (ex: C18)
 Recouvrements 80-100% pour les pesticides dans les aliments (ex.
boeuf, légumes, nourriture pour bébé)
 Application pour 50 médicaments dans le lait, le poisson, le porc, et la
nourriture animale
 Simple en manuel, difficile à automatiser
Page 68 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Matrix
Solid Phase Dispersion
Phases Classiques:
 Bondesil NH2 & C18
 Bond Elut Florisil
Original technique developed by Dr. Steve
Barker, LSU, Baton Rouge
Page 69 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Résidus
de Pesticides dans l‟Huile d‟Olive par MSPD
Procédure LLE
Etape MSPD
Weigh 5g of olive oil
Mix and grind with 2g Bond Elut NH2
Dissolve in 15mL Pet ether
Add to top of 2g Bond Elut Fl Cartridge
Liquid Liquid Extraction
Pet Ether/25mL ACN Partition
Elute 2x5mL ACN
Freeze ACN
overnight (-20oC
Aliquot 5mL
Concentrate to 1mL
Concentrate to
dryness
Reconstitite in 1mL Hexane
INJECT into GC
DGCCRF Laboratory, 205 rue de la croix verte , Montpellier CEDEX 5 , 34196 , FRANCE
Page 70 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Résidues
de Pesticides dans l‟Huile d‟Olive par MSPD
Taux de graisse au cours du processus
STEPS
Sampling
Aliquot
Post
Post
Extraction Freezing
Post
MSPD
FAT (mg)
5000
1000
9
<0.2
4
Fat level during the process

Très efficace pour l‟extraction des matrices grasses

Méthode Simple

Recouvrements élevés

Reproductible
Page 71 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Analyse
de Pesticides dans les Agrumes par MSPD
Bupirimate
Hexaflumuron
Tebufenpyrad
Buprofezin
Pyriproxyfen
Carla Soler, et.al, Journal of Chromatography A, 1088 (2005)
Page 72 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Fluvalinate
Slide
Headline
Analyse
de Pesticides dans les Agrumes par MSPD
Procédure MSPD:
1. Mixer 0.5 g d‟échantillon avec 0.5 g de silice C18 durant 5 min au pilon.
2. Introduire la mixture dans une cartouche.
3. Eluer avec 10 ml de dichlorométhane-méthanol (80:20, v/v).
4. Collecter l‟éluat et concentrer sous courant d‟azote à 0.5 ml.
5. Injecter 5 µl de l‟extrait en LC.
Carla Soler, et.al, Journal of Chromatography A, 1088 (2005)
Page 73 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Analyse
de Pesticides dans les Agrumes par MSPD
Responses observées en MSPD
Carla Soler, et.al, Journal of Chromatography A, 1088 (2005)
Page 74 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Café!
Page 75 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Applications
Tests Environnementaux
SPE: Extraction sur Phase Solide
• SPE Polymerique, avantages et bénéfices pour l‟analyse de l‟eau
• Analyse Multi-résidus pour l‟eau potable
• Extraction de HAP dans l‟eau potable
• COV dans l‟eau potable - EPA 500 series
• Extraction de résidus organiques polaires
• Résidus explosifs dans les eaux souterraines
• Organophosphates
Contaminants Emergants
• Mélamine dans le lait et la viande
• Résidus de médicaments dans les eaux de surface
Page 76 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
SlidePolymérique
SPE
Headline
: Avantages et Bénéfices
Avantages des résines polymériques par rapport aux
supports en silice :
 Stabilité sur une large gamme de pH – 0 à 14
 Résistance au séchage après conditionnement – Pas de diminution
des recouvrements
 Capacité plus importante – Quantité de phase nécessaire plus faible
minimise la consommation de solvant et augmente les débits
 Chargement 10-12% de la quantité de sorbant
Page 77 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Avantages
pour les Analyses Environnementales
Slide
Headline
et Alimentaires
 Analyses Multi-suite nécéssitant une capacité importante
 Distribution de particules uniforme pour un débit
reproductible
 Méthodes simples et génériques.
 Méthodes économiques.
Page 78 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
La Famille
Bond Elut PLEXA
Bond Elut Plexa
Polymère Non-polaire avec une surface hydroxylée unique pour
l‟extraction des composés acides, basiques et neutres
Bond Elut Plexa PCX
Basé sur le support Plexa avec une fonctionnalité d„échange de cation
fort, dédiée à l„extraction de composés basiques sur une large gamme
de pKa et logP
Nouveau!
Bond Elut Plexa PAX
Basé sur le support Plexa, avec une fonctionnalité d„échange d„anion
fort, pour l„extraction de composés acides sur une large gamme de
pKa et logP
Page 79 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Comment
Plexa Fonctionne
Echantillon
Rinçage
Water Rich Hydrophilic component
allows excellent phase transfer of
analytes into the polymer core
Analytes remain tightly bound in
the hydrophobic core.
Elution
Specially engineered
pore structure allows
excellent mass transfer
out of polymer
Analyte of
interest
Pores
Hydrophobic
core
Large endogenous
proteins do not bind to the
surface of the polymer
and cannot access pore
structure.
Page 80 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Interferences ( lipids and
proteins) washed away
without leaching into the
analytes of interest
Clean extract
with high
recovery
Slide
Headline
Comment
Plexa PCX Fonctionne
Echantillon
Water-rich Hydrophilic component
allows excellent phase transfer of
analytes to the cation exchange
sites within the polymer.
Rinçage
Analytes remain tightly bound to
the polymer through strong ionic
interactions
Elution
Change in pH allows the
elution of analytes from
the strong cation
exchange sites
Analyte of
interest
Large endogenous
proteins cannot access
pore structure.
Page 81 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Interferences can be
washed away without the
leaching of basic analytes
Clean extract
with high
recovery
Slide Headline
Plexa
– Support Polymérique Unique
• Ligands hydroxylés à la surface en
dehors des pores.
• S/DVB dans les pores
Polar and non polar
drugs bind in the
SDVB hydrophobic
end of the pore
structure
Page 82 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline Plexa Pré-développées
Les Méthodes
Bases/Neutrals
Condition:
500 μL MeOH
500 μL water
Apply sample: Aqueous sample
w/ 2% NH4OH
Wash:
Elute:
Acids
Condition:
500 μL MeOH
500 μL water
Apply sample:
Aqueous sample
w/ 1% HCO2H
Wash:
500 μL 5% MeOH
Elute:
500 μL MeOH
500 μL 5% MeOH
500 μL MeOH
Methods for 30 mg Plexa in 96 well plate
Page 83 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Méthode
Plexa PCX
Bases
Condition:
500 μL MeOH
500 μL water
Apply sample:
Aqueous sample with
2% phosphoric acid
Acidic wash:
500 µL 2% formic acid
Neutral wash:
500 µL MeOH:ACN (1:1 v/v)
Elute:
500 µL 5% NH3 in
MeOH:ACN (1:1)
Methods for 30 mg Plexa in 96 well plate
Page 84 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Astuce
Headline
: Maximisez les Recouvrements
Composition du solvant d‟élution
 La plupart des méthodes recommendent
100% MeOH ou 5% NH3 dans MeOH (CX)
 Sur Plexa - 50:50 MeOH/ACN
 La combinaision de solvants polaire
protique et dipolaire casse les interactions
entre analyte et Adsorbant SPE
Page 85 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Extraction
Multiple
Une seule méthode SPE pour extraire les Triazines, Pesticides
chlorés et HAP dans l‟eau potable avec une seule cartouche.
Les données proviennent de la méthode developpée par Laboratori
de l‟Agencia de Salut Publica de Barcelona.
La procédure SPE Bond Elut Plexa est validée dans ce laboratoire
en analyse de routine.
Page 86 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide des
Liste
Headline
Composés
OCPs
Triazines
Desispropylatrazine
Desethylatrazine
Cianazine
Simazine
Atrazine
Terbutrine
Propazine
Tertbutylazine
Alachlor
Aldrin
DDD o-p‟
DDD p-p‟
DDE o-p‟
DDE p-p‟
DDT o-p‟
DDT p-p‟
Dieldrin
Endosulfan (I + II)
Endrin
HCH ( + + + )
Heptachloro Epoxy
Hexachloroceno
Page 87 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
PAHs
Benzo(a)anthracene
Benzo(b)anthracene
Benzo(k)anthracene
Benzo(a)pyrene
Dibenzo(a,h) anthracene
Benzo (ghi) perylene
Indeno (1,2,3-cd) pyrene
Chrysene
Slide Headline
Méthode
d‟Extraction Multiple Automatisée
Méthode SPE sur Bond Elut Plexa 200mg/6mL
Etapes
Méthode
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Wash with 2mL MeOH
Rinse with 5mL EtOAc
Rinse with 5mL DCM
Condition with 10mL MeOH
Condition with 10mL H2O
Load 800mL water sample
dry with air for 10 minutes
Soak and collect 2.5mL fraction using EtOAc
Collect 1mL fraction using EtOAc
Soak and collect 2.5mL fraction using DCM
Collect 1mL fraction using DCM
HPLC-FL/UV for determination of PAHs
GC/MS for Chloro-Pesticides
LC-MS/MS for Triazines
Page 88 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Débits
40 ml/min
40
40
40
40
20
15
5
5
5
5
Slide Headline
Recouvrements
Chlorpesticide
160
140
% Recovery
120
100
80
60
40
20
0
0.1µg/L
0.04µg/L
IS Hexachlorbenzene C13
Page 89 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
0.02µg/L
% Recovery
0.1µg/L
0.04µg/L 0.02µg/L
HCH-alfa
HCH-alfa
84
81,83
82,17
HCH-beta
HCH-beta
89,5
104,5
104,67
Hexachlorbenzole
Hexachlorbenzole
53,13
56,83
56,67
HCH-gamma
HCH-gamma
83,13
95
93
HCH-delta
HCH-delta
89,25
101
103,67
Heptachloro
Heptachloro
70,38
73,17
70,67
Alachlor
Alachlor
101,25
120
118,33
Aldrin
Aldrin
62,25
71
69,67
Heptachloro Epoxido
Heptachloro
Epoxido
92,13
109
104,17
DDE o-p'
DDE
o-p'
68,75
78,5
81,67
Endosulfan I I
Endosulfan
96
116,5
105,33
Dieldrin
Dieldrin
97,88
117,5
125
DDE p-p'
DDE
p-p'
67,75
79,33
82,33
DDD o-p'
DDD
o-p'
92,88
114,67
111,67
Endrin
Endrin
99,63
124,5
122,5
Endosulfan IIII
Endosulfan
87,75
86,33
98,5
DDD p-p'
DDD
p-p'-1
-1
105,13
128,17
115,67
DDT o-p'-2
DDT
o-p'-2
78,88
95
96,67
Endosulfan
sulfato
111,5
134
133
Endosulfan sulfato
DDT
p-p'
88,75
109,17
109,83
DDT p-p'
Slide Headline
Autres
Applications - Eau
HAP dans l‟eau potable
EPA Method 528: Phenols dans l‟eau potable
Bond Elut PPL et Bond Elut Plexa
EPA Method 500 Series: COV dans l‟eau potable
Bond Elut C18 est une phase Génerique pour 525.2
Page 90 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Détermination
des 24 HAP dans l„eau potable par Fast HPLC-FLD/UV
Slide Headline
Page 91 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
SlideHaut
SPE
Headline
Débit SDVB : Bond Elut ENV
Bond Elut ENV, Polymère PS/DVB, est dédié à l‟extraction des
résidus organiques polaires
 Excellente extraction des molécules polaires
 Débit Rapide
 Particules sphériques 125 μm – meilleure productivité
 Herbicides, Résidus expolsifs
Page 92 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Unique
Sélectivité SPE: Bond Elut PPL
Bond Elut PPL, un polymère PS/DVB, possède une sélectivité unique
pour les analytes très polaires.
 Excellente extraction des molécules polaires
 Légèrement plus hydrophile que le SDVB
 Fonctionne pour EPA 528
 SI-02094 organophosphates dans une eau de lac (ci-dessous)
Page 93 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline et Polluants Emergeants
Contaminants
Résidus médicamenteux dans les eaux municipales
Mélamine dans le lait
Page 94 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Headline
Détection
de la Mélamine

La Mélamine est ajoutée dans les aliments pour augmenter le taux de
protéines

La FDA a délivré des consignes de tests pour la détection de mélamine
et produits secondaires comme l‟acide cyanurique

Plusieurs fabricants souhaitent une méthode pour les composés tels que
l‟ammeline et l‟ammelide

Bond Elut Plexa et Bond Elut Plexa PCX ont montré leur capacité à
extraire la mélamine et autre composés dans le lait et les produits
infantiles
Page 95 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Purification
avec Bond Elut Plexa PCX
 Bond Elut Plexa PCX utilisée en
purification: les interférents sont retenus
et les analytes polaires sont élués
 Analyse de la mélamine, ammeline,
acide cyanurique et ammelide en accord
avec la méthode FDA
 La procédure sur Plexa PCX permet
d‟extraire ces 4 composés
 Lait et produits infantiles
Bond Elut Plexa PCX, 200mg, 3mL cartridge, P/N
12109603
Page 96 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Résultats
de l‟App 01916
Résultats :
 Excellente linéarité de 0.25 – 5.0
µg/g
 Les consignes FDA de rapport
S/N à 0.25 µg/g sont respectées
(achieved 16:1, required > 5:1)
 Bons recouvrements et RSD
 Applicable aux laits en poudre et
laits frais
Page 97 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Applications
: Mélamine
App Note 01916:
Melamine, cyanuric acid, ammelide, ammeline Milk, LC/MS/MS (320), Plexa, Polaris
NH4 (HILIC style).
App Note 01841:
Melamine, milk, Plexa PCX, LC/MS/MS (320), C8 Pursuit, 1 ppb
App Note 01842
Melamine, milk, GC/MS/MS (220 Ion Trap), VF-5ms, Plexa PCX
App Note 01846:
Melamine, cyanuric acid, ammelide, ammeline, milk and pet food, GC/MS/MS (220
Ion Trap), Plexa PCX, VF-Xms with EZ-Guard.
App Note 01915:
Melamine, cyanuric acid, ammelide, ammeline, milk, Plexa, Polaris NH4 (HILIC style)
Page 98 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Développements de Méthodes SPE
Trucs et Astuces
Page 99 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Mécanismes
de la SPE
Hydrophobique
– Phases Non-polaires (phase inverse)
Polaire
– Phases Polaires (phase normale)
Electrostatique
– Phase Echangeuses d‟Ions
Mode Mixte
Cationique ou anionique + phase inverse
Page 100 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Polarité
et Charge
La présence d‟une charge augmente fortement la polarité
-
Une fois chargée, les propriétés de rétention sont fortement
modifiées
Moins Polaire
Beaucoup Polaire
En SPE nous utilisons cette charge pour des extractions plus sélective
sur phase ionique
Page 101 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Définition
du pKa
Pour des raisons pratiques nous le définissons comme :
•
Le pH auquel 50% des composés sont neutres
•
Le pH auquel 50% des composés sont ionisés
Même règle pour les acides et les bases
Page 102 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headlinedu pH
L‟importance
Si pKa = 9 et pH = 9
50%
50%
NH3+
NH2
CO2H
Seules 50% des molécules sont ionisées
Page 103 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
CO2H
Slide
Headlinedu pH
L‟importance
Si pKa = 9 et le pH = 11
100%
0%
NH3+
NH2
CO2H
CO2H
Toutes les molécules sont sous forme neutre et peuvent être
retenues sur phase inverse
Page 104 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headlinedu pH
L‟importance
Si pKa = 9 et pH = 7
0%
100%
NH3+
NH2
CO2H
CO2H
Les molécules sont ionisées, et seront éluées sur phase inverse
Page 105 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Le
pHHeadline
et la Règle de 2
Pour rendre 100% des molécules chargées ou 100%
neutres, on augmente ou baisse le pH de deux
unités par rapport au pKa
•
Maximise les recouvrements
•
Important pour les mécanismes de phase inverse et
d‟échange d‟ion
•
Assure la stabilité de la méthode
Page 106 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide HeadlinePratique Trucs et Astuces
Notre équipe européenne de support technique reçoit des demandes
d‟aide pour le troubleshooting.
Voici les problèmes les plus courants :
1. Faibles recouvrements
2. Mauvais débit
3. Perte d‟analyte
4. Extraits sales
Page 107 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Conditionnement
de l‟Adsorbant
Le conditionnement de la phase est vital pour obtenir de
bonnes performances en SPE
•
Une phase non conditionnée donne de mauvais recouvrements et diminue la
vitesse de passage des solvants.
•
Particulièrement pour les échantillons biologiques où la précipitation de
l‟échantillon peut avoir lieu sur un milieu sec.
•
Phénomène de Bouchage
SPE Silice
Recommendations
SPE Polymerique
>2 bed volumes of low viscosity organic
solvent (e.g. MeOH)
>2 bed volumes of low viscosity organic
solvent (e.g. MeOH)
Condition slowly under minimal vacuum
<2” Hg
Wash with aqueous solution prior to
sample load
Allow time for equilibration (30-60s)
More tolerant to accidental drying
Page 108 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Mauvais
débit – Application du Vide
Le contrôle du vide et de l‟expérience
 Les débits doivent être suffisament lents
(2-5 mmHg)
 Charger l‟échantillon à 2-3 mL/min. Idem
pour les étapes de rinçage et d‟élution
 Les cartouches d‟échange d‟ion sont
particulièrement sensibles aux débits trop
élevés (cassent les interactions)
Page 109 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Mauvais
Recouvrements - Capacité
Il est important de comprendre la capacité de la phase SPE
qu‟on utilise
Type de phase
Capacité
Silice (Polaire ou Non-Polaire)
1-4% de la masse d‟adsorbant
Silice (Echange d‟ion)
< 1.0 mmol/g
Polymerique
10 -12% de la masse d‟adsorbant
 Permet une bonne interaction analyte/adsorbant
 La capacité ne distingue pas analytes et interférents!
 Connaissez-vous la quantité d‟interférents présents dans l‟échantillon?
 Monter deux cartouches en série peut aider à déterminer si il existe un
problème de capacité.
Page 110 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Mauvais
Recouvrements - Elution
L‟optimisation du volume d‟élution est simple
 Les volumes d‟élution peuvent être
minimisés et les recouvrements
maximisés si l‟élution est faite en
aliquotes.
A
B
 4 aliquotes de 50uL donnent de
meilleurs résultats que 200uL en une
seule fois. 2 x 100uL est une solution
pratique.
A: 4 x 50 uL Aliquotes
B: 1 x 200 uL Aliquote
Page 111 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
Extraits
toujours Sales
Des extraits sales sont souvent le reflet d‟une
méthode SPE peu sélective et pas assez optimisée
 La phase est trop universelle (e.g. C18)
 Le schéma d‟extraction n‟est pas suffisament sélectif
 Réduire la concentration du solvant d‟élution
 La phase de rinçage n‟est pas efficace, augmenter
concentration en solvant organique
 Suppression d‟ion – changer de phase ou de rinçage
 Essayer la SPE polymérique ou en mode mixte
 Pré-rincer la cartouche avec le solvant d‟élution
Page 112 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide
Un
Doute?
Headline
Analyser les Fractions
Si vous charger x ng d‟un échantillon sur la cartouche, il faut savoir
dans quelle fraction est élué l‟analyte,
1. Collecter ce qui sort de la cartouche lors du chargement de
l‟échantillon
2. Collecter les fractions de rinçage
3. Collecter les fractions d‟élution
Il sera facile de calculer la quantité de composés restés sur la cartouche
Page 113 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Headline
TRICK:
Les Outils
Website and Vidéos :
http://www.chem.agilent.com/en-US/Products/columnssupplies/samplepreparation/Pages/QuEChERSappnotes.aspx
Page 114 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide Plus
Pour
Headline
d‟Informations
ScanView : www.agilent.com/chem/Scanview
Page 115 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011
Slide HeadlineMerci pour votre Attention!
Questions?
Page 116 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011