Transcript Candida albicans.

Natalia Peralta – Bioquímica
Parasitología y Micología
UNSL
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Candida albicans
Candida parapsilosis
Candida tropicalis
Candida glabrata
Candida krusei
Candida guilliermondii
Cryptococcus neoformans
Trichosporon spp.
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Cuando se observa el desarrollo de una
colonia sobre cualquiera de los tubos del
primocultivo, se procede a identificar el
aislamiento.
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El primer paso en el estudio de una
levadura es la obtención de un cultivo
puro a partir del cual se puedan iniciar los
estudios sistemáticos de sus
características morfológicas, fisiológicas
y sexuales bajo condiciones
estandarizadas.
Colonia cremosa de color
blanco amarillento,
lustrosa, poco elevada y
de bordes bien definidos.

La identificación puede variar desde unos
pocos test simples, para identificación
presuntiva de Cándida albicans y
Cryptococcus neoformans a una gran
variedad de pruebas necesarias para
identificar a todas las levaduras comúnmente
aisladas en los laboratorios de micología.
1- Prueba de formación de tubo germinativo por Candida albicans.
2- Prueba de formación de Clamidosporas por Candida albicans.
3- Agar semillas de girasol para diferenciación de Cryptococcus neoformans.
4- Prueba de la producción de ureasa para Cryptococcus neoformans.
5- Crecimiento a 28 º C y 37 º C.
6- Crecimiento en extracto de malta para estudio micromorfológico.
7- Cultivo en lámina en agar morfología (Difco) para estudio micromorfológico.
8- Crecimiento en agar morfología (Difco) para macromorfología.
9 - Ensayo de asimilación de Glucosa, Galactosa, L-Sorbosa, Celobiosa,
Trehalosa, Sacarosa, Maltosa, Lactosa, Melibiosa, Rafinosa, Melezitosa, DXilosa, L-arabinosa, D-ribosa, D-manitol, ácido cítrico, eritritol y m-Inositol.
10 - Ensayo de asimilación de nitrato de potasio y peptona.
11 - Ensayo de fermentación de Glucosa, Sacarosa, Galactosa, Maltosa,
Trehalosa y Lactosa.
12 - Crecimiento en medio libre de vitaminas.
13 - Producción de ascosporas.
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Permiten arribar a la identificación presuntiva:
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Chromagar Candida
Chromagar ID
Permiten la identificación confirmatoria:
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ID 32C
API 20C
Vitek
Fungichrom
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Yeast Star
Auxacolor
RapID Yeast Plus system
Algoritmo de
identificación
presuntiva
Prueba de formación de tubo germinativo
- Prueba más confiable para identificar presuntivamente
a Candida albicans.
- Procedimiento: Realizar suspensión ligera de un cultivo
de 24 h de la cepa en estudio en 0,5 ml de suero bovino.
Tubo germinativo
• El tubo germinal
es una extensión
filamentosa de la
levadura, sin
estrechamiento en
su origen cuyo
ancho suele ser
la mitad de la célula progenitora y su longitud tres o cuatro
veces mayor que la célula madre.
• Existe un 10% de falsos positivos y 10% de falsos
negativos.
• Influye la experiencia del operador.
La estructura A
corresponde a un
verdadero tubo
germinativo
La estructura B es un
falso positivo
Observación de la Micromorfología
-
Se debe realizar siempre, ya sea para la
identificación presuntiva como para la identificación
completa.
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Se puede realizar en EXTRACTO DE MALTA
LÍQUIDO,
para
observación
de
estructuras
que
caracterizan
a
vegetativa.
las
la
principales
reproducción
-
Se puede realizar en AGAR HARINA DE MAÍZ, que
permite
la
observación
de
la
disposición
de
las
estructuras y además, en el caso de C. albicans, se puede
ver la formación de clamidoconidias.
C. albicans:
Clamidosconidias y
disposición de
blastoconidias y
pseudomicelio.
Siembra en un agar cromogénico
- Especialmente CHROMagar Candida que permite
identificar:
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C. albicans (verde)
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C. tropicalis (azul)
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C. krusei (rosa seca)
Prueba de ureasa
(Agar urea de Christensen)
- C. neoformans y otros Cryptococcus spp. e incluso
otras levaduras producen ureasa. C. albicans y otras
especies del género Candida no la producen.
- El medio de urea que se usa contiene rojo de fenol,
que vira al color rojo cuando se hidroliza la urea y se
libera amonio alcalinizando el medio de cultivo.
Agar semillas de girasol
- Para identificación de
C. neoformans .
- C. neoformans produce un pigmento marrón en el
agar semillas de girasol a temperatura ambiente debido
a la actividad fenoloxidasa localizada en la pared celular
de este hongo. Ninguna otra especie de este Género, ni
otras levaduras, poseen esta propiedad.
Prueba de asimilación de trehalosa
- Para identificar presuntivamente a Candida
glabrata, debido a que fermenta y asimila la
trehalosa. Sin embargo, otras levaduras también
fermentan la trehalosa, tal es el caso de Candida
tropicalis, por tal motivo deberá basarse en la
MICROMORFOLOGÍA para la utilización de esta
prueba.
Los métodos que existen actualmente en el
mercado son los siguientes:
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ID 32C
API 20C
VITEK YBC system (bioMérieux-Vitek)
VITEK 2 System
Fungichrom
Yeast Star
Auxacolor
RapID Yeast Plus system
• Método más comúnmente usado.
• No pudieron ser identificadas:
C.albicans, C.guilliermondii,
C.neoformans, Rhodotorula spp y
S.cerevisiae.
• Mejor identificación de cepas
atípicas.
• Tira de plástico con 32 pocillos con
diferente sustratos deshidratados.
• Lectura a las 48 hs (T° 30°C).
• Lectura visualmente . Crecimiento:
Turbidez en el pocillo.
• Resultados: Biocódigo numérico de 8
dígitos que permite la identificación a
través de un manual de códigos.
• La identificación levaduras se basa en la
presencia o ausencia de ciertas enzimas, que se
visualiza mediante reacciones colorimétricas.
• La actividad enzimática se revela con: 1.
Hidrólisis de sustratos cromogénicos. 2.
Asimilación de sustratos naturales. 3. Oxidación
de sustratos sintéticos (fenoloxidasa).
• Tira de plástico con 16 pocillos con los
sustratos.
• Se prepara un inóculo y se siembran dos gotas
en cada una de las celdas.
• Se incuba 24 o 48 horas a30ºC .
• Lectura: Cambio de color.
• Interpretación de resultados: a través de un
sistema de códigos y utilización de una tabla.