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Au laboratoire de
parasitologie !
La technique de filtration
pour le dépistage de la dirofilariose
Dre Brigitte Guay, dmv, M.Sc.
Professeur
Collège Laflèche de Trois-Rivières
Introduction
• Pourquoi faire un Difil-Test ?
–
–
–
Pour aider au diagnostic de la
dirofilariose
Pour faire du dépistage
Pour vérifier le bon fonctionnement du
programme de prévention contre le ver
du cœur
TECHNIQUE DE FILTRATION
• Technique encore à privilégier au Québec
en clinique vétérinaire pour le dépistage du
ver du cœur.
• La difficulté de cette technique réside
dans la capacité du technicien à
reconnaître correctement un microfilaire
de Dirofilaria immitis.
• Limites de la technique:
– Ne détecte pas les infections amicrofilarémiques,
aussi appelées infections occultes.
– Limite humaine : la sensibilité diminue après l’examen
de plus de 10 lames de suite.
Filtration du sang pour la recherche de
microfilaires (Difil-Test™) : la technique en
images
1. Matériel
Échantillon sanguin dans un tube Vacutainer
Béchers ou
verres de carton
Solution lysante
lames
lamelles
Pince
Colorant
Seringue 10 ml
Support pour filtre
Aiguille 20G
Boîte de filtres
Filtration du sang
La technique en images
2. La préparation de l’échantillon
2.1 Préparer la seringue
–
Bien visser l’aiguille à la seringue
Filtration du sang
La technique en images
2. La préparation de l’échantillon
2.2 Homogénéiser l’échantillon sanguin
–
–
Bien mélanger l’échantillon en basculant le
tube à quelques reprises
Immédiatement avant le prélèvement avec la
seringue et aiguille
Tube avec anticoagulant (EDTA).
Notez le bouchon couleur lavande.
Filtration du sang
La technique en images
2. La préparation de l’échantillon
2.3 Prélever l’échantillon sanguin (1 ml)
–
–
1 ml
–
Rétablir la
pression dans le
tube si nécessaire
(ou, injecter 1 ml
d’air)
Insérer l’aiguille
au niveau de la
zone centrale du
bouchon
Tirer sur le piston
Filtration du sang
La technique en images
2. La préparation de l’échantillon
2.4 Essuyer l’embout de la seringue
Compresse de gaze, KimWipe ou morceau d’essuie-tout
Filtration du sang
La technique en images
2. La préparation de l’échantillon
2.5 Prélever la solution lysante (~ 9 ml)
On tire sur le piston pour aspirer la solution lysante (NE PAS POUSSER LE PISTON)
Filtration du sang
La technique en images
2. La préparation de l’échantillon
7. Centrifuger
2.6 Brasser le tout pour bien lyser les cellules
sanguines
D’abord, ajouter de l’air (~ 1 ml)
Basculer de 180° plusieurs fois (la bulle va d’un
bout à l’autre de la seringue)
Filtration du sang
La technique en images
3. L’installation du filtre
3
1
2
Le support a 3 parties
Le filtre est pris avec une pince
Disque de papier bulle pour
maintenir les filtres en place
Papier bleu séparateur
Filtration du sang
La technique en images
3. L’installation du filtre (suite)
• Insérer le filtre (surface luisante sur le dessus)
• Placer le joint d’étanchéité sur le filtre
• Bien visser
Filtration du sang
La technique en images
4. Filtrer l’échantillon
• Visser la seringue au support à filtre
• Pousser le piston afin de filtrer l’échantillon
• Le filtrat est rejeté dans un évier ou un bécher
Bien vérifier au départ qu’il n’y a pas de fuites
aux endroits indiqués par les flèches noires.
Filtration du sang
La technique en images
5. Rincer avec de l’eau du robinet
Aspirer l’eau
en tirant le
piston
Séparer d’abord la seringue
et le support à filtre
Reconnecter la
seringue et
pousser le piston
Recommencer l’étape 5 pour enlever le surplus de liquide, en poussant 2-3 ml d’air
(facultatif).
Filtration du sang
La technique en images
6. Transférer le filtre sur la lame
Enlever le joint
de caoutchouc
Séparer d’abord la seringue
et le support à filtre
À l’aide de la pince, glisser le filtre, SANS LE
RETOURNER, pour le transférer sur la lame
Filtration du sang
La technique en images
7. Colorer et placer la lamelle
a) Ajouter une goutte de colorant
b) Placer la lamelle
Essuyer le dessous de la lame si nécessaire
c) S’assurer d’un bon contact lame-lamelle
(le colorant s’étale sur toute la surface)
d) Laisser agir 30 sec
Filtration du sang
La technique en images
8. Parcourir la lamelle (filtre) au microscope
La lame est prête à être
examinée au microscope,
au grandissement total de
100X.