Transcript Nessun titolo diapositiva - Tor Vergata
Siti attivi del ribosoma
RNA messaggero
I poliribosomi (polisomi)
La traduzione (sintesi proteica)
Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A.
Copyright © 2006
La reazione di peptidil-trasferasi
Amminoacil-tRNA occupano i siti A e P
Il polipeptide nascente è trasferito
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Fasi della traduzione
Fasi della traduzione
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Inizio della traduzione nei procarioti
Fattori di inzio in E.coli:
•IF1 •IF2 •IF3
(IF = Initiation Factor)
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Il Met-tRNA iniziatore è formilato
10-formil tetraidrofolato tetraidrofolato
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Il gruppo formilico e talvolta la metionina vengono eliminati
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La sequenza di Shine-Dalgarno
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5'
Traduzione degli mRNA policistronici nei procarioti
5'
Inizio della traduzione negli eucarioti
prokaryotes
IF3 IF1
Initiation Factors eukaryotes
eIF-1 eIF-1A
Activity
Fidelity of AUG codon recognition Facilitate Met-tRNAiMet binding to small subunit Ternary complex formation eIF-2 eIF-2B (GEF) GTP/GDP exchange during eIF-2 recycling eIF-3 (12 subunits) Ribosome antiassociation, binding to 40S IF2 eIF-4F (4E, 4A, 4G) mRNA binding to 40S, RNA helicase activity eIF-4A eIF-4E eIF-4G eIF-4B eIF-4H eIF-5 eIF5B eIF-6 ATPase-dependent RNA helicase 5' cap recognition Scaffold for of eIF-4E and -4A Stimulates helicase, binds with eIF-4F Similar to eIF4B Release of eIF-2 and eIF-3, GTPase Subunit joining Ribosome subunit antiassociation
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La sequenza consenso di Kozak
Formazione di complessi nell'inizio della traduzione negli eucarioti:
A
{
- complesso ternario - complesso 43S
B
- complesso del cap
C
- complesso 48S - complesso 80S
Negli Eucarioti • eIF-2 forma un complesso ternario con Met-tRNA f • Il complesso ternario lega la subunità 40S libera che si lega all ’ estremità 5 ’ dell ’ mRNA • GTP viene idrolizzato quando eIF2 viene rilasciato come eIF2-GDP • eIF-2B rigenera la forma attiva.
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Formazione dei complessi 43S e cap
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Modello del "closed loop"
Complessi d'inizio
Complesso 43S : eIF1, 1A, 2, 3 Met-tRNA Complesso sul cap : eIF4A, B, E, G + mRNA Complesso 48S
Complesso 48S
Formazione del 48S e 80S
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Scansione della 40S e formazione dell'80S
Inizio di traduzione nell
’
mRNA di poliovirus
pUp
AUG AUG AUG AUG UUUCCUUUU AUG
IRES= Internal ribosome entry site
Confronto meccanismi d'inizio
La fase di allungamento della traduzione
procarioti
Fattori di allungamento
eucarioti
EF-Tu EF-Ts EF-G eEF1A eEF1B eEF2 trasporto aa-tRNA riciclo traslocazione
Ciclo dell'allungamento
Ingresso amminoacil-tRNA
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Traslocazione
Meccanismo della traslocazione
EF-Tu ed EF-G si legano alternativamente al ribosoma
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La fase di terminazione della traduzione
procarioti
Fattori di terminazione
eucarioti
RF1 RF2 eRF1
“
riconoscimento UAA, UAG riconoscimento UGA, UAA RF3 eRF3 GTPase RRF rilascio
Terminazione
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Eventi post-terminazione
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Struttura della puromicina
Inibitori della traduzione
Translation inhibitors Inhibitor
Chloramphenicol Streptomycin Tetracycline Erythromycin Fusidic acid Puromycin Diptheria toxin Ricin Cycloheximide
Effect
inhibits prokaryotic peptidyl transferase inhibits prokaryotic initiation, also induces mRNA misreading inhibits prok. aminoacyl-tRNA binding to the ribosome small subunit inhibits prokaryotic translocation through the ribosome large subunit similar to erythromycin only by preventing EF-G from dissociating from the large subunit resembles aa-tRNA, interferes with peptide transfer resulting premature termination in prok and euk catalyzes ADP-ribosylation of and inactivation of eEF-2 found in castor beans, catalyzes cleavage of the euk. 28S rRNA inhibits eukaryotic peptidyltransferase