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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / 對Phenylalanine(苯
丙胺酸)的抑制作用
實驗方法和實驗材料：
培養時間：20分鐘
人類黑色素細胞和角質細胞共同培養
測定 L-Phenylalanine 的量
PSC濃度 0.1% 和 0.5%
L-Phenylalanine 的量
BiotechMarine® - va 1.01.a
-6
Control
PSC0.1%
PSC0.5%
(10 M/mg 蛋白質 /20分鐘 )
113.1 ± 13.0
88.4 ± 12.4*
69.2 ± 10.9*
%
-22
-39
* 和control (對照組) 比較有很明顯不同 (p<0,05)
PSC可以很明顯抑制phenylalanine
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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / 對Phenylalanine
hydroxylase(苯丙胺酸羥化酶)的抑制作用
實驗方法和實驗材料：
培養時間：20分鐘
人類黑色素細胞和角質細胞共同培養
測定 PAH (phenylalanine hydroxylase) 的活性
PSC濃度 0.1% 和 0.5%
BiotechMarine® - va 1.01.a
Control
PSC 0.1%
PSC 0.5%
PAH (nmol/min/mg)
142 ± 21
49 ± 9*
24 ± 15*
%
-65
-83
*和control (對照組) 比較有很明顯不同 (p<0,05)
PSC非常有效抑制PAH的活性
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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / 對Tyrosine(酪胺酸)的
抑制作用
實驗方法和實驗材料：
培養時間：20分鐘
人類黑色素細胞培養
測定 [14C] L-tyrosine synthesis 的生成量
PSC濃度 0.1% 和 0.5%
14
[ C] L-Tyrosine
(µ moles/mg of proteins/20 minutes)
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Control
PSC0.1%
PSC0.5%
61.4 ± 6.6
44.3 ± 5.0*
41.0 ± 4.2*
%
-28
-33
*和control (對照組) 比較有很明顯不同 (p<0,05)
PSC可以抑制phenylalanine轉換成tyrosine
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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / 在有MSH的情況下對
Tyrosinase活性的抑制作用
IN VITRO 試驗
黑色素細胞
Control
PSC 0.5%
MSH
MSH + PSC 0.5%
Tyrosinase activity (%)
100
92
154
129 (-16 %)
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黑色素細胞 / 角質細胞 共同培養
Control
PSC 0.5%
MSH
MSH + PSC 0.5%
Tyrosinase activity (%)
100
85
182
154 (-15 %)
MSH: Melanin Stimulating Hormone (刺激黑色素的激素)
PSC可以抑制由MSH所激發的tyrosinase (酪胺酸酶)活性
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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / 對Tyrosinase 活性的
抑制作用
EX VIVO 試驗
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先在 37°C下培養1小時，測Tyrosinase在波長 475 nm的吸光度。
Negative control
Cream + 0.1% PSC
Cream + 0.5% PSC
Absorbance 475 nm
0.245 ± 0.03
0.198 ± 0.02
0.167 ± 0.02
%
-19
-32
在再組成的表皮層內， PSC 可以抑制Tyrosinase的活性
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植物幹細胞 調節皮膚黑色素的失調 / 減少黑色素的生成
EX VIVO 試驗
在組成的表皮層內，有第六型黑色素細胞。
評估在細胞內黑色素的生成。
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將黑色素溶於NaOH (1N) and DMSo (30mn)的溶液中用光譜測定法
測在波長475nm的吸光度。
Control
Cream + 0.1% PSC
Cream + 0.5% PSC
Absorbance 475 nm
0.160 ± 0.02
0.139 ± 0.02
0.101 ± 0.01
%
-13
-37
在再組成的表皮層內， PSC可以有效抑制黑色素的生成
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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / 減少角質細胞捕捉黑
色素顆粒
IN VITRO 試驗
實驗方法和實驗材料：
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角質細胞和黑色素細胞共同培養
測定被捕捉的黑色素顆粒
PSC濃度 0.1% 和 0.5%
Control
UVB (100mJ /cm²)
PSC 0.5%
PSC 0.5% + UVB
Melanin rate (%)
100
159
82 (-18 %)
133 (-16 %)
PSC可以減少角質細胞捕捉黑色素顆粒
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植物幹細胞調節皮膚黑色素的失調 / In vivo 試驗結果
15位自願測試人員：
- 測試時間： 56 天
- PSC濃度：0.5 %
- 皮膚類型： phototype IV / 皮膚上有棕色斑
- 用色度計測量 (CR400 – MINOLTA)
色度計評估皮膚色調的參數：
L : 亮度 – 和皮膚的明亮有關
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a : 綠 - 紅軸 – 和皮膚的發紅有關
b : 藍 – 黃軸 – 和皮膚的色素沉著有關
ITA 測量 (L-a-b)
所有測試人員皮膚色素沉著情形均有減少。
對皮膚上棕色斑有明顯改善。
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植物幹細胞皮膚變黑的反應機構
經轉移作用皮膚變
黑
Tyrosine
2
3
Tyrosinase
PSC
PSC
++ ++
PSC
Melanin
細胞核
MSH
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黑色素顆粒
角質細胞
1
Phenylalanine
Phenylalanine
hydroxylase
PSC
黑色素細胞
Tyrosine
細胞核
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植物幹細胞抗自由基
實驗方法和實驗材料：
重製的表皮層 (SKINETHIC)
接觸24小時後測定MDA
先將MDA萃取出來，再用HPLC定量 (螢光)
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在UVB (150mJ/cm²)照射下，抑制脂質過氧化反應
Control
UVB (150mJ/cm²)
Cream + 0.1%PSC+ UVB
Cream + 0.5% PSC+ UVB
MDA (µM/mg protein)
652 ± 31
832 ± 63
660 ± 51
625 ± 42
PSC對因為UVB照射而產生的自由基有很好的保護效果。
%
+28
-21
-25
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植物幹細胞傷口癒合及修護的活性
IN VIVO 情形
PHASE 1
生成血塊和發炎期 (2-4 days)
形成血凝塊
釋放 IL1, IL6, TNF alpha
血管形成
PHASE 2
修護期 (10 to 15 days)
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生成肉芽組織
上皮形成
VEGF : (血管內皮生長因子)可以活化內皮細胞的生成
TGFb :(變形生長因子)可以活化纖維母細胞的增生和膠原蛋白生成
PHASE 3
重建期 (2個月)
ECM 重建
膠原蛋白
蛋白多醣
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植物幹細胞傷口癒合及修護的活性 / 發炎期
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實驗方法：
將在重建的表皮層割傷。在37°c 下培養72小時
測定發炎介質 IL1 - IL6 - TNFalpha
Control
IL6(pg/ml)
98.4±6.5
%
-
PSC 0.5 %
93.8±4.1
Ns
Induction of a wound(positive control)
117.5±9.5
+38
Induction of a wound+ PSC 0.5 %
101.4±8.2
-14
Control
IL1(pg/ml)
59.8±4.5
%
-
PSC 0.5 %
50.4±7.1
Ns
Induction of a wound(positive control)
85.4±5.8
+43
Induction of a wound+ PSC 0.5 %
72.1±4.2
-16
TNF(pg/ml)
195.4±27.2
%
-
PSC 0.5 %
190.0±11.3
Ns
Induction of a wound(positive control)
259.4±16.2
+32
Induction of a wound+ PSC 0.5 %
220.8±17.2
-15
Peak Measurement Control
當發炎介質達到最高點時，生物修護能力是向下降。
測定的時間點是在最高峰生成之後。
PSC可以加速使傷口從phase1到phase2(也就是縮短時間)
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植物幹細胞傷口癒合及修護的活性 / 修護期
實驗方法：
將在重建的表皮層割傷。在37°C下培養 24、48、72、96小時
測定VEGF的量。
纖維母細胞和重建的表皮層共同培養
700
VEGF: (血管內皮生長因子) 可以供給食物給織組
600
500
Negative control
400
PSC 0.5%
Induction of a wound
300
Induction of a wound + PSC
0.5%
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200
100
0
T0
24h
48h
72h
96h
VEGF (pg/ml)
PSC可以激發 VEGF 生成
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植物幹細胞傷口癒合及維護的活性 / 修護期
實驗方法：
將在重建的表皮層割傷。在37°C下培養 24、48、72、96小時
測定TGF b的量。
單核細胞和重建的表皮層共同培養
TGF b : (變形生長因子) 可以形成組織
700
Negative control
600
500
PSC 0.5%
400
300
Induction of a wound
BiotechMarine® - va 1.01.a
200
Induction of a wound +
PSC 0.5%
100
0
T0
24h
48h
72h
96h
TGFb (pg/ml)
PSC 可以激發TGF b ，誘發修護期縮短
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植物幹細胞傷口癒合及維護的活性 / 重建期
人類纖維母細胞和重建的表皮層共同培養
Collagens
BiotechMarine® - va 1.01.a
Control
P ositive control (Induction of a wound)
PSC 0.5%
Induction of a wound + PSC
0.5%
Hydroxyproline
concentration (mg/ml)
1.85 ± 0.20
2.24 ± 0.19*
2.30 ± 0.14*
2.47 ± 0.21*
Perimembraneous proteoglycans Incorporation of [
(細胞膜周圍的蛋白多醣)
(cpm)
% of increase
+21
+24
+34
35
SO 4]
Control
P ositive control (Induction of a wound)
PSC 0.5%
124 ± 13
143 ± 17
145 ± 14*
% of increase
+15
+17
Induction of a wound + PSC
156 ± 12*
+26
0.5%
PSC可以誘導激發重建期
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植物幹細胞傷口癒合及維護的活性 / 重建期
人類纖維母細胞和重建表皮層共同培養
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transmembraneous proteoglycans Incorporation of [35SO4]
(cpm)
(穿透膜的蛋白多醣)
Control
Positive control (Induction of a wound)
PSC0.5%
Induction of a wound + PSC0.5%
187 ± 17
224 ± 18
231 ± 10*
248 ± 13*
% of increase
+20
+24
+33
matrix proteoglycans
(細胞間質的蛋白多醣)
Incorporation of35[SO4]
(cpm)
197 ± 18
232 ± 23
237 ± 15*
253 ± 18*
% of increase
+23
+20
+28
Control
Positive control (Induction of a wound)
PSC0.5%
Induction of a wound + PSC
0.5%
*和control (對照組) 比較有很明顯不同 (p<0,05)
PSC 可以誘發更多的細胞間質成份生成
使皮膚有更好的內聚力、溝通及緊實
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