Transcript Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu

Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego
Katarzyna Kozioł
Magdalena Machowska
Katarzyna Piekarowicz
(Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: [email protected])
Cel ćwiczeń:



Analiza procesu dekondensacji chromatyny
Analiza procesu wiązania białek do chromatyny podczas
dekondensacji
Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder
komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej
embrion
 larwa
 poczwarka
 jajniki


Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu
komórkowego w komórkach w hodowlach komórkowych
METODA IN VITRO NUCLEAR ASSEMBLY
- ANALIZA DEKONDENSACJI CHROMATYNY
-ORGANIZACJA CHROMATYNY
- REPLIKACJA
- BADANIE MITOZY
- WPŁYW WYBRANYCH BIAŁEK NA PROCESY
DEKONDENSACJI I ODTWARZANIA OTOCZKI
ODTWARZANIE JĄDER KOM.:
- ekstrakt z oocytów Xenopus laevis (żaba
szponiasta) - LSS
- DSP odbłoniona chromatyna ze spermy
Xenopus (demembranated sperm chromatin)
- inhibitor coctail
- energy mix: ATP, PC (fosforan kreatyniny),
PCKinase
-chromatyna
-ekstrakt
- energia
Analiza procesu dekondensacji chromatyny
Odtwarzanie jąder komórkowych (chromatyna i otoczka)
http://www.jove.com/details.php?id=908
Populacje pęcherzyków mitotycznych NEP-B i NEP-A
Widoczne pęcherzyki błonowe
asocjujące z chromatyną
Widoczne prekursory porów i
kompletne kompleksy porowe.
Budowa otoczki jądrowej
LAMINY
-wraz z innymi białkami otoczki jądrowej tworzą dynamiczny szkielet białkowy
zapewniający mechaniczną podporę otoczki jądrowej
-kontrolują umiejscowienie kompleksów porowych w obrębie otoczki jądrowej
-regulują organizację przestrzenną chromatyny, stanowią miejsce kotwiczenia domen
chromatynowych
-wpływają na replikację, transkrypcję, splicing
-zaangażowane są w procesy starzenia, różnicowania i apoptozy
TYPY LAMIN (ludzkie)
-B: (LMNB1) - B1
(LMNB2) –B2, B3
-A/C (LMNA) , A, C,C2, A10
Molecular Biology of the Cell
Alberts,B i wsp., (1994)
Wpływ emeryny na odtwarzanie struktury otoczki jądrowej in vitro
Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder
komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej
Dymorfizm płciowy u Drosophila melanogaster
Budowa jajników u Drosophila melanogaster
Jajniki
Cewka jajnikowa (owariola)
Owariole i komory jajowe muszki owocowej
Analiza dystrybucji obu
typów lamin w
embrionach
D.melanogaster przy
użyciu mikroskopii
konfokalnej.
Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych
fazach cyklu komórkowego
Formowanie wrzeciona podziałowego
The Cell A Molecular Approach Geoffrey M. Cooper
Boston University Second Edition Sinauer Associates, Inc., ISBN 0-87893-106-62000
Dziękujemy za uwagę!
Do zobaczenia na ćwiczeniach.
Zaliczenie:
- kolokwium ( termin do uzgodnienia)
-praca na ćwiczeniach
-obecność