Transcript ЯМР

ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Временное и частотное представление спектра
Mу’
∆ω
x’
Mx’
∆ω
y’
сия
ди
сп
ер
My = Mxycosωt
Mx = Mxysinωt
поглощение
1
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Временное и частотное представление спектра
t
ν0
ν
t
ν0
ν
Фурьепреобразование
2
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Преобразование Фурье
f ( ) 

 f (t )e
it
dt
it
e
 cos(t )  i sin(t )

My = Mxycosωt
Mx = Mxysinωt
Re[ f ( )] 
Im[ f ( )] 

 f (t ) cos(t )dt


 f (t ) sin(t )dt
Спектр поглощения

Спектр дисперсии
3
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Несколько сигналов. Импульсная спектроскопия.
h∆ν∆t ~ h
t
ν
4
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Спад свободной индукции (ССИ, FID)
0.004
0.006
0.008
sec
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9
sec
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
sec
5
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Спад свободной индукции (ССИ, FID)
T 2*
T2
T 2*
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
sec
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
sec
6
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Спад свободной индукции (ССИ, FID)
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
sec
4.0
sec
x16
ССИ
0.5
1.0
ШУМ
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
7
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Оцифровка сигнала. Частота сигнала.
Ширина спектра: SW
Частота выборки: DW
1
DW 
2 SW
Теорема Найквиста: Для того, чтобы охарактеризовать колеблющийся сигнал,
он должен определяться минимум двумя точками на длину волны.
Оцифровка сигналов с
высокой частотой, не
попавших в диапазон SW
производится, но они
определяются с «ложной»
частотой.
8
5
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Оцифровка сигнала. Цифровое разрешение
Время регистрации
TD
AQ  DW  TD 
2SW
Цифровое разрешение
DW
TD
DR 
6.00
5.95
5.90
5.85
5.80
ppm
5.95
5.90
5.85
5.80
5.75
ppm
5.756.005.70
5.65
5.60
Hz/cm
5.95 16.06
5.90
Scale: 0.03225 ppm/cm, 16.13 Hz/cm Scale: 0.03211 ppm/cm,
Scale:
2K
Полный_ диапазон_ част от SW 2SW
1



Общее_ число _ т очек_ данных SI
TD
AQ
4K
0.03218
5.85
5.80
ppm/cm, 16.1
8K
ppm
Hz/cm
ppm5.85 5.80
5.95
5.90
5.85
5.80
ppm
5.95
5.90
Scale: 0.03218 ppm/cm,
16.10.03218
Hz/cm ppm/cm, 16.1 Hz/cm
Scale:
16K
128K
9
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Оцифровка сигнала. Цифровое разрешение
SW 2SW
1
DR 


SI
TD
AQ
TD = 2SI
Влияние DR:
•Точность определения частот сигналов
•Точность определения интенсивностей сигналов
•Форма линии
SI или дополнение нулями
TD = 16K
8K
5.346
5.344
5.342
5.340
5.338
ppm
5.336 5.3465.334 5.344
16K
5.342
5.340
5.338
5.336
32K
ppm
5.334 5.344
5.342
5.340
5.338
ppm
10
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Динамический диапазон АЦП
АЦП на 16 bit: ±32767 = 215-1
Накопление (усреднение) сигнала
Изменение соотношения сигнал/шум при накоплении
11
ЯМР. Часть 5. Особенности проведения эксперимента
Соотношение сигнал/шум
S/N ~ N×γex×γdet3/2×B03/2×NS1/2×T21/2
S/N
– соотношение сигнал/шум
N
– количество ядер (концентрация)
γex
– гиромагнитное отношение возбужденных спинов
γdet
– гиромагнитное отношение детектируемых спинов
B0
– напряженность постоянного магнитного поля
NS
– количество сканов
T2
– время поперечной релаксации
12
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
Операции с ССИ
Полный ССИ
Обрезанный ССИ
ССИ после дополнения нулями и аподизации
ССИ после линейного предсказания
13
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
Операции с ССИ. Аподизация
em lb=1
gm; lb=-1, gb=0.2
0.4
sec
0.6
gm; lb=-1, gb=0.4
tm
4.70
4.65
4.60
ppm
14
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
tm
Операции с ССИ. Аподизация.
Трапецеидальное умножение.
tm1
0
tm2
1
15
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
em lb=1
Операции с ССИ. Аподизация.
Экспоненциальное умножение
5.95
5.94
5.93
5.92
5.91
5.90
5.89
5.88
5.87
5.86
5.85
5.84
5.83
5.82
ppm
5.81
5.80
5.79
5.78
Scale: 0.007603 ppm/cm, 3.802 Hz/cm
lb = 3
lb = 1
156
155
154
153
152
151
150
149
ppm
156
155
154
153
152
151
150
149
ppm
5.94
5.92
5.90
5.88
5.86
ppm
5.84
5.82
5.80
Scale: 0.007603 ppm/cm, 3.802 Hz/cm
16
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
gm; lb=-1, gb=0.2
Операции с ССИ. Аподизация.
Лоренц-Гауссово преобразование
lb = -1 gb = 0.5
5.94
5.92
5.90
5.88
5.86
ppm
5.84
5.82
5.80
Scale: 0.007603 ppm/cm, 3.802 Hz/cm
lb = -1 gb = 0.2
5.94
5.95
5.94
5.93
5.92
5.91
5.90
5.89
5.88
5.87
5.86
5.85
5.84
5.83
5.82
ppm
5.81
5.80
5.79
5.78
Scale: 0.007603 ppm/cm, 3.802 Hz/cm
5.92
5.90
5.88
5.86
ppm
5.84
5.82
5.80
Scale: 0.007603 ppm/cm, 3.802 Hz/cm
17
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
Линейное предсказание.
0.0
0.005
0.010
0.015
0.020
0.025
sec
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
0.12
0.14
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
sec
sec
0.001
120
120
110
110
100
100
90
90
80
80
70
70
60
60
50
50
40
40
sec
0.7
30
30
20
20
10
10
0
0
-10
-10
-20
-20
ppm
ppm
18
ЯМР. Часть 6. Обработка спектра
Методология обработки спектра
1. Редактирование ССИ
• Дополнение нулями (SI)
• Линейное предсказание
• Аподизация (tm, em, gm)
2. Фурье – преобразование (ft)
3. Коррекция фазы
4. Коррекция базовой линии
5. Калибровка химического сдвига
6. Подписывание сигналов
7. Интегрирование
19
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Химическая шкала. Разрешение.
  ref   SF


 ref
SF
SWH
SW (ppm)
SFO1
 2

6
 6  2  SR  10
10

1  
1
SR
O1
BF
SF
м.д. (ppm) (ν в МГц )
20
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Химическая шкала.
сильное поле
слабое поле
частота
Ξ – шкала: = 0 м.д. при условии  X 
 H H
, слабое поле  сильное поле
X
∆ – шкала: δстандарта = 0 м.д., слабое поле  сильное поле
τ – шкала (1H, устар.): δстандарта = 10 м.д., сильное поле  слабое поле
21
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Экранирование.
0.40
[2]
H3C
2
OH
1
0.30
0.20
0.10
[1]
0.00
2000
1000
0
 - константа экранирования
Ларморова частота :  = -Bloc
B = Bo (1-)
Bloc = B0 - Binduced
Внешнее магнитное поле
индуцирует токи электронов
Индуцированное локальное
магнитное поле
22
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Экранирование. Кольцевые токи.
ароматические протоны (~6-8 м.д.)
Bloc = B0 - Binduced
винильные протоны (~5-6 м.д.)
альдегидные протоны (~9-10 м.д.)
23
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Спектр ЯМР простого вещества
Ванилин
24
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Спектр ЯМР простого вещества
25
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Зависимость химического сдвига.
•Температура
•pH
•Концентрация
Растворитель Группа
CDCl3
(CD3)2CO (CD3)2SO C6D6
CD3OD
хлороформ
CH
7.24
8.02
8.32
6.15
7.90
ацетон
CH3
2.17
2.05
2.05
1.55
2.15
2.22
ДМСО
CH3
2.62
2.52
2.54
1.68
2.65
2.71
бензол
CH
7.36
7.36
7.37
7.15
7.33
метанол
CH3
3.49
3.31
3.16
3.07
3.34
OH
1.09
3.12
4.01
H2O
1.56
2.84
3.33
0.4
4.87
вода
D2O
3.34
26
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Измеряемые параметры ЯМР
Наблюдаемые параметры
Получаемая из них информация
Химические сдвиги
1H, 13C, 15N, 19F, 31P …
Отнесение сигналов, вторичная
структура белка и т.д.
Интегральные интенсивности сигналов
Количество измеряемого компонента,
кинетические характеристики
Константы спин-спинового
взаимодействия
Характеристика хим. связей,
диэдральные углы
Ядерные эффекты Оверхаузера
(взаимодейств. через пространство)
Расстояния между ядрами (1H – 1H <
5A)
Ширины линий, времена релаксации
ядер, кросс-релаксация
Динамика, подвижность биомолекулы,
конформационные переходы
27
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Hz
Hz
sec
5.36
ppm
9
8
7
6
5
4
0.92
3
0.90
ppm
ppm
2
1
0
Scale: 0.5744 ppm/cm, 287.3 Hz/cm
4.89
10
0.94
100.00
11
5.32
usec
usec
K
sec
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
1H
P1
12.80 usec
PL1
2.00 dB
PL1W
19.01871872 W
SFO1
500.1330008 MHz
SI
65536
SF
500.1300099 MHz
WDW
GM
SSB
0
LB
-0.50 Hz
GB
0.5
PC
1.00
12
5.34
0.918
0.916
0.914
0.912
0.911
CD2Cl2
1
1
20100603
15.19
spect
5 mm PABBO BBzg
65536
CD2Cl2
32
0
7002.801
0.106854
4.6793203
203
71.400
142.79
298.8
5.00000000
1
3.70
NAME
EXPNO
PROCNO
Date_
Time
INSTRUM
PROBHD
PULPROG
TD
SOLVENT
NS
DS
SWH
FIDRES
AQ
RG
DW
DE
TE
D1
TD0
5.342
5.340
5.338
CD2Cl2
T = 300K
1.534
Спектр 1H
28
NAME
EXPNO
PROCNO
Date_
Time
INSTRUM
PROBHD
PULPROG
TD
SOLVENT
NS
DS
SWH
FIDRES
AQ
RG
DW
DE
TE
D1
TD0
CD2Cl2
1
1
20100603
15.19
spect
5 mm PABBO BBzg
65536
CD2Cl2
32
0
7002.801
0.106854
4.6793203
203
71.400
142.79
298.8
5.00000000
1
5.342
5.340
5.338
Спектр 1H
DE
142.79 usec
298.8 K
ЯМР. Часть 7. TE
Спектр ЯМР
D1
5.00000000 sec
CD2Cl2
TD0 T = 300K
1
Hz
Hz
sec
usec
usec
K
sec
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
1H
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
1H
P1
12.80 usec
PL1
2.00 dB
PL1W
19.01871872 W
SFO1
500.1330008 MHz
SI
65536
SF
500.1300099 MHz
WDW
GM
SSB
0
LB
-0.50 Hz
GB
0.5
PC
1.00
12
11
10
9
29
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Спектр 13С
12.717
70
31.223
25.983
25.806
25.719
69.568
80
55.319
52.256
51.555
51.057
44.760
77.600
77.347
77.093
87.076
92.654
116.378
123.242
V31
1301
1
20101008
10.11
spect
5 mm PABBO BBzgpg
131072
CDCl3
128
8
31250.000
0.238419
2.0972021
203
16.000
6.50
300.5
4.00000000
0.03000000
1
131.724
128.638
NAME
EXPNO
PROCNO
Date_
Time
INSTRUM
PROBHD
PULPROG
TD
SOLVENT
NS
DS
SWH
FIDRES
AQ
RG
DW
DE
TE
D1
D11
TD0
137.817
V31
solvent:CDCL3
T = 300K
Hz
Hz
sec
usec
usec
K
sec
sec
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
13C
P1
9.30 usec
PL1
0.00 dB
PL1W
92.43742371 W
SFO1
125.7728799 MHz
======== CHANNEL f2 ========
CPDPRG2
waltz16
NUC2
1H
PCPD2
79.50 usec
PL2
2.00 dB
PL12
18.00 dB
PL13
28.00 dB
PL2W
19.17720795 W
PL12W
0.48170969 W
PL13W
0.04817097 W
SFO2
500.1325007 MHz
SI
131072
SF
125.7577498 MHz
WDW
EM
SSB
0
LB
0.00 Hz
GB
0
PC
1.40
240
230
220
210
200
190
180
170
160
150
140
130
120
110
100
90
60
50
40
30
20
10
30
ppm
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
13C
P1
9.30 usec
PL1
0.00 dB
PL1W
92.43742371 W
SFO1
125.7728799 MHz
Hz
Hz
sec
usec
usec
K
sec
sec
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
13C
P1
9.30 usec
PL1
0.00 dB
PL1W
92.43742371 W
======== CHANNEL f2 ========
CPDPRG2
waltz16
NUC2
1H
PCPD2
79.50 usec
PL2
2.00 dB
PL12
18.00 dB
PL13
28.00 dB
PL2W
19.17720795 W
PL12W
0.48170969 W
PL13W
0.04817097 W
SFO2
500.1325007 MHz
SI
131072
SF
125.7577498 MHz
WDW
EM
SSB
0
LB
0.00 Hz
GB
0
PC
1.40
31
123.242
V31
1301
1
20101008
10.11
spect
5 mm PABBO BBzgpg
131072
CDCl3
128
8
31250.000
0.238419
2.0972021
203
16.000
6.50
300.5
4.00000000
0.03000000
1
D11
TD0
300.5 K
4.00000000 sec
0.03000000 sec
1
131.724
128.638
NAME
EXPNO
PROCNO
Date_
Time
INSTRUM
PROBHD
PULPROG
TD
SOLVENT
NS
DS
SWH
FIDRES
AQ
RG
DW
DE
TE
D1
D11
TD0
TE
ЯМР. Часть 7. Спектр
ЯМР
D1
137.817
V31
solvent:CDCL3
T = 13
300K
Спектр
С
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Двумерный спектр (1H/1H)
V31
solvent:CDCL3
T = 300K
ppm
1
2
3
4
5
6
7
8
8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0
ppm
NAME
EXPNO
PROCNO
Date_
Time
INSTRUM
PROBHD
PULPROG
TD
SOLVENT
NS
DS
SWH
FIDRES
AQ
RG
DW
DE
TE
D0
D1
D13
D16
IN0
V31
3
1
20101008
10.12
spect
5 mm PABBO BBcosygpqf
1024
CDCl3
2
16
4000.000
3.906250
0.1280500
114
125.000
6.50
300.2
0.00000300
1.50000000
0.00000400
0.00010000
0.00024995
Hz
Hz
sec
usec
usec
K
sec
sec
sec
sec
sec
======== CHANNEL f1 ========
NUC1
1H
P0
12.80 usec
P1
12.80 usec
PL1
2.00 dB
PL1W
19.17720795 W
SFO1
500.1322506 MHz
====== GRADIENT CHANNEL =====
GPNAM1
SINE.100
GPZ1
10.00 %
P16
1000.00 usec
ND0
1
TD
256
SFO1
500.1323 MHz
FIDRES
15.629133 Hz
SW
8.000 ppm
FnMODE
QF
SI
1024
SF
500.1300237 MHz
WDW
QSINE
SSB
0
LB
0.00 Hz
GB
0
PC
1.40
SI
1024
MC2
QF
SF
500.1300237 MHz
WDW
QSINE
SSB
0
LB
0.00 Hz
GB
0
32
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Файловая структура
33
ЯМР. Часть 7. Спектр ЯМР
Файловая структура
34