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Actividad anti-cáncer de los extractos y sus
compuestos activos obtenidos de productos
naturales
RIBECANCER
RIBECANCER
Itajaí – SC - BR
26 – 28/11/2012
João Ernesto de Carvalho
Búsqueda de nuevos medicamentos contra el cáncer

Triage (screening) inicial en cultura de células tumorales humanas

Estudios de los mecanismos de acción

Modelos experimentales de cáncer en animales de laboratorio

Estudios de toxicidad

Estudios clínicos
Triage (screening) inicial: líneas celulares de cáncer humano










Leucemia (K 562)
Pulmón (NCI H460)
Mama (MCF 7)
Ovario con fenotipo de resistencia a múltiplos fármacos (NCI ADR)
Melanoma (UACC 62)
Riñón (786 0)
Colon (HT 29)
Ovario(OVCAR 03)
Próstata (PCO 3)
Glioma (U251)
Triage in vitro
Inoculación
placas de 96
pocillos
RPMI +
soro fetal bovino
Incubación
24 horas
Adición de las
muestras
Fijación ácida
de la placa controle
(tiempo cero)
Incubación
48 horas
Fijación:
adición de
ácido
Coloración
SRB
Solubilización
del colorante
(trizma base)
Densidad
óptica
540 nm
Branco substância teste
D1
D2
D3
1
Branco Contr
meio célula
Branco substância teste
3
2
4
5
Doxorrubicina
100
75
Growth Percentage
50
25
0
UACC.62
MCF.7
NCI.460
K.562
OVCAR
PC0.3
HT.29
786-0
NCI.ADR
-25
-50
-75
-100
-3
10
0
10
-2
10
-1
0,25
0
10
10
2,5
Concentration (g/mL)
1
10
25
2
3
10
250
Holbeck, S.L. Update on NCI in vitro drug screen utilities
European Journal of Cancer 40 (2004) 785–793
UNIVALI/RIBECANCER
120806 Ext MeOH G. achachairu folhas
100
75
75
50
50
Crescimento Celular (%)
Crescimento Celular (%)
120806 Ext MeOH G. achachairu galhos
100
25
0
-25
U251
UACC-62
MCF7
NCI/ADR-RES
786-0
NCI-H460
PC-3
HT29
K-562
HaCaT
-50
-75
25
0
-25
U251
UACC-62
MCF7
NCI/ADR-RES
786-0
NCI-H460
PC-3
HT29
K-562
HaCaT
-50
-75
-100
-100
-3
-2
10
-1
10
10
0,25
0
10
2,5
1
10
25
2
10
-3
250
10
-2
10
-1
10
100
75
75
50
50
25
0
-25
U251
UACC-62
MCF7
NCI/ADR-RES
786-0
NCI-H460
PC-3
HT29
K-562
HaCaT
-50
-75
0
10
2,5
1
25
1
25
10
2
250
2
250
10
120806 DCLNFM
100
Crescimento Celular (%)
Crescimento Celular (%)
120806 Ext MeOH G. achachairu sementes
0,25
25
0
-25
U251
UACC-62
MCF7
NCI/ADR-RES
786-0
NCI-H460
PC-3
HT29
K-562
HaCaT
-50
-75
-100
-100
-3
10
-2
10
-1
10
0,25
0
10
2,5
1
10
25
2
10
250
-3
10
-2
10
-1
10
0,25
0
10
2,5
10
10
Colecta y Identificación
Material vegetal
diclorometano
Material vegetal
Extracto orgânico
etanol 70%
Teste de actividad
anticâncer in vitro
5-10 mg
segunda
colecta
Fraccionamiento
de los extractos activos
Extracto
hidroalcoólico
Fraccionamento
De los extractos activos
Teste de actividad
anticâncer in vitro
5-10 mg
Aislamiento
princípios activos
Estudios agronômicos
y cultivo
Teste atividade
antiproliferativa
Identificación
princípios activos
Identificación
princípios activos
síntesis
Extración y aislamiento
en gran cuantidad
Testes in vivo
Testes en
animales de laboratorio
0,1 – 100 gramos
Formulación
farmacéutica
Toxicología
pre-clínica
Estudios clínicos
Fases I, II, III e IV
Mecanismo
de acción
EBD - Pothomorphe umbellata (Piperaceae) - pimienta
100
75
Growth Percentage
50
25
0
UACC.62
MCF.7
NCI.460
K.562
OVCAR
PC0.3
HT.29
786-0
NCI.ADR
-25
-50
-75
-100
-3
10
0
-2
10
-1
10
0,25
0
1
10
2
10
2,5
3
10
25
10
250
Concentration (g/mL)
Sacoman et al. Braz. J. Medical Biological Res. 41: 411, 2008
Tumor ascitico de Ehrlich en ratones
Inoculación 0,5 mL 104 celulas del tumor
de Ehrlich en el abdomen de ratones
Tratamientos: 40, 110 y 180dia
Controle negativo: salina
Controle positivo: doxorrubicina 5 mg/ kg
EBD 100, 200 y 400 mg/ kg
ip. via
Pós-inoculación
n=10
Numero y fechas de las
muertes ANOVA y curva de
sobrevida Kaplan-Meier
Sacoman et al. Braz. J. Medical Biological Res. 41: 411, 2008
Tumor ascítico de Ehrlich: curva de sobrevida
Tumor sólido Ehrlich en ratones

Las celulas del tumor de Ehrlich son inoculadas en la pata

Evaluación:
– medida del volumen de la pata
– peso relativo del tumor
– analises histológicas
– aumento de peso de los animales
Pletismometro: determinación del volumen tumoral
Tumor sólido de Ehrlich en ratones
2,5
0,35
Salina
5-Fluoracil (15mg/Kg)
Eupomatenóide-5 (30mg/Kg)
2,0
Salina
5-Fluoracil (15mg/Kg)
Eupomatenóide-5 (30mg/Kg)
0,25
Volume tumoral (mL)
Variação de peso corporal (g)
0,30
0,20
**
**
0,15
**
*
**
0,10
*
***
***
**
***
0,05
1,5
1,0
***
0,5
**
0,0
***
*
-0,5
-1,0
***
-1,5
0,00
4
6
8
10
12
Tratamentos (dias)
14
16
18
-2,0
4
6
8
10
Tratamentos (dias)
Dosis de 30 mg/kg  inibición de crecimiento
12
14
16
Metástasis pulmonar inducida pela linaje B16-F10 (melanoma)
concentração de melanina/massa pulmão
9
veículo
rac-GTN 100mg/kg
8
7
6
5
4
3
2
1
0
*
Fibra semipermeable (Hollow-fiber)
- Encapsulamiento de la linaje tumoral y
incubación por 24 horas
-
Implante de las fibras en ratones
Balb-C, tejido subcutáneo dorsal
y abdomen
Tratamientos
- Sacrificio en el 14º. día para evaluación
de la viabilidad celular por MTT
Fibra semipermeable: tejido subcutáneo dorsal y abdomen
Hollow-Fiber – K. coriacea (Fr7)
MCF7
NCIADR
OVCAR
1,2
1,0
Absorbance
0,8
0,6
**
**
**
0,4
**
0,2
0,0
Salina
Doxorrubicina
Hollow-fiber: abdomen
Fr7
Hollow-Fiber model – K. coriacea (Fr7)
1,4
MCF7
NCIADR
OVCAR
1,2
Absorbance
1,0
**
0,8
**
0,6
0,4
0,2
0,0
Salina
Doxorrubicina
Fr7
Hollow-fiber: subcutáneo dorsal
Metodologías en desarrollo
Tumor xenográfico
Citometria de flujo
Gracias
João Ernesto de Carvalho
Divisão de Farmacologia e Toxicologia
CPQBA – Unicamp
[email protected]