Transcript 核酸等温扩增技术（一）

核酸等温扩增技术的定义及特点
核酸等温扩增技术是一类分子生物
学技术的总称，它们能在某一特定
的温度下扩增特定的DNA或者RNA。
与PCR技术相比核酸等温扩增对仪
器的要求大大简化，反应时间大大
缩短，更能满足快速简便的需求。
核酸等温扩增技术的分类
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环介导等温扩增技术（LAMP）
依赖于核酸序列的扩增技术（NASBA）
滚环扩增技术（RCA）
单引物等温扩增技术（SPIA）
依赖于解旋酶的等温扩增技术（HAD）
链替代扩增技术（SDA）
快速等温检测放大技术（RIDA）
切刻内切酶核酸恒温扩增技术（NEMA）
环介导等温扩增技术（LAMP）
 环介导等温扩增技术（loop-mediated
isothermal amplification,LAMP）是2000年日本
研究人员Notomi等发明的一种新型体外等温
扩增特异性核酸片段的技术。
 该技术主要利用两对特殊设计的引物和具有链
置换活性的DNA聚合酶，使反应中在模板两端
引物结合处循环出现环状单链结构，从而保证
引物可以在等温条件下顺利与模板结合，并进
行链置换扩增反应。
LAMP的特点
 LAMP克服了传统PCR反应需要通过反复热变性获得单
链模板的缺点，避免了反复升降温的过程，实现了恒
温条件下的连续快速扩增，具有更高的灵敏度和扩增
效率。
 15-60min内可扩增出109-1010倍靶序列拷贝，得到
500ug/ml的目的DNA。具有简单、快速、特异性强的
特点。
LAMP技术的原理
LAMP主要是利用4种不同的特异性引物识
别靶基因的6个特定区域，在等温条件进行
扩增反应。基因的扩增和产物的检测可一步
完成，所有靶基因序列的检测可只通过扩增
产物的有、无来判别。有、无扩增反应是利
用荧光定量PCR仪检测反应的荧光强度或利
用核酸扩增过程中产生的焦磷酸镁沉淀反应
用浊度仪检测沉淀浊度来判定。
LAMP引物设计
 主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’
端的F3c、F2c和Flc区以及5’ 端的Bl、B2和B3区等6个不
同的位点设计4种引物。
 FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和
F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C
区与靶基因5’端的Flc区域序列相同。
 F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3
区组成，并与靶基因的F3c区域互补。
 BIP引物：下游内部引物(Backward Inner Primer )，由
B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3’端的B2c区域互补，
B1C域与靶基因5’端的Blc区域序列相同。
 B3引物：下游外部引物(Backward Outer Primer )，由
B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补。