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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy

Workshop Cancéropôle GSO / SFTCG

Thérapies cellulaires et géniques : de la preuve de concept jusqu’à l’essai clinique

Le développement d’un Médicament de Thérapie Génique: retour d’expérience Fabienne VERNEJOUL (InvivoGen)

25/03/2010

La société InvivoGen

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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy 70 employés et un revenu de 12 M€, le groupe InvivoGen travaille pour environ 15 000 clients à travers le monde.

Depuis le 1 er Janvier 2014, les activités de Cayla sont regroupées sous le nom de InvivoGen.

25/03/2010

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Activités principales du site de Toulouse

About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy Production d’antibiotiques de sélection et de contamination Production d’actifs cosmétiques (BASF healthcare) Production de réactifs de laboratoire (InvivoGen) Immunité innée (signalisation PRRs: TLRs) Clonage et expression de gènes Culture cellulaire et transfection

25/03/2010

Autres activités: les Biothérapies

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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy Depuis 15 ans, InvivoGen recherche et développe des produits en thérapie génique et immunomodulateurs Anticorps monoclonaux (R&D) Thérapie génique non-virale Agents de complexation (LyoVec™, AdiFectin™, PamadiFectin™) Gènes synthétiques (ADN sans CpG) Production d’ADN à grande échelle Gènes suicides (Fcy::fur/5-FC, CodA::upp/5-FC)

DCK::UMK/Gemcitabine

(brevet)

25/03/2010

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Le Principe

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Gemcitabine

(GEMZAR®): prodrogue traitement palliatif pour le cancer du pancréas.

Thérapie Génique

multiple/double - gène aux propriétés anti-oncogéniques et anti-métastatiques (SST2 R) - fusion de gènes (DCK::UMK) aux propriétés chimio-sensibilisantes à la gemcitabine (dFdC)

SST2 récepteur

Cellules Tumorales Pancréatiques Gemcitabine dFdC P dFdCMP P dFdCDP

DCK::UMK

dFdCTP-ADN

CYL-02 :

complexes lyophilisés

in vivo

Jet-PEI™ / ADN (SST2R+DCK::UMK)

25/03/2010

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La preuve de concept

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1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 0 No treatment Gemcitabine Gene therapy + gemcitabine 5

* Modèle syngénique chez le Hamster (allogreffe hétérotopique) MDS, Inc.

10 15 Days 20 25 30 25/03/2010

Développement (1): ADN médicament

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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy • • •  ADN plasmidique (agrément CGG) Promoteurs hypoxie-sensibles (environnement tumoral) Squelette de 1 ère Squelette de 2 ème génération (IRES avec gène de résistance) génération (gène de résistance isolé)  Optimisation de la souche bactérienne productrice (agrément HCB) • • • Souche dérivée d’

Escherichia coli K12

(classe1) Aucune pathogénicité ni toxicité vis-à-vis de l’homme et des animaux. Pas de menace pour l’environnement.

Pas de possibilité de dissémination.

Banques Cellulaires (selon Pharm. Europ.) Souche sécurisée  Procédés de Fermentation/ Extraction/ Purification • Production en bioréacteurs de 20 L Amélioration du titre en plasmide  Contrôles de la substance active • Libération du lot (mise en place du système AQ)

25/03/2010

Développement (2): préparation du MTG

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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy  Evolution des formulations 1 ère génération de complexes : Extemporanée ( Formulation directe avant injection)   Problème de reproductibilité Non acceptable en phase II/III 2 ème génération de complexes : Complexes en solution   Homogénéité des lots Problème de stabilité en solution 3 ème génération de complexes : Complexes lyophilisés    Homogénéité des lots Stabilité colloïdale (nanoparticules 80-100 nm) Simplicité d’utilisation (prêt-à-l’emploi)

25/03/2010

« Contraintes » de la Formulation BPF

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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy Formulation des complexes (selon les normes BPF)     Choix de la forme (JetPEI™ en poudre ou solution?) Choix des concentrations de travail (4 dosages) Cinétique et sens de mélange (vortex  grande échelle) Reproductibilité des lots (peu d’essais possibles) Lyophilisation    Choix d’un excipient physiologiquement compatible Remise en suspension immédiate à température ambiante Conservation de l’activité biologique Maintien de la stérilité    Pas de stérilisation finale possible Deux principes actifs

stériles

Travail en ZAC Classe A

25/03/2010

1995

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About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy 2000 2004 2006 2007 2008 2009 2010/2012

R&D Preuve de Concept Scale-up Discussions avec l’ANSM et agréments Etude de toxicité Dépôts de brevets Soumission des dossiers (DME) Production BPF Phase I/II TherGAP 1 25/03/2010

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Essai TherGAP 1

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Etude pilote de Thérapie Génique de l’Adénocarcinome Pancréatique localement avancé par injection intratumorale de complexes in vivo-jetPEI ™ /ADN à activité antitumorale et sensibilisante au GEMZAR ®

Cancer du pancréas (95% des cas: adénocarcinome) 4 ème cause de décès par cancer TherGAP 1 (2010-2012): Escalade de doses (4 dosages de CYL02) 22 patients traités Bonne Faisabilité Pas d’EIG Bonne tolérance

Sécurité/innocuité du MTG 25/03/2010

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Impact du projet TherGAP 1

About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • IgA • Cancer Research & Gene Therapy  Mise en place d’un service Assurance Qualité  Rédaction de procédures et documents associés  Qualification/Validation du matériel  Amélioration de la qualité pour la production de la gamme de réactifs InvivoGen (objectif de certification ISO9001)  Perspectives: poursuite de l’ évaluation clinique (TherGAP 2)  Conséquences du changement de réglementation :   InvivoGen n’est pas établissement pharmaceutique. Dépôt d’une demande d’autorisation et déclaration des activités relatives aux MPUP (matières premières à usage pharmaceutique).

Préparation de la substance active ADN plasmidique.

 Le produit sera formulé et conditionné par un sous-traitant qui a le statut d’établissement pharmaceutique (transfert procédés de fabrication)

25/03/2010

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Prof. Gérard Tiraby (PDG) Prof. Louis Buscail (PU-PH) Daniel Drocourt, PhD (Biologie moléculaire) Gilles Cambois (Production) Mathieu Maligoy, PhD (Fermentation) Nicolas Ricard (Assurance Qualité) Fabian Gross (CIC Biothérapies)

Contact :

Fabienne VERNEJOUL, PhD Chef de projets R&D (

in vitro et in vivo

) InvivoGen +33 (0)5 62 71 69 39 [email protected]

www.invivogen.com

25/03/2010