Transcript Mikroskopi
Mikroskopi Varför mikroskop? m Celler och cellstruktur 10-3 Mikroorganism 1mm 10-4 Äggcell (0,150,2) Protozoer 10-5 10-6 Ljusmikroskop 1mm Mitokondrier Bakterier 10-7 Elektronmikroskop 10-8 10-9 10-10 Ribosomer Plasmamembran 1nm Ribonukleo protein Aminossyra väteatom virus Olika linstyper • Konvexa linser • Konkava linser • Samlar strålar mot fokus, brännpunkt • kan ge en reell bild • kan användas som lupp, virtuell bild • används som läsglas • sprider ljusstrålarna • ger en virtuell bild • används för närsynthet Princip för http://www.microscopyu.com/tutorials/java/kohler/index.html Bildkonstruktion Skarp bild: För varje punkt i föremålet finns en motsvarande punkt i bilden. • Reella bilder kan fångas på en skärm, kan fås av konvex lins, jmf fotografi. • Virtuella bilder, som ej kan fångas upp av skärm, fås av luppen, glasögon, jmf spegelbild. Olika kvalitets begrepp hos en bild • Upplösning: Mått på hur litet ett avstånd mellan två punktformiga föremål kan vara, utan att dess bild flyter ihop. Litet avstånd för hög upplösning. • Kontrast: Hur tydligt ett objekt framstår mot bakgrunden. • Skärpedjup: Mått på hur bra föremål, som är separerade i djupled, kan avbildas skarp samtidigt. Hög förstoring ger litet skärpedjup Preparering för mikroskopering Principle & use of the Leica SP1600 saw microtome Application Report (Page 2 of 5) Preparat för ljusmikroslop c:a 6 – 8 mm Infärgas med färg som binder till olika strukturer med olika affinitet Preparat för TEM c:a 40 – 80 nm Infärgas med ämnen som innehåller tungmetaller t.ex uran (uranylacetat) eller bly (blycitrat) Mikroskop tekniker • Ljusmikroskop Ljusfälts-mikroskop Mörkfälts-mikroskop Faskontrast-mikroskop Fluorescens-mikroskop Confokal-mikroskop Polarisations-mikroskop • Elektronmikroskop SEM (Scanning Electron Microscope) TEM (Transmission Electron Microscope) Ljusfältsmikroskop Infärgning för att få ökad kontrast Skin section stained with haematoxylin and eosin showing sebaceous glands and hair follicles Ljusfältsmikroskop Ljusabsorption Ljusfältsmikroskop Mörkfältsmikroskop Ljusreflexion Ingen infärgning behövs Mörkfältsmikroskop Live and dry blood darkfield microscopy analysis Brina Eidelson ANP, MLDUK Faskontrastmikroskop Ljuset ur fas Faskontrastmikroskop preparat 0:te ordningen 1:a ordningen Ljuset en kvarts våglängd ur fas fasplatta Ljuset halv våglängd ur fas Faskontrastmikroskop The urine contains epithelial cells, red and white blood cells and baccilli shaped bacteria. Grando, Danilla Faskontrastmikroskop Luciferin-luciferas komplex En ljusbringande substan och ett bakterie bakteriellt enzym (NADH konc. 0,1 nM – 1pM) Eldfluga – Luceferas system ATP konc ner till 0,001pM Energidiagram Fluorescensmikroskop Exitation Emission Acredine Orange 440 480 520 650 Fluorescensmikroskopi objektiv UVlampa Fluorescensmikroskop Konfokalmikroskop Bildkonstruktion i konfokalmikroskop Polarisationsmikroskopi 1 2 1 2 Dubbelbrytande amyloidfiber Polarisationsmikroskop objekt polarisations filter Pankreas Goligi 200 nm SEM mitokondrie (200000X) Guldplatinerat Biol.Inst. Shizuoka Univ. SEM acept.asu.edu/PiN/rdg/elmicr/elmicr.shtml Elektronmikroskop (TEM) Upplösning för olika tekniker TECHNIQUE eye optical microscope LIMITS ”praktiskt” retina diffraction of light scanning electron microscope diffraction of electrons transmission electron microscope diffraction of electrons near-field scanning probe microscopies "aperture" size 1 nm = 10 –6 mm RESOLUTION 200000 nm 70nm 300nm 3 nm 0,1 nm 0.01 - 10 nm Repetition: mikroskoptyper som bygger på ljusinteraktion Ljusfälts- Absorption/brytnig av ljus, biologiskt material måste infärgas Mörkfältsljus reflekteras av objekt i preparatet Faskontrast- fasförskjutning i transperant icke infärgat material ger kontrast Fluorescens- provet inmärkt med fluorofor studier av tumörer bl.a. Polarisations- dubbelbrytande kristaller och fibrer tex Amyloid Repetition elektronmikroskop provet ”belyses” med ljus TEM : Transmission Electron Microscope Bygger på att elektroner bestrålning där en del av electronerna absorberas i materialet SEM: Scanning Electron Microscope Bygger på spridning av electroner mot en plattinerad yta SEM Damm tuss 800x SEM