Transcript 微生物快速检测技术及应用 - 实验室能力验证管理系统

微生物快速检测技术及应用
北京陆桥技术有限责任公司
技术部 于娟娟
主 要 内 容
1
3
北京陆桥公司简介
2
微生物快速检测系列产品
1
 即用型和颗粒剂型培养基
 Easy TestTM快速测试片
 显色培养基在食品微生物检测中的应用
北京陆桥技术有限责任公司
Beijing Land Bridge Technology Co., Ltd.
 北京陆桥技术有限责任公司隶属
于中国检验检疫科学研究院
 成立于1992年，是国家质检系统
成立最早的一家股份制高新技术
企业。
 公司集研发、生产、销售、服务
为一体，同时利用其自营进出口
权代理国外知名公司的检测试剂
及实验室仪器设备。
公司资质





2003年 通过ISO9001质量管理体系认证
2003年 通过ISO/IEC17025实验室认可
北京市高新技术企业
先后承担了多项国家级和市级的科研项目
主持并参与多项国家标准的制修定
陆桥现有系列产品
微生物检测产品
口岸卫检试剂
植物疫病检测产品
理化及农兽药残留检测产品
产品
转基因检测产品
实验室仪器设备及消耗品
产品—微生物检测产品
样品前处理
前增菌
传统检测产品
脱水合成干粉培养基
Usual detection
products
配套试剂及原材料
微量生化管
选择性分离
新型快速检测产品
Rapid or ready
to use
一次性平板培养基
即用型培养基
即用型培养基
Easy
Test 测试片
显色培养基
确认
Text
in here
试验
生化鉴定管
诊断血清
原材料
颗粒剂型培养基
免疫层析快速检测试剂盒
荧光定量PCR
微生物快速检测系列产品（一）
即用型和颗粒剂型培养基
传统干粉培养基的弊端
操作繁琐
需繁琐的制备、灭菌等步骤，费时费力
耗费人力资源
基本为人工操作，工作量大
我们需要更简便、更安全、更省力的
培养基产品类型
粉尘多
危害健康，污染环境
传统干粉培养基的革新
传统干粉培养基
革新
即用型培养基
颗粒剂型培养基
即用型培养基
 即用型培养基是在传统干粉培养基的基础上进行再加工的
一类方便快捷的微生物检测产品。
 由专业人员完成称量、溶解、分装和高压灭菌等培养基配
制工作，再经专业封口、包装等，形成一系列即开即用型
无菌产品；
 使用便捷；
 可保证批间稳定性；
 避免实验用水、高压灭菌条件等造成的差异；
即用性培养基的包装和规格
根据培养基的用途及操作的需求，即用型培
养基产品有多种规格和包装形式。
即用型培养基-一次性平板培养基
 两种规格包装：
10皿/包
2皿/包×10包
 开封使用，接菌培养
 可根据需要加工订制各种
一次性平板培养基。
即用型培养基—袋装产品
固体袋装培养基
液体袋装培养基
即用型袋装液体产品—图示
封口双保险：
塑封和自封条双层封口，
避免漏液、方便操作
特点：
 样品直接加入袋装稀释液或增菌液中
 直接作为均质袋对其进行均质
 均质后，用自封条密封，直接用于培养
即用型袋装固体产品—图示
底面设计独特
可直立摆放
使用：
—沸水加热溶解；
—需要添加附加试剂的品种，用户要自
己添加。
即用型培养基—试管装产品
即用型培养基—九管培养基
即用型九管培养基包括双料和单料两种，均已加入小导管。
双料
颗粒培养基简介
颗粒培养基：颗粒状的干燥培养基，
是在干燥粉末培养基的基础上经过独
特的工艺，颗粒化而成。
产品包装：一盒颗粒剂型培养基中有20袋独立铝箔包装。
产品及使用方法
使用方法：从豁口处撕开袋子，将颗粒培养基倒
入盛有相应蒸馏水或去离子水的容器中，加热煮沸
至完全溶解，高压灭菌后备用。
• 无粉尘，环保
 无粉尘产生，减少粉尘及有毒成分的吸入，保护操作人员；
 减少实验室设备和环境受到的粉尘污染，安全环保。
颗
粒
剂
型
培
养
基
干
粉
培
养
基
• 操作简捷，溶解方便
 无需称量、操作简捷
溶解方便、有效提高工作效率
 干粉培养基加水后，易附着在瓶底或瓶壁上成块。
 颗粒剂型培养基为均匀颗粒剂型，颗粒之间有较大间隙，加水后，能快
速均匀分散于水中，更易溶解。
• 不易吸潮、变质
—独立铝箔密封包装，密封性好，一次性使用完毕；
—颗粒剂型干燥培养基相比干粉培养基具有较小的比表面积，因此
不容易吸潮和变质。
• 成份均一、质量稳定
颗粒剂培养基是通过先进的工艺制备而成，每个颗粒中的成份都是均
匀分布的。 因此，颗粒剂型培养基均匀性更好，质量更稳定。
产品列表
类 别
货 号
名
称
GCM101
平板计数琼脂（PCA）
计数
GCM107
营养琼脂（NA）
平板类
GCM164
孟加拉红培养基
GCM115
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
GCM102
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）
计数
GCM103
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
MPN法类
GCM108
乳糖胆盐发酵培养基
GCM301B
10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤
GCM201
缓冲蛋白胨水（BPW）
GCM306
7.5%氯化钠肉汤
GCM301B
10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤
GCM203
四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
前增菌类
选择性
增菌类
规 格
300mL/袋*20袋/盒
300mL/袋*20袋/盒
225mL/袋*20袋/盒
225mL/袋*20袋/盒
100mL/袋*20袋/盒
大肠埃希氏菌干制生化试剂盒
1、干制试剂盒产品特点
大肠埃希氏菌干制生化鉴
定试剂盒（DBI-01）是DBI干
制生化鉴定系列产品中一个品
种，其使用特制的小巧精致pvc
试剂盒，采用特殊的干制工艺
把一般的液体形式生化试剂制
备成方便储存、运输和实验操
作的干制试剂盒产品。
大肠埃希氏菌干制生化试剂盒
1、干制试剂盒产品特点
产品可以常温储存、运输，
较好的解决了液体形式试
剂需要冷链储存、运输的
限制。
试剂盒有针对性的设定相
关生化项目检测特定菌株
于一块试剂盒上完成，使
用目的明确，操作简便 。
常温保质期为1年。
大肠埃希氏菌干制生化试剂盒
2、干制试剂盒使用方法
A、从包装袋中取出试剂盒，打开盒盖，加入1mL无菌水到试剂盒的长条
槽中。
B、取一内盛2mL无菌水试管，用接种针从平板上挑取单个菌落至无菌水
中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一菌悬液，分别加入试剂盒上的4个圆孔
中，每孔0.2mL，盖上盒盖。
C、置36±1℃下培养24h。
注：该产品包装为：10块试剂条/盒，不包含滴加试剂，滴加试剂需另购。推荐购
买量：15盒/CM1002，15盒/CM1003，5盒/CM1004
微生物快速检测系列产品（二）
Easy TestTM 快速测试片
Easy TestTM测试片
Easy TestTM微生物测试片是一种将脱水培养基附着于
无纺布棉垫上的即用型检测产品。
优点
便捷——即用型产品，省去配制步骤，减少工作量。
 快速——缩短检测时间。24-48小时即出结果，提高实验效率。
 准确——灵敏度高、特异性强。

适用范围
1、食品微生物检测
2、环境卫生监测
空气沉降法检测
涂抹法检测
滤膜法检测
食品微生物检测操作流程
 样品制备
根据标准要求进行样品制备
 以GB 4789.2-2010菌落总数测定为例：
称取25g样品，加入到225mL生理盐水中，均质混匀，此溶液为10-1稀释
液。按国标要求进行10倍梯度稀释，取1mL上述稀释液加入9mL生理盐水
中，依次制成10-2和10-3。
Easy Test 测试片操作流程
1、掀开上层
透明膜
2、取1mL样液缓
缓加入纤维垫上
3、5s后，待
样液完全吸收
4、缓缓将透明
膜盖回
5、接种完成，
正置培养
ET001 菌落总数测试片
培养条件：
36±1℃/48±2h
菌落颜色：红色
ET003 金黄色葡萄球菌测试片
S.aureus
培养条件：36±1℃/2430h
菌落颜色：菌落中心黑色，
周围有蓝绿色晕圈
ET004 大肠杆菌/大肠菌群测试片
培养条件：36±1℃/24±1h
大肠菌群：蓝绿色+紫色
大肠杆菌：紫色
ET005 酵母菌/霉菌测试片
培养条件：26±1℃/48±2h
菌落颜色：红色，偶见暗红色、
橙色和黑色等其他颜色。
注：由于霉菌酵母菌多具有产色素能力，
所以菌落受色素影响而呈现多种颜色。
Yeast/Mold
ET006 沙门氏菌测试片
Salmonella
 培养条件：36±1℃/24±1h
 沙门氏菌：蓝绿色
 大肠菌群：靛蓝或蓝紫色
Easy TestTM 快速测试片产品列表
产品编码
名
称
规
格
ET001
菌落总数测试片Aerobic Count
25片/包
ET002
大肠菌群测试片Coliform
25片/包
ET003
金黄色葡萄球菌测试片Staph.aureus
25片/包
ET004
大肠杆菌/大肠菌群测试片E.coli/Coliform
25片/包
ET005
酵母菌/霉菌测试片Yeast and Mold
25片/包
ET006
沙门氏菌测试片Salmonella
25片/包
微生物快速检测系列产品（三）
ESM系列显色培养基
显色培养基技术简介
显色培养基的原理
• 显色/荧光培养基是一类微生物生长培养基，含有与色原
体（颜色反应）或荧光基团（光反应）相连接的酶底物。
• 目标微生物自身代谢产生的种属特异性酶与相应酶底物反
应，释放发色基团使培养物显色，或者释放荧光基团在紫
外波长下使培养物显现荧光。
• 酶底物是种属特异性的，通过调整培养体系可以进一步提
高培养基的选择性，某些情况下目标微生物不需要进一步
的确证试验。
优点
可有效缩短
检测时间
仅18-24h就可得到初步检验结果。
降低对检测
人员技术水
平要求
显色明显易于观察，菌落外观易于
辨认。
减少后期鉴
定工作量
酶与底物显色反应特异性强，降低
假阳性率。
常见检测项目
标准
沙门氏菌、单增李斯特氏菌、阪崎肠杆菌、
O157、副溶血性弧菌、志贺氏菌
其他
金黄色葡萄球菌、大肠菌群、大肠杆菌
——致病菌检测流程
前增菌/选择性增菌
选择性分离
生化或/及血清学鉴定
报告
显色培养基在检测中的应用
1 沙门氏菌检测
在传统培养基上与沙
门特征相近的菌很多。
向客户推荐使用显色
培养基代替HE、XLD，
可以大大减少后期生
化鉴定的工作量。
沙门氏菌显色培养基
培养条件：36±1℃/18-24h
沙门氏菌：紫红色菌落
大肠杆菌：蓝绿色菌落
奇异变形杆菌：无色菌落
弗氏志贺氏菌：无色菌落
金黄色葡萄球菌：抑制
显色培养基在检测中的应用
2 单增李斯特氏菌检测
李
斯
特
氏
菌
显
色
培
养
基
LB1増菌
LB2増菌
PALCAM和显色
生化鉴定
结果
在PALCAM等传统培养
基上，无法将单增李斯
特与李斯特菌属内的其
他李斯特菌相区分；
李斯特菌显色培养基，
可以直接鉴定到种，将
单增筛选出来，且准确
率高；
培养条件：36±1℃/18-24h
 李斯特氏菌属：蓝绿色菌落
 单增李斯特氏菌：蓝绿色菌落,
周围有白色不透明晕圈
 绵羊李斯特氏菌：同单增一样
 金黄色葡萄球菌：黄色菌落
 大肠杆菌：抑制
显色培养基在检测中的应用
国标
3 阪崎肠杆菌检测
行标
BPW增菌
无菌水
DFI
改良LST肉汤
EE肉汤
显色（DFI）
显色
生化鉴定
生化鉴定
结果
结果
相同点：阪崎肠杆菌均为蓝绿色菌落
不同点：配方不一致；所属标准不同
主要根据客户使用标准，选择用哪种产品
琼
脂
阪
崎
肠
杆
菌
显
色
培
养
基
显色培养基在检测中的应用
4 大肠杆菌O157检测
大肠O157显色培养基
培养条件：36±1℃/18-24h
大肠O15:H7：（浅)紫红色
大肠杆菌：铁蓝色
其他菌：抑制或呈无色、蓝绿
色、铁蓝色
显色培养基在检测中的应用
5 副溶血性弧菌检测
APW増菌液
显色培养基或TCBS
生化鉴定
结果
在传统培养基TCBS上
拟态、创伤弧菌与副
溶血性弧菌都是绿色
菌落，不能区分
并且绿色菌落容易被
大量黄色杂菌掩盖，
造成漏检
弧菌显色培养基
培养条件：36±1℃/18-24h
副溶血性弧菌：紫红色
霍乱弧菌：蓝绿色
创伤弧菌：蓝绿色
显色培养基在检测中的应用
6 志贺氏菌检测
志贺氏菌显色培养基
 原理
利用糖代谢和特异性酶，针
对非志贺菌产生的生化反应，
分离出不同颜色的非目标菌
落。
 目标菌
白色，菌落大小1-3mm，菌
落周围为紫红色
 非目标菌
黄色、蓝绿色等各种颜色
 培养条件
36 ℃±１℃，20 h～24 h
显色培养基在检测中的应用
7蜡样芽孢杆菌检验
蜡样芽孢杆菌：
蓝绿色菌落，菌落
周围有白色晕圈。
显色培养基在检测中的应用
蜡样芽孢杆菌
ATCC11778
7蜡样芽孢杆菌检验
枯草芽孢杆菌
ATCC11774
短小芽孢杆菌
ATCC 14884
ESM显色培养基系列产品
货号
名称
规格（/瓶）
ESM001
大肠杆菌显色培养基（ECA）
1000mL
ESM002
大肠杆菌和大肠菌群液体显色培养基（LECC）
1000mL
ESM003
大肠杆菌和大肠菌群显色培养基（ECCA）
1000mL
ESM004
大肠菌群显色培养基（CA）
1000mL
ESM005
沙门氏菌显色培养基（SA）
1000mL
ESM006
李斯特氏菌显色培养基（LA）
1000mL
ESM007
大肠杆菌O157显色培养基
1000mL
ESM008
阪崎肠杆菌显色培养基
1000mL/200g
ESM009
弧菌显色培养基（VA）
1000mL
ESM010
金黄色葡萄球菌快速鉴定培养基
500mL
ESM011
mEI琼脂基础（肠球菌显色培养基基础）
1000mL
ESM012
志贺氏菌显色培养基
1000mL
ESM013
蜡样芽孢杆菌显色培养基
1000mL
Thank you !
北京陆桥技术有限责任公司
www.Beijinglandbridge.com
销售服务电话：0532-82689263
技术服务电话：15315026353
技术部邮箱：
[email protected]