Transcript Document
А.М. Попов, Т.Ю. Вержбицкая, Г.А. Цаур, Е.В. Шориков, С.В. Цвиренко,
Л.И. Савельев, Л.Г. Фечина
Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток при
В-линейном остром лимфобластном лейкозе у детей во
время индукционной терапии по протоколу
ALL-MB-2008
Областная детская клиническая больница №1, Екатеринбург
Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург
Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург
«Национальные дни лабораторной медицины России», 4-6 октября 2011, Москва
Минимальная остаточная болезнь
(minimal residual disease, MRD) –
состояние, обусловливающее
развитие рецидива и связанное с
сохранением опухолевых клеток в
крайне низких концентрациях,
ниже предела чувствительности
морфологических методов
Относительное количество опухолевых клеток
1
10-1
Предельная
чувствительность
цитологического
исследования
10-2
10-3
10-4
10-5
Предельная
чувствительность
проточной цитометрии
и ПЦР
10-6
10-7
0
0
1
Терапия
2
3
4
5
Время наблюдения (годы)
Основные методы мониторинга MRD
Количественная полимеразная
цепная реакция
Определение химерного гена
Определение химерного транскрипта
Определение клональных перестроек генов
тяжелых цепей ИГ и ТкР
Многоцветная проточная
цитометрия
Применение проточной
цитометрии для мониторинга
MRD
Определение лейкозассоциированного
иммунофенотипа (LAIP)
Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во
время терапии
G. Gaipa et al, Leukemia, 2005
A.J. van der Sluijs-Gelling et al, Leukemia, 2005
G. Gaipa et al, Leukemia, 2005
M. Borowitz et al, Cytometry B, 2005
G. Gaipa et al, Cytometry B, 2008
M.N. Dworzak et al, Blood, 2008
M.N. Dworzak et al, Cytometry B, 2010
Цель исследования – оценить изменения
экспрессии опухолевыми клетками CD10,
CD34, CD19, CD20, CD45 и CD58 на 15-й день
терапии по протоколу ALL-MB-2008 и
значимость этих изменений для мониторинга
MRD
Пациенты и методы исследования
22 пациента с CD10(+) BCP-ALL и величиной MRD на 15-й день
терапии > 0,01%
9-цветная проточная цитометрия (FACS Aria, BD):
CD58 (AICD58-FITC, BC)
CD11a (LFA-1-PE, BD)
CD34 (581-PE-TexasRed, BC)
CD38 (HIT2-PerCP-Cy5.5, BD)
CD10 (HI10a-PE-Cy7, BD)
CD19 (SJ25C1-APC, BD)
CD20 (L27-APC-Cy7, BD)
CD45 (2D1-AmCyan, BD)
Syto 41 (Invitrogen)
Оценивали:
Среднюю интенсивность флюоресценции (MFI)
Коэффициент вариации (CV)
Долю позитивных клеток (%)
Выделение опухолевых клеток
SSC
CD10
Syto 41
Опухолевые
клетки
CD45
Обратное
гейтирование
Ядросодержащие
клетки
SSC
SSC
CD19
FSC
CD19(+)-клетки
Нормальное созревание В-лимфоцитов
CD34
CD10
CD20
BCP 1
CD45
BCP 2
TdT
CD99
CD38
BCP 3
Зрелые
В-лимфоциты
CD44
CD11a
CD58
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
CD10
p = 0,0030
CD19
p = 0,0033
CD20
CD34
p = 0,0273
p = 0,0007
CD45
CD58
p = 0,0001
p = 0,0017
Изменения иммунофенотипа (В-лимфоциты)
CD20
CD19
p = 0,0013
p = 0,1060
CD45
CD58
p = 0,0130
p = 0,0067
15-й день
CD10
Диагноз
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
CD45
CD34
CD58
15-й день
CD10
Диагноз
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
CD19
CD45
CD20
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
изменения распределения клеток
CD20
CD10
p = 0,1913
CD34
p = 0,0364
p = 0,0008
CD45
CD58
p = 0,0003
p = 0,3443
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
15-й день Диагноз
изменения распределения клеток
MFI = 168529
CV = 39.9%
MFI = 13379
CV = 53.8%
MFI = 245
CV = 118.9%
MFI = 37724
CV = 70.8%
MFI = 2912
CV = 149.3%
MFI = 1318
CV = 56.4%
CD10
CD34
CD45
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
изменения доли позитивных клеток
CD20
CD34
p = 0,0015
p = 0,0003
CD45
p = 0,0002
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
Диагноз
изменения доли позитивных клеток
87,4%
15-й день
CD10
24,5%
20,4%
90,7%
18,2%
84,8%
CD20
CD45
CD34
Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во
время индукционной терапии
CD10
CD20
p = 0,0071
p = 0,0069
CD19
CD45
CD34
p = 0,0001
CD58
p = 0,0001
p = 0, 2117
p = 0,0005
Michael N. Dworzak, Angela Schumich, Dieter Printz, Ulrike Pötschger,
Zvenyslava Husak, Andishe Attarbaschi, Giuseppe Basso, Giuseppe Gaipa,
Richard Ratei, Georg Mann and Helmut Gadner
CD20 up-regulation in pediatric B-cell precursor
acute lymphoblastic leukemia during induction
treatment: setting the stage for anti-CD20 directed
immunotherapy
Blood, 2008, Vol. 112, p. 3982-3988
CD10
Пациент Б. (14 лет)
День 0
День 15
День 36
перед HRI
перед HRV
перед HRIV
перед HRIII
перед HRII
CD20
Пациент С. (11 месяцев)
CD10
День 36
День 0
День 15
День 85
День 43
CD20
Выводы
На 15-й день терапии по протоколу ALL-MB-2008 происходят
существенные изменения иммунофенотипа опухолевых клеток
Основными тенденциями изменения иммунофенотипа
опухолевых клеток являются снижение экспрессии CD10, CD34,
CD58 и повышение экспрессии CD19, CD20, CD45
Изменения иммунофенотипа усложняют мониторинг МОБ, так
как уменьшают различия между нормальными и опухолевыми
клетками
Благодарю за внимание!